沙眼衣原体实验诊断（熊科）课件

沙眼衣原体（Chlamydia Tracmatis) l实验室的实验诊断 熊礼宽 深圳市慢性病防治院 是世界上引起性病的最主要病原 全球感染率约为7亿 衣原体流行病学数据 沙眼衣原体在世界范围内的传播 沙眼衣原体实验室诊断 欧洲沙眼衣原体感染率上升曲线 沙眼衣原体实验室诊断 1. 性别：女性男性 2. 年龄：年青年长 3. 筛查人群的限制 沙眼衣原体流行性特点 沙眼衣原体实验室诊断 沙眼衣原体受年龄的影响 q1/10的女性青年有衣原体感染。 q1519岁女性占46。 q2024岁女性占33。 即1624岁之间年青女孩的感染率很高。 美国CDC报告 沙眼衣原体实验室诊断 1620岁20-24岁 中国 印度 秘鲁 俄罗斯 津巴布韦 16.7% 0% 11.5% 12.5% 3.8% 8.5% 0% 6.6% 5.0% 3.1% 该研究 总共采纳了 5个国家共 2932例普通 人群标本。 发展中国家沙眼衣原体流行率研究 沙眼衣原体实验室诊断 衣原体感染()筛查研究 女性 年青门诊病人 妇产科病人 第一次怀孕 请求堕胎 有计划的家庭检查 妓女 男性 军队招募 10-20 1-13 5-20 3-18 3-12 4-33 320 欧洲不同人群衣原体感染率报告 沙眼衣原体实验室诊断 男性 尿道炎 附睾炎 女性 宫颈炎 输卵管炎 尿道感染 新生儿 结膜炎 有症状病人的感染率 20-60 40-80 20-40 20-70 5-10 15-30 欧洲不同人群衣原体感染率报告 沙眼衣原体实验室诊断 1. 便于疾病的控制和管理 2. 防止疾病漏诊和误治 沙眼衣原体实验室筛查的意义 沙眼衣原体实验室诊断 1. 疑有生殖道、尿道炎症的女性 2. 疑为盆腔炎（PID）的女性（40） 3. 有尿道炎症状的女性 4. 宫颈炎症状的女 2. 不孕病患者（30） 3. 年轻孕妇 4. 性生活活跃的年轻女性 5. 有其它性病的病人 6. 性伴侣检出为衣原体感染的病人 沙眼衣原体实验室筛查对象 女性 沙眼衣原体实验室诊断 1. 有生殖道、尿道炎症的男性 2. 附睾炎 3. 前列腺炎 4. 尿道炎 5. 2. 不孕症 6. 3. 有直肠炎男性 7. 4. 不明原因关节炎患者 8. 5. 有其它性病的病人 6. 性伴侣检出为衣原体感染的病人 沙眼衣原体实验室筛查对象 男性 沙眼衣原体实验室诊断 1.有结膜炎的婴儿 2.孕母为沙眼衣原体感染的婴儿 沙眼衣原体实验室筛查对象 婴幼儿 沙眼衣原体实验室诊断 细胞培养法 酶联免疫法EIA 直接免疫荧光法DFA 快速金标法 分子扩增技术如PCR 沙眼衣原体实验室诊断的方法 沙眼衣原体实验室诊断 来自CDC的关于预防及控制沙眼衣原体感染的最 新纲领建议所有在低风险流行区人群中用非培养法 检测出的阳性标本均需进行确认实验。 对阳性标本的确认检测增加了这些非培养检测 法的特异性及阳性预期值。纲领还对检测结果定义 为三种 可疑 假定 肯定诊断结果 确认检测(Confirmatory Testing) 沙眼衣原体实验室诊断 确认检测(Confirmatory Testing) 非培养法阳性 培养法阳性 假定性诊断结果 肯定性诊断结果 第二次检测为阳性，并 用另一方法确认为阳性 沙眼衣原体实验室诊断 沙眼衣原体实验室诊断方法之比较 细胞培 养法 DFAEIAPCR快速金标法 实验室 要求 一般一般较低非常高较低 实验员 要求 较高较高较低相当高较低 成本一般较低较低很高较高 标本要求高一般一般一般一般 检测需时23d小于 30min 小于4h2h小于30min 大量标本 筛查 不适合不适合很适合未确定不适合 确认实验DFAPCR Blocking试 剂、 DFA、PCR 培养法 +DFA 培养法，DFA， PCR 沙眼衣原体实验室诊断 细胞培养法Cell Culture 20年来衣原体诊断的金标准 其它方法的确认方法 法医鉴定 沙眼衣原体实验室诊断 细胞培养法Cell Culture 该方法不容易普及： 1.实验室要求高 2.标本要求高 3.灵敏度低，仅为60-80%，且取决于专业 人员的技能 所以细胞培养法始终未能作为一种衣原体 实验室常规筛查方法。 沙眼衣原体实验室诊断 直接免疫荧光法DFA 1. 改进标本采集法 2. 做为其它检测法的确认实验，如EIA， 细胞培养法及PCR中出现的差异性结果 Ostergaard 及Moller分别用DFA及PCR法来 确认MicroTrak EIA的检测结果，两者的 吻合率为98.2%。 