GBT 18932.5-2002.pdf

i cs 6 7 . 1 8 0 .1 0 x 3 1 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 gb / t 1 8 9 3 2 . 5 - 2 0 0 2 蜂蜜中磺胺醋酞、 磺胺毗睫、 磺胺甲基 喀咤、 磺胺甲氧哒嗓、 磺胺对甲氧喀睫、 磺胺氯哒嗓、 磺胺甲基异a 恶 哇、 磺胺二 甲氧 陡残留量的测定方法 液相色谱法 me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f s u l f a c e t a m i d e , s u l f a p y r i d i n e ， s u l f a m e r a z i n e , s u l f a m e t h o x y p y r i d a z i n e , s u l f a me t e r , s u l f a c h l o r o p y r i d a z i n e , s u l f a m e t h o x a z o l e a n d s u l f a d i m e t h o x i n e r e s i d u e s i n h o n e y -l i g u i d c h r o m a t o g r a p h i c m e t h o d 2 0 0 2 一 1 2 一 3 0 发布 20 0 3 一 0 6一 01 实 施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 gb / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 前言 g b / t 1 8 9 3 2 -2 0 0 2分为 1 2 个部分， 本部分为第 5 部分。 g b / c 1 8 9 3 2 的本部分修改采用加拿大国家标准a c c - 0 1 9 - v 3 . 0 蜂蜜中 磺胺嗤哇和磺胺类兽药残 留量测定方法高效液相色谱荧光法 ， 修改的主要内容是: 测定品种所有调整; 增加了 苯磺酸型阳离子交换柱和o a s i s h l b 柱净化步骤; 使用的液相色谱柱和流动相不同 本部分遵循 gb / t 1 . 1 -2 0 0 0 标 准化工作 导则第 1部分: 标 准的结构和编写规则 和 g b / t 2 0 0 0 1 . 4 -2 0 0 1 标准编写规则第4 部分: 化学分析方法 的编写规则。 本部分的附录 a、 附录 b为资料性附录。 本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分起草单位: 中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分主要起草人: 庞国芳、 曹彦忠、 范春林、 张进杰、 李学民、 林忠。 本部分系首次发布的国家标准。 gi 3 / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 蜂蜜中磺胺醋酞 、 磺胺毗吮、 磺胺甲基 喀咤、 磺胺 甲氧哒嗦、 磺胺对甲氧啥咤、 磺胺氯哒嗦、 磺胺 甲基异pa 哇、 磺胺二 甲氧喀咙残留量的测定方法 液相色谱法 范 围 g b / t 1 8 9 3 2 的本部分规定了蜂蜜中磺胺醋酞、 磺胺毗吮、 磺胺甲基嗜陡、 磺胺甲氧哒嗓、 磺胺对甲 氧嗜p)le. 磺胺氯哒嗦. 磺胺甲基异9 14. 哇、 磺胺二甲氧嗜陡残留量液相色谱测定方法。 本部分适用于蜂蜜中磺胺醋酞. 磺胺毗陡. 磺胺甲基嗜陡、 磺胺甲氧哒嗦、 磺胺对甲氧ft p)t. 磺胺氯 哒嚓、 磺胺甲基异嗯哇、 磺胺二甲氧啼陡残留量的测定。 本部分的方法检出限: 磺胺醋酞、 磺胺毗pt . 磺胺甲基啼pgi 磺胺甲氧哒嗦、 磺胺对甲氧p吮 . 磺胺氯 哒嗦、 磺胺甲基异嗯哇、 磺胺二甲氧啼陡均为0 . 0 1 0 m g / k g , 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 g b / t 1 8 9 3 2的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日 期的引用文 件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本部分， 然而， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件， 其最新版本适用于本 部 分。 