微生物基础知识2

微生物基础知识微生物基础知识2 2 要点提纲要点提纲 n n 凝集试验凝集试验 n n 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 n n 大肠埃希菌大肠埃希菌 n n 乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌 n n 白色假丝酵母菌白色假丝酵母菌 凝集试验 n凝集试验：颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结 合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。玻片法是一种定性 试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种 时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数 分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快 速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO 血型等。 正离子 负离子层 负电荷负电荷 抗原 负电荷 抗原 细菌和红细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围 吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松 散的负离子层，构成一个双层离子云。在松散层内界 和外界之间的电位差形成Z电位。溶液中的离子强度 愈大，Z电位也就愈大。Z电位使颗粒相互排斥。当特 异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用 克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒聚集在一起 抗原抗体反应的原理 基本原理： 特异性（AD-HVR） 可见性（凝集、沉淀、溶血等） 结合力(4种) 高度互补 紧密接触 产生 结合力 抗原 抗体 带电离子 异性相吸 静电引力 分子极化范德华引力 形成氢键 氢键引力 形成疏水基团 疏水作用力 作用最小 最具特异性 作用最大 抗原抗体结合 可见反应 比例合适 血型 血型红细胞抗原血清中的抗体 AAB BBA ABAB无AB O无ABAB 血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板及血浆 蛋白）表面的抗原类型。通常所说的血型是指红细胞膜上 特异性抗原类型，而与临床关系最密切，人们所熟知的是 红细胞ABO血型系统及Rh血型系统。 金黄色葡萄球菌 n定义：在Baird Paiker培养基或血平板上生长良好， 分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性，革兰氏阳性 葡萄状球菌。（GB/T18204.4-2013) n标准限值：理发店、美容店卫生标准 9666-1996规定 美容工具、理发工具、胡刷用后应消毒，不得检出大肠菌 群和金黄色葡萄球菌。 生物学性状 n形态和染色 革兰氏染色阳性，球形，直径约1微米，呈葡 萄串状排列。无芽孢，无鞭毛，无荚膜。在某些化学物质 如青霉素作用下，可裂解或变成L型菌。在衰老、死亡、 陈旧培养物中或被中性粒细胞吞噬后常转为革兰阴性。 n培养特性 需养或兼性厌氧。营养要求不高，普通培养基 37摄氏度生长良好。 n生化反应 多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸 不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶（过氧化 氢酶）阳性，可与链球菌相区分。 所致疾病 n化脓性感染 皮肤化脓性感染、各种器官 化脓性感染、全身感染如败血症、脓毒 血症 n毒素性疾病 食物中毒、烫伤样皮炎综合 征、毒素性休克综合征 毛囊炎 脓疱疮 金葡菌性烫伤样皮肤综合征 微生物学检测 n增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤 n接种BP或血平板 n革兰氏染色、镜检 n甘露醇发酵试验 n血浆凝固酶试验 增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤 接种BP或血平板 革兰氏染色、镜检：革兰阳性、 葡萄串珠状球菌 n革兰染色： n结晶紫染色 n卢氏碘液媒染 n酒精脱色 n沙黄复染 金黄色葡萄球菌电镜观察 n葡萄串 珠状球 菌 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 0.5ml灭菌生理盐 水与冻干血浆混 匀溶解，挑取适 量菌苔与溶解血 浆混匀，36培 养，6小时内观察 ，如果血浆里有 凝块现象，即为 凝固酶阳性。 肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌 是一大群生物学性状相似的革兰阴性是一大群生物学性状相似的革兰阴性 杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦 存在于土壤、水和腐物中。存在于土壤、水和腐物中。 目前已有目前已有4444个属，个属，170170多个种。但该多个种。但该 科引起人类科引起人类9595以上感染的菌种却不到以上感染的菌种却不到 2020个。个。 肠杆菌科细菌共同生物学特性肠杆菌科细菌共同生物学特性 ： 1 1 . .形态与结构形态与结构 中等大小中等大小G G 杆菌。大多有菌毛， 杆菌。大多有菌毛， 多数有周鞭毛，少数有荚膜，不产生芽胞。多数有周鞭毛，少数有荚膜，不产生芽胞。 2 2. .培养培养 兼性厌氧或需氧。兼性厌氧或需氧。 3 3. .生化反应生化反应 乳糖发酵试验可初步鉴别志贺菌、乳糖发酵试验可初步鉴别志贺菌、 沙门菌等致病菌和其他大部分非致病肠道杆菌沙门菌等致病菌和其他大部分非致病肠道杆菌 ，前二者不发酵乳糖。，前二者不发酵乳糖。 4 4. .