GB-9695.16-1988.pdf

中华人民共和国国家标准 肉与肉制品四环素族 u d c 6 8 7 . 5 1 ; . 5 2 材 8 . 0 6 抗生素残留量检 验 gb 9 69 5. 16 一 a s me a t a n d m e a t p r o d u c t s -me t h o d f o r t h e e x a mi n a t i o n o f t h e r e s i d u e s o f t e t r a c y c l i n e s 1 主皿内容与适用范围 本标准规定了肉和肉制品中四 环素族抗生素残留量的检验方法。 本标准适用于肉和肉制品中四 环紊族抗生素残留量的检验。 2 引 用标准 g b 9 6 9 5 . 1 9 肉与肉制品 取样方法 3 原理 四 环素族 ( 四环素、土霉素、 金霉素)抗生素具有很强的 抑菌作用。在接有特定微生物的平 板培 养基上放人牛津 杯， 在牛津杯内加满试样溶液，培养后测最抑菌圈的大小。 4 . 1 试剂 与培养基 试剂: 4 . 1 . 1 磷酸盐缓冲液 ( p h 4 . 5 ) 精确称取碑酸二氢钾 ( g b 1 2 7 4 ， 分析纯)1 3 . 6 8 , 溶解于蒸馏水中， 定容到l 0 0 0 m l , 高压灭菌1 1 5 c , 3 0 m i n ，冷却 后置4 冰 箱内保 存。 4 . 1 . 2 生理盐水称 取氮化钠 ( g b 1 2 6 6 ) 8 . 5 9 溶解于1 0 0 0 m l 蒸 馏水中，高压灭菌1 1 5 0c , 3 0 m i n , 4 . 1 . 8 盐酸 ( gb 6 2 2 ) : o . i m o l / l 溶液。 4 . 1 . 4 标准四环素原液:精确称取四环素5 0 m g ， 用。 . l m o l / l 盐酸 1 m l 溶解， 用水定容到1 0 0 0 m l ， 在 4 冰箱中可保存一周。 4 . 2 培养基: 4 . 2 . 1 菌种培养基: 胰蛋白 陈l 0 . o g 牛肉 膏5 . 0 g 抓化钠 ( g b 1 2 6 6 ) 2 . 5 g 琼脂1 4 . 0 一1 6 . 0 g 燕 馏水l 0 0 0 m l 将以 上成分加热 溶解，高压灭 菌1 2 1 0c 1 5 m i n ， 最终p h 6 . 5 1 0 . 1 , 4 . 2 . 2 检定用培养基: 胰蛋白 陈6 . 0 g 牛肉膏1 . 5 9 酵母 膏3 . 0 g 琼脂1 4 . 0 - 1 6 . 0 g 中华人民共和国商业部1 9 . 一0 2 一 2 5 批准1 9 8 9 一 0 3 一 0 1 实施 gs 9 6 9 5， i 6 一 i 7 蒸馏水 1 0 0 0 m l 将以上成分加 热 溶解，高 压灭菌1 2 1 c 1 5 m i n ,最 终p h 5 . 8 士 。 . 1 , 5 仪器和设备 5 . 1 培养皿:内径9 0 m m ，底部平整光 滑，具陶质盖。 5 . 2 牛津杯:内径6 1 o . i m m ，外径7 . 8 1 0 . 1 - m ,高 度1 0 1 0 . 1 m m . 5 . 3 游标卡尺:测量抑菌圈直径用。 与 . 4 均质器。 石 . 6 离， l . 、 机。 5 . 恒温水浴。 5 . 了 恒温培养箱。 5 二 电 热于 烤箱1 7 0 1 0 . 1 0c , 6 试样 6 . 1 6 . 2 按g b 9 6 9 5 . 1 9 取 样。 至少取有代表性试样2 0 0 g ，用绞肉机绞 2 次混匀， 放在封闭容器中于冰箱内贮存备用，试样要 尽快分析。 7 分析步骤 7 . 1 检样液的制备 称取试样1 0 . 0 g ， 加入。 . i m o l / l 磷酸缓冲液2 0 m l 小心搅匀放置6 0 m i n , 然 后于均质器中均质( 3 0 0 0 一6 0 0 0 r / m i n ) 1 m i n , 经4 o o o r / m i n 离心i o m i n ， 其上清液为检样液。 7 . 2 菌液和检定用平 板的制备 7 . 2 . 1 菌液的制备 菌种: 蜡样芽抱杆菌 ( b a c c e r e u s a t c c 1 1 7 7 8 )由卫生部药品生物制品检 定所提供。 将菌种移种于盛 有3 0 0 m l 菌 种培养基的克氏 瓶中， 于3 0 培养箱中 培养7 天。 镜检 芽抱 数达 到8 5 0/ o 以上，用生理盐水2 5 m l 洗下菌谷，置6 5 c 恒温水浴中加 热3 0 m i n ， 离心( 2 0 0 0 r / m i n ) 2 0 m i n ， 弃去上 清液，如此重复洗涤芽抱悬液三次。 