g b / t 6 3 7 9 -1 9 8 6 测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性 ( n e q i s o 5 7 2 5; 1 9 8 1 ) g b / t 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法( n e q i s o 3 6 9 6 : 1 9 8 7 ) 原理 试样中磺胺类药物残留用磷酸溶液( p h=2 ) 提取， 过滤后， 经阳离子交换柱和 o a s i s hl b或相当 的固相萃取柱净化， 用甲醇洗脱并蒸干， 残渣用 。 . 1 mo l / i盐酸溶液溶解。用荧光胺衍生后， 样品溶液 供配有荧光检测器的高效液相色谱测定 ， 外标法定量。 试剂和材料 除另有说明外， 所用试剂均为分析纯， 水为 g b / t 6 6 8 2 -1 9 9 2 规定的一级水。 4 . 1 甲醇: 一级色谱纯 4 . 2 乙睛: 一级色谱纯。 4 . 3 磷酸: 优级纯。 4 . 4 庚烷磺酸钠( c , h, na o , s hz 0) : 一级色谱纯。 4 . 5 盐酸。 4 . 6 乙酸钠。 gb / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 47丙酮 。 4 . 8 荧光胺。 49 磷酸二氢钾: 优级纯 4 . 1 0 磷酸氢二钾 : 优级纯。 4 . 1 1 磷酸溶液: p h=2 , 1 0 0 0 m l水中加人 1 ml磷酸( 4 . 3 ) ， 在 p h计上再滴加磷酸以调节溶液 p h = 2, 4 . 1 2 磷酸盐缓冲溶液: 0 . 2 mo l/ l , p h=8 。分别称取 1 . 0 5 g 磷酸二氢钾( 4 . 9 ) 和 3 3 . 4 6 g 磷酸氢二钾 ( 4 . 1 0 ) ， 用水溶解， 定容至 1 0 0 0 ml , 4 . 1 3 庚烷磺酸钠溶液: 。 . 5 mo l / i。称取 1 1 g庚烷磺酸钠( 4 . 4 ) ， 用水溶解， 定容至 1 0 0 r o t, 4 . 1 4 盐酸溶液: 0 . 1 mo t / 工 。吸取盐酸( 4 . 5 ) 8 . 2 5 ml用水稀释至 1 0 0 0 ml e 4 . 1 5 乙酸钠缓冲溶液: 0 . 6 mo l/ i 。称取4 . 9 2 g乙酸钠( 4 . 6 ) ， 用水溶解， 定容 1 0 0 ml ， 并用盐酸调至 p h=3 . 0 . 4 . 1 6 荧光胺丙酮溶液: 0 . 0 2 y , 。称1 0 . 0 m g 荧光胺( 4 . 8 ) ， 用丙酮溶解， 定容至5 0 m l , 溶液有效期为 3 0天 。 4 . 1 7 阳 离子交换柱: 苯磺酸型， 5 0 0 m g , 3 m i 。 用前分别用5 m l甲醇和 1 0 m l 水处理， 保持柱体 湿润 。 4 . 1 8 o a s i s hl i 3 柱或相当者: 6 0 mg , 3 ml 。用前分别用 3 r o t甲醇和6 mi水处理， 保持柱体湿润。 4 . 1 9 磺胺醋酞、 磺胺毗陡、 磺胺甲基嗜吮、 磺胺甲氧哒嚓、 磺胺对甲氧嗜陡、 磺胺氧哒嗓、 磺胺甲基异唔 哇、 磺胺二甲氧嗜吮标准物质: 纯度)9 9 0 o , 4 . 2 0 磺胺醋酞、 磺胺毗咤、 磺胺甲基嗜吮、 磺胺甲氧哒嚓、 磺胺对甲氧喃陡、 磺胺氯哒嗓、 磺胺甲基异啡 哇、 磺胺二甲氧啼咤标准溶液: 0 . 1 m g / m l 。准确称取适量的每种磺胺标准物质， 用甲醇配成 。 . 1 m 刃m l 的标准储备液。 根据需要用流动相或。 . 1 m o l / l 盐酸溶液稀释 成混 合标准 工作溶液。 5仪器 5 . 1 高效液相色谱仪: 配有荧光检测器。 5 . 2 固相萃取真空装置。 5 . 3 旋转蒸发器。 5 . 4 冷却吸气机。 55 液体混匀器。 5 . 6 分析天平: 感量0 . 1 m g , o . 0 1 g , 5 . 7 冷热恒温水浴: 精度士0 . 5 0 c, 58 真空泵。 5 . 9 微量注射器: 2 51 , l , 1 0 0 v l , 5 . 1 0 移液器: 0 . 2 m l, 1 ml , 2 ml , 5 . 1 1 鸡心瓶: 1 5 0 m l , 5 . 1 2 样品瓶: 2 mi ， 带聚四氟乙烯旋盖。 5 . 1 3 玻璃贮液器, 5 0 ml o 5 . 1 4 p h计: 测量精度士。 . 0 2 , 6 试样制备与保存 61 试样的制备 对无结晶的实验室样品， 将其搅拌均匀。对有结晶的样品， 在密闭情况下， 置于不超过 6 0 的水浴 中温热， 振荡， 待样品全部融化后搅匀， 迅速冷却至室温。分出。 . 5 k g作为试样。制备好的试样置于样 gb / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 品瓶中， 密封. 