所以DFA无疑是一种可靠的确认方法 沙眼衣原体实验室诊断 直接免疫荧光法DFA 运用荧光素标记的单克隆抗体MOMP 但DFA的不足之处为依赖于采集时感染部位衣 原体的数目,且该标准难以统一 若标本量不大，DFA为一优良检测法，但并不 适用于大量标本的筛查 沙眼衣原体实验室诊断 快速金标法 没有实验室的诊所 急需诊断结果的情况下 沙眼衣原体实验室诊断 快速金标法 不需要昂贵的设备，而且可以独立包装，它能够 在30分钟内检测沙眼衣原体 成本并不低于其它方法 灵敏度和特异性通常很低 与EIA法相似，快速法也是使用抗LPS抗体检测受 感染的衣原体，但由于与其它微生物的交叉反应 ，该法容易造成假阳性。 适用于诊所、小医院和急需检测结果的医院和检测中心 沙眼衣原体实验室诊断 PCR 最敏感的检测法 1. 定量PCR 2. 疗效考核有待评价 3. 实验室要求高 4. 实验室人员要求高 5. 成本高 沙眼衣原体实验室诊断 PCR Ostergaard和Moller在1995年报道了运用PCR 作为MicroTrak EIA确认实验的方案。 在他们的研究中，运用DFA及PCR作为EIA检测 后的残留标本的确认检测。当EIA检测的标本 的OD值处于灰带区（即低于标准值），PCR与 DFA检测结果的吻合率达98%。 因而，EIA检测的灵敏度可通过对灰带标本 进行确认实验而提高，尤其是来自低感染率人 群中的标本。 沙眼衣原体实验室诊断 酶联免疫法EIA 1. 无需培养来检测衣原体 2. 检测法用于检测感染率为5%或更高的人群时 的灵敏度及特异性分别为70%及98%。（美国疾 病控制及预防中心。沙眼衣原体感染的预防及 管理建议，1993 MMWR） 沙眼衣原体实验室诊断 酶联免疫法EIA 3.EIA便于实验室检测大批量的标本。 MicroTrack XL全自动检测仪已问世，且该 全自动仪的检测效果已经过评估。 4. 结果客观，而且可以留档 沙眼衣原体实验室诊断 酶联免疫法EIA 5. EIA的灵敏度可以通过对灰带标本进行确认 试验或使用Blocking试剂而提高 灵敏度 EIA92% EIA + Blocking 试剂95% EIA + 30% GZ97.5% EIA + 50% GZ99% 沙眼衣原体实验室诊断 酶联免疫法EIA 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与其它标准检测的比较 感染率比较方法 灵敏度 特异性 18PCR85100 15DFA8599 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与培养法的比较 2003年广东省皮肤性病防治中心用 MicroTrak EIA对66份标本进行了检测 ，并用培养法进行确认 10例EIA阳性标本中，只有2例为培养法 阴性,且确认为阳性 沙眼衣原体实验室诊断 市场上主要的EIA试剂 -MicroTrak -Abbott (Chlamydiazyme) -Dako (IDEIA) -Labsystems -Medac -Savyon Diagnostics ( SeroCT) ) 沙眼衣原体实验室诊断 市场上主要的EIA试剂 女性宫颈标 本 MicroTrak EIA Abbott Chlamydiazyme 灵敏度91%78% 特异性98%98% Leonardi et al J. Clinical Micro 美国临床微生物杂志 沙眼衣原体实验室诊断 市场上主要的EIA试剂 男性尿液标本 MicroTrakIDEI A Chlamydiazyme 灵敏度96%92%79% 特异性99%98%99% 沙眼衣原体实验室诊断 国外对EIA所作出的研究 目的：对市场上的衣原体EIA试剂进行评估， 以得到最好的实验效果。 单位：新西兰奥克兰索尼克社会诊断医学实验 室 新西兰最大的诊断实验室之一，每年沙 眼衣原体检测标本量高于9万例，每天的标本 量约为350例。 研究人员：Michael McCarthy ,从事沙眼衣原 体诊断研究30余年，为该领域权威专家 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 对象： MicroTrak EIA与Dako IDEIA EIA 方法：对以上两种方法的差异性结果使用 罗氏（Roche)PCR方法进行确认 材料：16份男性初段尿标本，13份男性尿 道棉拭标本，153份女性宫颈棉拭标本；2 份女性外阴棉拭标本 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 28。