再置于6 5 0c 恒温水浴加 热3 0 m i n ， 然 后取生理盐水5 0 m l 制成芽抱悬 液。置4 冰箱中 可保存一个月。 7 . 2 . 2 蜡样芽抱杆菌悬液用量的测定 在实际检 定前先试几个平 板， 即把 不同浓度的芽抱悬液加人检 定用培养基中， 使0.051+g/-l浓 度 的标准四环素 溶液可产生1 2 m m 以上的清晰、 完整的 抑菌圈作为最适芽抱用量。 一般用最为每1 0 0 m l 检 定用培养基内加芽袍悬液0 . 5 一1 . o m l , 1 . o m l菌悬液中含芽抱数约为l o c o 7 . 2 . 8 检定用平板的制备 将适量芽抱悬液加人溶化后冷却至5 5 一6 0 的检定用培养基中 混匀。 每个平皿内加人培养基6 m l , 前后摇动平皿， 使含有芽抱的检定培养 基均匀彼盖 于平皿表面， 置水平位置上盖 上陶质盖 ， 待凝固 后， 于 每 个平 板的培养 表 面放 置6 个牛 津 杯， 使牛津 杯在半 径 为2 . 8 c m 的 圆面 上 成6 0 度角 的间 距。 所用 平 板须当天制备。 了 . 3 检定 7 . 8 . 1 标准曲线的绘制 四环素稀释液: 取原液用0 . 1 m o l / l 磷酸盐缓冲溶液稀释成0 . 0 2 5 , 0 . 0 5 0 , 。 . 1 0 0 , 0 . 2 0 0 , 0 . 4 0 0 , 0 . 8 0 0 r g / m l 的标准溶液 ( 当天用当天稀释) 。 取检定用平板1 8 个，分成6 组，每组3 个平 板作为平 行试验。第一组于每个平板的6 个牛津 杯中 分别加满。 . 0 2 5 p g / m l 的标准溶液作为对照组。第二 到第 六组于每个平板上的6 个牛津 杯中，间隔加 gb 9 6 9 5. 1 6 一 8 8 满0 . 2 ( 0 11 9 m l 的标准溶液作为参考。各组余一 f 的牛津杯， 根据组别顺序依次加满0 . 0 5 0 , 0 . 1 0 0 , 0 . 2 0 0 , 0 . 4 0 0 , 0 . 8 0 0 w g i - l 的 标准溶液， 经培养后，以 各组 抑菌 圈直 径的校正平均值 绘制 标准曲线。 抑菌 圈 直 径校正值 ( m m )等于2 一6 组 ( 0 . 2 0 0 1 1 9 / - l ) 抑菌圈直径的平均值减去各组抑菌圈直径平均值。 用此校正值校正0 . 0 5 0 , 0 . 1 0 0 , 0 . 2 0 0 , 0 . 4 0 0 , 0 . 8 0 0 p g / m l 标准溶液的抑菌圈直径平均值。 校正 后的值，包 括0 . 2 0 0 w g i m l 浓度的平 均值在半对数坐标纸上作图， 以 抑菌圈直径为横坐标( 算 术级) ，以浓度为纵坐标 ( 对数级) ，通过下列公式绘出标准曲线 二 ( 3 a + 2 b +c 一e ) 1 5 = ( 3e +2d +c一a) ， 5 lh 式i l l : l -标准曲线的最低浓度的抑菌圈直径;a , b , e 相应浓度是0 . 0 5 0 , 0 . 1 0 0 , 0 a 0 0 1 g / m l , h-标准曲线的最高浓度的抑菌圈直径;a , d , e 相应浓度是。 . 0 5 0 , 0 . 4 0 0 , 0 . 8 0 0 1 g / m l o c参考浓度 ( 0 . 2 0 0 1t g / m l )的4 5 个抑菌圈直径的平均值。 7 . 3 . 2 试样中四环素族抗生素残留量的检定 每份试样取3 个检定用平 板，在每个检定用板上， 间隔的3 个牛津 杯内加满四 环素标准参 考浓度 溶液。另外3 个牛津 杯加满被检试样液， 将陶质盖重新盖好，置3 0 士1 培养箱中， 培养1 7 士1 h 。 除 去牛津 杯翻 转平 板，精确的测量产生的抑菌翔直径 ( 精确到0 . 1 m m ) 。 分别求出3 个检定用平板上参考 浓度和被检试样抑菌圈直径数值校正后，从四环素标准曲线上查出被检试样中四环素的含量。 8 检定结果的计算 从标准曲线上查出被检试样液的抗生素残留量，乘以稀释倍数，结果以m g / k g 计算。 附加说明: 本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。 本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。 本标准由中国肉类食g p f 合研究中 心负责起草。 本标准主要起草人裴显庆、张纯。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 gb