并标明标记。 52 试样的保存 将试样于常温下保存 7测定步骤 7 . 1 提取 称取 5g试样， 精确至。 . 0 1 g 。置于 1 5 0 mi ， 三角瓶中， 加人 2 5 ml磷酸溶液( 4 . 1 1 ) ， 于液体混匀 器上快速混匀 1 mi n ， 使试样完全溶解。 7 . 2净化 将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到阳离子交换柱上， 把样液( 7 . 1 ) 倒人玻璃贮液器中， 在减压情况 下使样液以簇3 ml / mi n的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱， 待样液完全流出后， 分别用 5 ml磷酸溶 液和 5 ml水洗柱， 弃去全部流出液。最后用 4 0 ml , 磷酸盐缓冲溶液( 4 . 1 2 ) 洗脱， 收集洗脱液于 1 0 0 ml , 平底烧瓶中在洗脱液中加人 1 . 5 ml庚烷磺酸钠溶液( 4 . 1 3 ) ， 然后用磷酸( 4 . 3 ) 调至 p h=6 e 按上述方法将调好 p h的洗脱液过oa s i s hl b或相当的固相萃取柱， 调节流速镇3 ml / mi n ， 待洗 脱液完全流出后， 再用 3 ml水洗柱， 弃去全部流出液。在 “ k p a负压下， 减压抽干 5 min ， 最后用 1 0 ml 甲醇( 4 . 1 ) 洗脱， 洗脱液收集于 1 5 0 ml鸡心瓶中。用旋转蒸发器于 4 5 水浴中减压蒸发至干。 准确加人 1 . 0 ml盐酸溶液( 4 . 1 4 ) 溶解残渣， 待衍生。 7 . 3 衍生化 用 1 mi移液器准确移取 0 . 5 ml样品溶液( 7 . 2 ) 或标准溶液， 放人 2 ml样品瓶中， 加人 0 . 5 mi . 乙酸钠缓冲溶液( 4 . 1 5 ) ， 拧好旋盖， 摇匀。再加人 。 . 2 ml荧光胺丙酮溶液( 4 . 1 6 ) ， 再拧好旋盖， 摇匀， 放人 1 8 水浴中衍生 3 0 mi n 。衍生后的样品溶液用液相色谱一 荧光检测器测定。 7 . 4 色谱测定 7 . 4 . 1 液相色谱条件 a ) 色谱柱: s y m m e t r y s h i e l d t p r 1 8 , 5 k m, 3 . 9 m mx 1 5 0 m m或相当者; b ) 流动相: 乙睛+0 . 0 1 m o l / l磷酸二氢钾溶液( 2 7 +7 3 ) ; c ) 流速: 1 . 0 ml / m i n ; d ) 检n 0 波长: 激发波长 4 0 5 n m， 发射波长 4 9 5 n m; e ) 柱温: 5 5 0c; f ) 进样量: 1 0 0 p l , 7 . 4 . 2 液相色谱测定 根据样液中磺胺类药物种类和含量情况， 选定峰高相近的标准工作溶液， 标准工作溶液和样品溶液 中磺胺类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积参插进行测 定。在上述色谱条件下， 八种磺胺类药物色谱峰的分离度应大于1 ， 其出峰顺序和参考保留时间如下。 药物名称保留时间/ m i n 磺胺醋酞9 . 1 磺胺毗吮9 . 9 磺胺甲基嗜陡1 1 . 1 磺胺甲氧哒嗓1 3 . 5 磺胺对甲氧啥陡1 5 . 3 磺胺氯哒嗦1 6 . 6 磺胺甲基异嗯哩2 0 . 4 磺胺二甲氧嘀陡2 9 . 4 j 又 种磺胺标准物质色谱图见附录 a中图 a . 1 , gb / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 本方法的添加回收率数据参见附录1 3 75 平行试验 按以上步骤， 对同一试样进行平行试验测定。 76 空白试验 除不称取样品外， 均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果按式( 1 ) 计算: x_h . c , . h ,7n . . ， . . . . . . . . . . ( 1 ) 式 中: x试样中被测组分残留量， 单位为毫克每千克( m g / k g ) ; h 样品溶液中被测组分的峰高， 单位为毫米( mm) ; c , 标准工作溶液中被测组分的浓度， 单位为微克每毫升( p g / ml j ; v 样品溶液定容体积， 单位为毫升( ml ) ; 标准工作溶液中被测组分的峰高， 单位为毫米( m m) ; 所称样品的质量， 单位为克( 9 ) 。 计算结果应扣除空白值 in注 9 精 密度 g b / t 1 8 9 3 2 的本部分精密度数据是按照 g b / t 6 3 7 9 -1 9 8 6的规定， 通过 1 3 个实验室、 四个添加 水平的试样所做的试验中确定的。获得重复性和再现性的值是以9 5 %的可信度来计算。 