抗原结构抗原结构 主要有菌体主要有菌体O O抗原、鞭毛抗原、鞭毛H H抗原和荚抗原和荚 膜抗原。膜抗原。 5 5. .抵抗力抵抗力 对理化因素抵抗力不强。对理化因素抵抗力不强。 6 6. .变异变异 肠杆菌科细菌易出现变异菌株，其中最肠杆菌科细菌易出现变异菌株，其中最 常见的是耐药性变异。常见的是耐药性变异。 埃希菌属埃希菌属 埃希菌属（埃希菌属（EscherichiaEscherichia）有）有6 6个种，只有大个种，只有大 肠埃希菌（肠埃希菌（ E E. . colicoli）是临床最常见、最重）是临床最常见、最重 要的一个菌种。要的一个菌种。 大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群 在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机 会致病菌，引起肠道外感染会致病菌，引起肠道外感染 一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎 在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检 测指标。测指标。 志贺菌属志贺菌属 感染几乎只局限于肠道，一般不感染几乎只局限于肠道，一般不 侵入血液。侵入血液。 典型的急性细菌性痢疾：潜伏期典型的急性细菌性痢疾：潜伏期1 1 3 3天，突然发病，常有发热、天，突然发病，常有发热、 腹痛、脓血黏液便，伴有里急后腹痛、脓血黏液便，伴有里急后 重（重（tenesmustenesmus）。）。 沙门菌属沙门菌属 n n 1 1. .肠热症肠热症( (enteric fever,enteric fever, typhoid fevertyphoid fever) ) 包括伤寒包括伤寒 沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌 （原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤 寒。寒。 n n 2.2.胃肠炎（食物中毒）胃肠炎（食物中毒）常见食物主要为肉类食品、蛋常见食物主要为肉类食品、蛋 类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污 染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。 n n 3.3.败血症败血症 多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染 后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重 n n 4.4.无症状带菌者无症状带菌者 约约1 15 5伤寒或副伤寒患者，在伤寒或副伤寒患者，在 症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为 无症状（健康）带菌者。无症状（健康）带菌者。 其他菌属 n一、克雷伯菌属 n二、变形杆菌属 n三、肠杆菌属 n四、沙雷菌属 n五、枸橼酸杆菌属 n六、摩根菌属 总大肠菌群 n一个卫生学概念，作为饮水、食品等粪 便污染的指标之一 n总大肠菌群：指在37摄氏度24小时内发酵 乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌（GB/T5750.12-2006 之2.1）。包括埃希氏菌属、枸橼酸杆 菌、克雷伯杆菌属及肠杆菌属等 n标准限值：生活饮用水卫生标准 GB5749-2006规定总大肠菌群、耐热大肠 菌群、大肠埃希氏菌不得检出 大肠埃希氏菌 n大肠埃希氏菌多管发酵法：多管发酵法总大肠 菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5 培养24小时产生-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底 物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细 菌，以此来检测水中的大肠埃希氏菌的方法。 （GB/T5750.12-2006之4.1） 大肠埃希氏菌 n大肠埃希氏菌（E. coli）通常被称为大肠杆菌，是 Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内， 一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病 菌。 n直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆 菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽）， 常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核微生 物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类 ：肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ ETEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠出血性大肠 杆菌（EHEC）、肠黏附性大肠杆菌（EAEC）和弥散粘 附性大肠杆菌(DAEC)。 耐热大肠菌群和粪大肠菌群 n 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“ 粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念； 而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般 欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范 围比粪大肠菌群范围大。 