抗体检测技术规程ppt课件

HIV抗体检测实验室技术规程 天津市CDC HIV确证中心实验室 郑敏娜 2013.6.25 HIV病毒感染人体过程及免疫学机制 o明确HIV感染者（诊断） n控制传播 n及早医学干预 n血液筛查 o流行病学调查、高危人群监测 o开展VCT的基础 o职业保护 HIVHIV抗体检测在艾滋病防治中的作用抗体检测在艾滋病防治中的作用 主要内容 o HIV抗体检测的相关规范性文件 o HIV抗体检测的方法和注意事项 o HIV抗体确证实验的相关规程和结果解释 o 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 HIV抗体检测的相关规范性文件 o 医疗机构临床实验室管理办法卫医发 200673号 o 全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发 2006218号 o 全国艾滋病检测技术规范(2009年版) HIV抗体检测的相关规范性文件 o 全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发 2006218号 o 检测工作要求 第十二条 艾滋病检测实验室应在规定的职 能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法 规和有关规范。检测技术及程序应符合全 国艾滋病检测技术规范的要求。 HIV抗体检测的方法和注意事项 o HIV抗体检测的主要方法金标准 o 包括初筛实验和确证实验 p初筛实验: p试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准，在有效期内的，批批检合 格 p敏感性和特异性好： p方法包括：ELISA，化学发光法和快速检测法（免疫层析，颗粒凝集等方 法） p样本：血清、血浆；干血斑；唾液；尿液 HIV抗体检测的方法和注意事项 快速免疫层析 明胶颗粒凝集法（PA）HIV ELISA 试剂质量评估：/n16/n1193/n4073/719991.html 1. 严格遵照试剂说明书进行试验检测 2. 正确使用仪器设备 3. 正确判读试验结果 4. 作好实验记录 试验操作注意事项 HIV抗体检测技术要求 建立标准操作程序 禁止肉眼判读！ 保证酶标仪，洗板机正常运转 保证加样器准确 选择高质量的与加样器配套的TIP头 使用有效期内的试剂 保证样品质量 影响ELISA测定的因素 o试剂盒的因素：妥善保存试剂 在有效期内使用 o试验操作 形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在ELISA板孔 的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产 生气泡。 严格按试剂说明书操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作过程中集中精力：避免加样错误 注意事项 o保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。 o ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非特异 性反应。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可 减少假阳性的机会。 o进行ELISA试验时，必须用酶标仪进行测定，不得目测结果 。使用酶标仪时，要避免酶标孔内产生气泡，影响判读结果 。 ELISA操作中的注意事项 o 试剂准备 o 加样 o 温育 o 洗板 o 显色 o 比色 操作示范请看教学片 ELISA试验假阳性产生原因？ o样品加错位置，标本搞错 o洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔 o洗板机内部管道有真菌生长 o实验中，实际孵育时间过长，温度过高 o待测标本溶血或含有血细胞。 o待测标本长菌或其它原因混浊。 o其它原因：与试验操作无关 HIV抗体筛查和复检的流程 与2004版检测规 范的不同 报告HIV抗 体检测阴性 HIV感染产妇所生婴幼儿的抗体检测 HIV抗体确证实验的相关规程和结果解释 o 复检阳性或一阴一阳的样本 确认实验 送确认前，应核对身份， 补充个人信息（姓名，身 份证号等） 填写”HIV抗体 复检检测单” 样本“三级包装” 第一层：带盖的试管 第二层：防水，防漏 第三层：包装箱（内 附缓冲材料） HIV抗体确认实验 o 包括： 免疫印迹实验(WB) 条带免疫试验(LIA) 免疫荧光试验(IFA) 放射免疫沉淀试验(RIPA) HIVHIV抗体确认实验结果抗体确认实验结果 a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d a b c d gp160gp160 gp120gp120 p66 p66 p55p55 p51 p51 gp41gp41 p39p39 p31 p31 P24P24 p17p17 血清对照血清对照 HIV-2HIV-2特异带特异带 HIVHIV抗体确认实验结果抗体确认实验结果 HIV抗体确证实验的流程 HIV抗体检测的样本保存 o 用于抗体和抗原检测的血清和血浆样本： 1周内 2-8保存 1周 -20 保存 o 筛查阳性样本：送确证 o 筛查阴性样本：根据具体情况，至少1-2个 月 o 确证样品：保存10年以上 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 o 实验室布局不合理，没有严格分区；没有标识 应设严格分区（污染区、半污染区和洁净区）；生物安全标应设严格分区（污染区、半污染区和洁净区）；生物安全标 识识 o 个别实验室设备不全，没有安全柜 o 仪器没有定期校准 酶标仪酶标仪 / / 洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物安全柜洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物安全柜 每年校准，每季度期间核查每年校准，每季度期间核查 o 没有HIV实验室生物安全管理制度和SOP 实验活动的基本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并实验活动的基本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并 有记录有记录 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 o没有质控记录：很多实验室都有 o人员流动性大，经培训的专业技术人员严重不足，部分人员未经 专业技术培训就上岗 保证实验室负责人和主要技术 人员的稳定，两年一培训，考核合格，持证两年一培训，考核合格，持证 上岗上岗 o实验室技术人员生物安全意识淡薄 增强安全意识，做好防护，保护自身安全 o实验室原始记录不规范，缺乏可溯源性 应体现加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测人和复核人应体现加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测人和复核人 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 o 复检阳性结果的报告问题 筛查实验阴性直接出报告；复检后为阳性或一阴一阳的样本报告为“HIV抗体代确 证”，用“HIV抗体复检检测单”进行报告 o 送错样本 认真核对样本，补充个人信息，必要时采集第二份血 o 质控品的使用时限 -20 有效期内均可使用；解冻后的1周内用完 o 送检样本包装不合格