9 一 1 重复性 在重复性条件下， 获得的两次独立测试结果的测定值， 在以下给出的平均值的范围内， 这两个测试 结果的绝对差值不超过重复性限( r ) ， 蜂蜜中磺胺醋酞、 磺胺毗r2. 磺胺甲基啼咙. 磺胺甲氧哒嗓、 磺胺对 甲氧嗜 92 . 磺胺氯哒嗦、 磺胺甲基异p # 哇、 磺胺二甲氧啼陡含量范围及重复性方程见表 1 , 表 1 含最范围及重复性和再现性方程单位为毫克每千克 名 称 含量范围/ ( mg / k g ) 重 复 性 限 r再 现 性 限 r 磺 胺 醋 酞 0. 01 0- -0 .2 0 lg r =1 . 0 1 6 7 lg m一0 . 9 0 5 2 r= 0 . 2 5 2 0 ; ; + 0 . 0 0 1 3 磺 胺 毗 吮 0 . 01 0- 0 . 2 0 ig r =0 . 8 5 1 2 i g m-1 . 1 5 8 2ig r=o . 8 7 8 3 i g m-o , 9 9 1 0 磺胺甲基啼吮 0 . 01 0 - 0 . 2 0 ig r =0 . 6 8 5 8 1 9 - 1 . 4 4 7 6i g r=0 . 8 2 1 7 i g m-1 . 0 4 2 2 磺胺甲氧哒啼 0 . 01 0 - 0 . 2 0 ig r =1 . 0 5 1 6 i g m-0 . 8 9 7 7i g r=o , 7 8 1 6 i g m-0 . 9 8 9 1 磺胺对甲氧咄陡 0 . 01 0 - 0 . 2 0 ig r =o , 9 5 4 7 i g n : 一0 . 9 9 7 1i g r=o . 7 9 0 2 1 g .-0 , 9 5 3 0 磺胺抓哒嗓0 . 0 1 0 - 0 . 2 0 ig r =o . 6 1 5 1 l g m-1 . 3 9 4 0 r= o , 1 4 6 4 m+ 0 , 0 0 1 5 磺胺甲基异嚼哇 0 . 01 0- - 0 .2 0 ig r =o , 6 7 4 2 ig m一1 . 2 8 6 0i g r=o . 8 2 6 8 i g m-0 . 8 3 6 2 磺胺二甲氧o r 吮 0 . 01 0- 0 . 2 0 ig r =o . 9 9 9 8 l g m一0 . 9 1 4 3ig r=o . 9 1 0 9 l g m-0 , 8 9 1 5 注:m为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限( r ) ， 应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9 . 2再现性 在再现性条件下， 获得的两次独立测试结果的测定值， 在以下给出的平均值的范围内， 这两个测试 结果的绝对差值不超过再现性限( r) , 蜂蜜中磺胺醋酞、 磺胺毗陡 . 磺胺甲基喃咙, 磺胺甲氧哒啼 i 磺胺 对甲氧啼咙. 磺胺氯哒嗦、 磺胺甲基异嗯陛, 磺胺二甲氧啼陡的含量范围及再现性方程见表 1 , gi 3 / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 附录a ( 资料性 附录) 标准 物质 色谱 图 0 .4 0 0 2 0 0 .0 0 - 0. 2 0 - 0 .4 0 0卜11 b6霭6 巴瞬06 60甲你卜 68刊瞬一! 翻月的门 - 0 .6 0 - 0 . 8 0 一 1 . 0 0 一 1 .2 0 98的0卜 一 1 .4 0 洲国公洲 二 :_: 9 . 0 5 3 m i n为 磺胺醋限 9 . 8 9 8 m in为 磺胶毗咬 1 1 , 1 7 0 min为 磺肢甲 荃啥咤 13 . 5 3 2 min 为 破胺 甲 氧哒啧 15 . 2 8 9 min 为 磺胺对甲机啥咤 16 . 8 1 1 min为 确胺氧哒喃 2 0 . 3 8 6 n , in 为 磺胺甲荃 异唱 哇 2 9 . 4 0 9 min 为 磺胺 二甲 教啥咬 - 2 .0 0 - 2 .2 0 - 2. 4 0 - 2. 6 0 - 2. a o 2. 006 . 0 0 1 0 . 0 0 1 4. 00 4 . 0 0 9 . 0 0 1 2 . 0 0 1 6 1 8 . 0 0 2 2 . 0 0 2 6 . 0 0 3 0 0 0 2 0 . 0 0 2 4 . 0 0 2 8 . 0 0 图 a八种磺胺标准物质液相色谱图 gb / t 1 8 9 3 2 . 5 -2 0 0 2 附录b ( 资料性附录) 回收率 本方法中磺胺醋酞、 磺胺毗nq, 磺胺甲基啼吮i 磺胺甲氧哒嗓、 磺胺对甲氧嗜 ne . 磺胺氯哒嗓、 磺胺甲 基异嗯哩、 磺胺二甲氧嗜咙添加浓度及其回收率的试验数据， 见表 1 3 . 1 , 表 b 1 药 物 名称 添加浓度八mg / k