n 项目依据定义 耐热大肠菌 群 NMKL、ISO 在44.5培养，24h天内能产酸 产气的细菌 粪大肠菌群NMKL 在胰蛋白胨肉汤中于44.5， 24h内产生吲哚的耐热大肠菌群 AOAC 于LST中36培养48h内产气，并 于EC内培养4424h产气的一群 细菌 n在认证活动中，经常有实验室将耐热大 肠菌群等同于粪大肠菌群，标准的解释 比网络解释更具权威性。 耐热大肠菌群的卫生学意义 n 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生 物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存 在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直 接的危害。 作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌 相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便 是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以 粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志 贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品 既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。 通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便 中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大 肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污 染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说 明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可 能性更大。 耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪 便污染的程度，且检测方法比大肠杆菌简单地多，而受到重视 总大肠菌群的检测（GB/T5750.12-2006之2.1） n乳糖发酵试验（15管法）：根据污染程度，对水样 进行稀释，选择3个适当的稀释度，每个稀释度接 种5管。 n培养基：乳糖蛋白胨培养液，有单料、双料之分。 （GB/T18204.4-2013检测用品用具的大肠菌群用到 的是乳糖胆盐发酵培养基） n分离培养：伊红美蓝培养，革兰氏染色，镜检 n证实试验：挑取以上革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落 ，进行乳糖蛋白胨培养液复发酵。 乳糖发酵 接种EMB培养基 n深紫黑色，有 金属光泽的菌 落 n深紫黑色，不 带或略带金属 光泽的菌落 n淡紫红色，中 心较深的菌落 革兰氏染色、镜检：革兰阴 性、无芽孢杆菌 证实试验 n初发酵产酸产气，革兰氏染色阴性无芽 孢杆菌，同时接种乳糖发酵管，37摄氏 度24小时产酸产气者，即证实为有大肠 菌群存在 结果报告 n查MPN（Most Proble Number，最可能数） 检索表，报告每 100ml水样中的总大 肠菌群可能数MPN n稀释样品查表后乘以 稀释倍数报告之 n所有乳糖发酵管均阴 性时，报总大肠菌群 未检出 nMPN检索表应用到的 是泊松分布的统计方 法 -溶血性链球菌 集中空调通风系统送风中采集的样品，经3537， 2448h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。（ WS394-2012附录F） 标准限值： WS394-2012规定-溶血性链球菌不得检出 根据溶血现象将练球菌分类根据溶血现象将练球菌分类 溶血环现象溶血环现象名称名称类别类别致病性致病性 草绿色溶血环草绿色溶血环溶血溶血甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌多为条件致病菌多为条件致病菌 完全溶血环完全溶血环溶血溶血 乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌 溶血性链球菌溶血性链球菌 致病力强致病力强 不溶血不溶血 丙型链球菌不溶血性丙型链球菌不溶血性 链球菌链球菌 无致病性无致病性 A A群（化脓性）链球菌（群（化脓性）链球菌（溶血性链球菌 ） n n 本属细菌的代表种，致病性强，对人致病本属细菌的代表种，致病性强，对人致病 的链球菌有的链球菌有90%90%属此种。属此种。 1.1.形态与染色形态与染色 球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（G G ），无芽胞，无鞭毛。 ），无芽胞，无鞭毛。 2.培养要求高：血平板或含血 清培养基 3.生化反应 n n 分解葡萄糖，产酸不产气。分解葡萄糖，产酸不产气。 n n 分解葡萄糖。分解葡萄糖。 n n 不分解菊糖，不被胆汁溶解（可鉴别甲不分解菊糖，不被胆汁溶解（可鉴别甲 型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。 n n 链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。 4.抵抗力 一般链球菌均可在一般链球菌均可在6060被杀死，对常用被杀死，对常用 消毒剂敏感。在干燥尘埃中生存数月。消毒剂敏感。在干燥尘埃中生存数月。 乙型链球菌对青霉素、红霉素，四环乙型链球菌对青霉素、红霉素，四环 素、杆菌肽和磺胺药都很敏感。素、杆菌肽和磺胺药都很敏感。 5 5. .所致疾病所致疾病 A A群链球菌引起的疾病约群链球菌引起的疾病约 占人类链球菌感染的占人类链球菌感染的90%90% 淋巴管炎、淋巴管炎、 蜂窝组织炎蜂窝组织炎 、扁桃体炎、扁桃体炎 等。等。 猩红热猩红热 （红色杨梅舌）（红色杨梅舌） (3)(