6 （2/7） 100 (7/7） 54.1 (40/74) 91.9 (68/74 ） 37.5 (6/16） 100 (16/16 ） 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 MicroTrak 沙眼衣原体EIA的阳性率 比Dako IDEIA PCE衣原体EIA阳性率平 均高40-70%. 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 男性尿道标本 IDEIA（+）MICROTRAK （+）2 IDEIA（-）MICROTRAK (+)(CF+)4 IDEIA（-）MICROTRAK (GZ)(CF+)1 IDEIA（-）MICROTRAK （-）6 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 女性宫颈标本 IDEIA（+）MICROTRAK （+）35 IDEIA（GZ）MICROTRAK (+)(CF+)1 IDEIA（-）MICROTRAK (+)(CF+)10 IDEIA（+）MICROTRAK (GZ)(CF+)3 IDEIA（+）MICROTRAK （-）1 IDEIA（-）MICROTRAK (GZ)(CF+)17 IDEIA（-）MICROTRAK (NR)(CF+)8 IDEIA（-）MICROTRAK （-）80 沙眼衣原体实验室诊断 MicroTrak EIA与Dako EIA的比较 男性尿液标本 IDEIA（+）MICROTRAK （+）6 IDEIA（-）MICROTRAK (+)（CF+）9 IDEIA（-）MICROTRAK (GZ)(CF+）1 沙眼衣原体实验室诊断 总结 1.实验室要求 2.实验室技术要求 3.成本 4.试验的方便程度 5.试剂的客观准确性 EIA是一种合适的沙眼衣原体的实验室筛查手 段。 沙眼衣原体实验室诊断 沙眼衣原体实验室筛查确认方案 中小实验室大实验室 EIAPCR 阳性，需确诊阴性 DFA培养法PCR培养+DFA 阳性，需确诊阴性 国际 沙眼衣原体实验室诊断 沙眼衣原体实验室筛查确认方案 快速法 PCR EIA 国内 沙眼衣原体实验室诊断 已被证实在一个可接受的费用的基 础上大大提高检测的灵敏度与特异性 。 沙眼衣原体实验室筛查确认发展趋势 EIA常规 PCR筛查 DFA确认 细胞培养法确认 PCR确认 沙眼衣原体实验室诊断 准确 FDA或CE认证，世界公认的卓越 敏感度和特异性 完整 包括抗原、抗体检测，全线的 EIA、DFA、细胞培养技术产品 全面 广泛的衣原体筛查和确认试验 方便 可使用自动分析仪进行试验，便 于大规模检测 MicroTrak衣原体实验室筛查确认产品 沙眼衣原体实验室诊断 Trinity 能够为您提供 全线的沙眼衣原体筛查确认产品 MicroTrak 衣原体抗原EIA检测试剂盒 MicroTrak衣原体阻断试剂 MicroTrak沙眼衣原体培养确认DFA试剂盒 MicroTrak沙眼衣原体直接标本DFA检测试剂盒 Captia衣原体抗体IgA ELISA试剂盒 Captia衣原体抗体IgG ELISA试剂盒 沙眼衣原体实验室诊断 分型方法 l单克隆抗体 lPCR产物测序 lPCR-RFLP lPCR-杂交 沙眼衣原体实验室诊断 PCR-杂交 lPCR-反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization assay) lPCR-反向线型杂交(reverse line hybridization assay) l反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization assay) 沙眼衣原体实验室诊断 PCR-反向线点杂交技术(PCR-reverse line blot hybridization assay) 材料和方法 1、429份标本为COBAS AMPLICOR检测CT后-20 保存 ；其中眼拭子1份，直肠拭子2份，男性 尿液标本183份，女性尿标本155份，宫颈拭子 88份。 2、CT血清型H、淋病萘瑟菌、肺炎衣原体、脲原 体、生殖支原体、人型支原体和阴道加德纳菌 标准株各1株。