核型多角体病精品课件

第二章 病 毒 病 第一节 核型多角体病 第二节 质型多角体病 第三节 浓核病 第四节 病毒病的发病规律 第五节 病毒病的防治 病毒的发现？ 19世纪末，钱伯伦创制细菌过滤器后，发现了 许多毒素和过滤性因子。 1892年，苏联学者伊万诺夫斯基证明存在过滤 性病毒（发现患花叶病的烟草叶汁通过过滤器 后仍有侵染性）。 19世纪末20世纪初，已经找到许多过滤性病毒 。 1915年，Twort首先发现细菌病毒。 1935年，美国生化学家W.M.Stanleg获得了烟 草花叶病毒结晶。（第一位） 开始了对病毒本质 的认识，促进病毒 学的发展，而且成 为分子生物学发展 的里程碑。 超显微的，可以通过细菌过滤器。 病毒粒子只含一种核酸。 病毒粒子不能生长，也不能二等分裂。 无细胞结构。 病毒只能利用宿主细胞的核糖体进行Pr合成 。 病毒的主要特征： 家蚕病毒病的研究历史 1149年陈敷所著农书中关于家蚕脓病病症 “高节”、“脚肿”的描述。 1639年徐光启的农政全书中，有病蚕“游 走而不安箔”的描述。 1874年汪日桢湖蚕述记有病蚕“高节而足 流白水”。 1912年Acqua发现了第一个昆虫病毒BmNPV。 迄今已发现12目1600余种昆虫，可被16个科的 病毒所感染。 家蚕病毒病的种类 1 核型多角体病 由杆状病毒科的家蚕核型多角体病毒（BmNPV ）寄生血细胞和体腔内各种组织的细胞核，并形 成多角体。 2 质型多角体病 由呼肠病毒科的家蚕质型多角体病毒（BmCPV ）寄生中肠圆筒形细胞，并在胞质中形成多角体 。 复习内容：家蚕幼虫中肠上皮细胞的类型 ？ 家蚕病毒病的种类 3 浓核病 由细小病毒科的家蚕浓核病病毒（BmDNV）寄 生中肠圆筒形细胞的细胞核，不形成多角体。 4 病毒性软化病 由小RNA病毒科的家蚕软化病病毒（BmFV）寄 生中肠杯形细胞胞质中，不形成多角体，但形成 类似多角体的包涵体（封入体）。 家蚕病毒病的危害情况 病毒病是目前蚕茧生产中最为常见、危害最重 的一类病害，给蚕茧生产造成的损失约占蚕病 造成损失的80%。 上述四种病毒病在我国都有不同程度的发生， 其危害也因各个蚕区而不同。南方蚕区以中肠 型脓病为主；而北方蚕区则以血液型脓病造成 的损失最大。浓核病常与CPV并发；病毒性软 化病目前已很少发生。 因此，本章重点讲解NPV、CPV，并介绍 DNV. 第一节 核型多角体病 核型多角体病也称血液型脓病，农民常称之 为脓病或脓肿。 一 病原 家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus NPV）。存在形式有两种 ：NPV与NPB（多角体）。 （一）NPV 属杆状病毒科，核型多角体病毒属，病毒粒子 杆状，33080 nm；dsDNA;Tm为87.5； NPV病毒粒子的超微结构 NPV 膜 髓核（dsDNA） 囊膜 胶粘层 衣壳 核衣壳 一个囊膜内 只含一个核 衣壳 一个囊膜内 包含两个以 上核衣壳 模式图 单粒包埋型（SEV）与多粒包埋型（MEV） 寄生部位 血体壁气管上皮 脑脂肪卵巢皮膜 丝腺精巢皮膜 SEV（%） 9798 7289 63 MEV（%） 23 1128 37 环境温度：25 28 多形成SEV，33 35 多形成MEV 。 （二） NPB（多角体） 1 构成 多 角 体 多角体蛋白 3%5%病毒粒子 核糖核酸聚合酶 0.3%Si；微量Fe、Mg 与宿主细胞Pr和病毒 Pr均不同，分子量 29000，由245个AA残 基组成。 2 理化特性 多为整齐六角形十八面体（偶有四方、三角或 不正形）；26m（平均3.2）；光镜下易观察 到；淡绿色，折光性强；比水重；不溶于水及有 机溶剂；对浓酸不稳定；易溶于碱性溶液；苏丹 不能使其着色。 扫描电镜照片 NPB的形态 光镜照片 N.b NPB NPB形态 NPB形态受下列因素影响 1 寄生部位：血细胞、气管上皮、体壁上皮、 脂肪体中均六角形。而丝腺腺细胞中则巨型三 角形。多角体且较其他组织大2倍左右。睾丸 、精室内膜上寄生则四方形。 2 宿主：BmNPV接种二化螟后：1代六角形，7 代后四方形，再将四角形NPB反接种于B.m.， 则：第一代少量六角形，第四代达70%80% ，第六代全部为六角形。 3 与环境（温度）有关：BmNPV接种蛹体。接 种后 2824hr后，再经35则产生四角形NPB 28下4896hr后,再经35则产生六角形。 35下2448hr后,再经28则产生六角形。 35下7296hr后,再经28则产生四角形。 NPB形态受下列因素影响 3 NPB的稳定性 处理 浓度 温度 失活时间(min) 日光 40 20h 干热 100 45 湿热 100 3 甲醛 2% 25 15 漂白粉 0.3% 25 3 石灰浆 1% 25 3 石灰水 清 25 24h 盐酸 比重1.025 25 3 二 病症 1 典型病症（共同症状） 2 不同时期发病 不眠蚕：在蚕的催眠期间，蚕群体大部分快 入眠时，NPV病蚕体壁紧张发亮，呈乳白色，行 动活泼，不能入眠，终于体皮破裂，流脓而死 。 起节蚕：在起蚕时发病。病蚕生长停滞，体色 乳白而不见转青。体壁松弛多皱，体躯缩小。前 节的节间膜向后套叠，终于出现典型的病征而死 。 高节蚕：又称“竹节蚕”。源于病蚕各环节节间 膜或环节后半部（靠近节间膜处）隆起，就象 竹节。多在4、5龄蚕盛食期发病。 2 不同时期发病 脓蚕：多发生于5龄后期至上簇前。环节肿胀拱 起，呈算盘珠状，体壁紧张发亮，体色乳白，病重 时，爬行缓慢，终因腹足失去把持力，从蚕匾或蔟 中坠下，流脓而死。发病迟者死于蔟中或结薄皮茧 而死亡，生产上比较常见。 斑蚕：在生产上较少见，与蚕品种有关，现行品 种少发生。发生时出现对称性的病斑，如黑褐色的 焦脚、黑色气门及大的斑块等。 蛹期病症：在5龄后期、熟蚕、初蛹期感染可造 成蛹期发病。病蛹体色暗褐或乳白，体壁易破，一 经震动即流出浓汁而死，造成茧层污染，即内印茧 或死茏茧。 2 不同时期发病 高节 狂躁爬行 2 不同时期发病 腹足基部乳白 气门周围水 渍状病斑 2 不同时期发病 2 不同时期发病 2 不同时期发病 三 病变 NPV及其包涵体是在寄主细胞核内增殖和 形成的，因而受感染的细胞核便发生一系列的 病变过程。随着多角体的不断增多，使细胞核 逐渐膨胀，随后细胞亦膨大破裂，这样多角体 、病毒及细胞碎片就游离于血液中。 血细胞、气管上皮、脂肪组织及真皮细胞 易形成多角体。在生殖腺和神经细胞中只能形 成少量多角体，而蜕皮脱、唾腺和马氏管等则 很难形成，在丝腺中除前部丝腺不能形成多角 体，中、后部丝腺细胞核均能形成大量多角体 。目前已发现NPV可在中肠圆筒形细胞中增殖, 但不能形成多角体. 病 变 病 变 四 致病机理 1 感染入侵 NPB 蚕食下放出NPV 污染桑叶碱液溶解 肠腔 灭活 排出 RFP 围食膜 中肠上 皮细胞 复制 胞核定位 血液 NPV 创伤 NPV 细胞间隙 血细胞核定位 2 病毒复制 dsDNA dsDNA S tRNA rRNA 病毒 Pr 衣壳 Pr NPB Pr ssDNA mRNA胞 质 NPV NPB 细胞核 细胞质 E 3 3 装配装配 4 4 释放释放 5 病毒增殖 NPV的增殖曲线 隐 潜 期 缓 慢 增 殖 期 高 速 增 殖 期 稳 定 增 殖 期 五 发病特点 1 本病以食下传染为主（NPB），也可经伤 口感染（NPV）。 2 主要传染源为病蚕血液（脓汁）。 3 本病主要发生在3龄老熟（蛹期），尤以5 龄中期老熟前后最为严重。 4 本病属于亚急性传染病，小蚕感染后经34 天发病死亡，大蚕经46天发病；外温高时， 病程加快。 5 病蚕体壁破裂流脓之前，蚕座二次感 染的可能性较小。 6 由于NPB对自然环境有强的抵抗力，故 该病除具有水平传播外，尚具有较强的 垂直传播能力。 7 恶劣的环境条件及一些理化因素刺激 可诱发本病。 8 不同蚕品种对本病抗性不同。 六 诊 断 1 肉眼鉴别 2 显微镜检查 此病在发病初期，外观病症往往不明显 ，但发育迟缓，有时迟眠。取可疑蚕剪断尾 角或腹足，滴一滴血液于载玻片上，加盖片 与400600倍显微镜下观察。 如有折光性较强，大小较整齐的六角形 多角体，即可确诊。如病蚕处于感染中期， 可观察血细胞核内有无折光性强、大小不等 的颗粒，据此确诊。 镜检时，脂肪球与多角体的区别方法：（ 1）Sudan 染色法；（2）有机溶剂溶解法； 六 诊 断 2 显微镜检查 3 PCR检测与血清学方法 以已知的抗体检查蚕体 内是否存在相对应的抗 原，从而做出蚕是否被 某种病毒感染。 录 像 h6&SHvj7(UIxl9)WKynb+XMAod1ZNCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9-WKynb+YMAod1ZOCqe3!PEsg4%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMApd1ZOCqf3!PEsg5%RFui6*THvk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!QEsg5%RGui6*THwk8(VJxma-WLznc0YMBpd2#OCrf3!QEsh5%RGui7*THwk8)VJxma-XLznc0YNBpd2#ODrf3$QEth5%SGui7*TIwk8)VJyma- 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