生化鉴定原理ppt演示课件

.1 致病菌检测生化鉴定原理及应用 三糖铁琼脂试验 靛基质试验 ONPG试验 甲基红MR试验 VP试验 尿素酶试验 赖氨酸脱羟酶试验 淀粉水解酶试验 胆汁七叶苷水解试验 糖（醇、苷）类发酵 试验 甘油复红试验 葡萄糖酸氧化试验 氧化发酵试验 枸橼酸盐利用试验 呼吸酶类试验 硝酸盐还原试验 .2 三糖铁琼脂试验 本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利 用和硫化氢（变黑）的产生。 该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只 能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄 ，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细 菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来 又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以 仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸 ，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀 ，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化 氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 .3 三糖铁琼脂试验 志贺氏菌都能分解葡萄糖 ，产酸不产气，大多不发 酵乳糖，不产生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖 产酸产气，大多数能分解 乳糖，不产生H2S。 沙门氏菌，能分解葡萄糖 ，不发酵乳糖，大多数产 生H2S，多数产气。 .4 靛基质试验 某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水 中的色氨酸生成吲哚（靛基质），当加入 吲哚试剂（对位二甲氨基苯甲醛）后则形 成红色的玫瑰吲哚。 .5 半乳糖苷酶试验（ONPG试验 ） 原理：乳糖发酵过程中需 要乳糖通透酶和半乳 糖苷酶才能快速分解。有 些细菌只有半乳糖苷酶， 因而只能迟缓发酵乳糖， 所有乳糖快速发酵和迟缓 发酵的细菌均可快速水解 邻硝基酚-D-半乳糖苷（ O-nitrophenyl-D- galactopyranoside,ONPG） 而生成黄色的邻硝基酚。 用于枸橼酸菌属、亚利桑 那菌属与沙门菌属的鉴 别。 应用：可用于迟缓发酵乳 糖细菌的快速鉴定，本法 对于迅速及迟缓分解乳糖 的细菌均可短时间内呈现 阳性。埃希菌属、枸橼酸 杆菌属、克雷伯菌属、哈 夫尼亚菌属、沙雷菌属和 肠杆菌属等均为试验阳性 ，而沙门菌属、变形杆菌 属和普罗威登斯菌属等为 阴性。 .6 甲基红（MR）试验 原理：某些细菌在糖代谢 过程中，分解葡萄糖产生 丙酮酸，丙酮酸进一步被 分解为甲酸、乙酸和琥珀 酸等，使培养基pH下降至 4.5以下时，加入甲基红指 示剂呈红色。如细菌分解 葡萄糖产酸量少，或产生 的酸进一步转化为其它物 质（如醇、醛、酮、气体 和水），培养基pH在 5.4 以上，加入甲基红指示剂 呈桔黄色。 应用：常用于肠杆菌科内 某些种属的鉴别，如大肠 埃希菌和产气肠杆菌，前 者为阳性，后者为阴性。 肠杆菌属和哈夫尼亚菌属 为阴性，而沙门菌属、志 贺菌属、枸橼酸杆菌属和 变形杆菌属等为阳性。 .7 VP试验 原理：测定细菌产生乙 酰甲基甲醇的能力。某 些细菌如产气肠杆菌， 分解葡萄糖产生丙酮酸 ，丙酮酸进一步脱羧形 成乙酰甲基甲醇。在碱 性条件下，乙酰甲基甲 醇被氧化成二乙酰，进 而与培养基中的精氨酸 等含胍基的物质结合形 成红色化合物。即V-P试 验阳性。 应用：主要用于大肠埃 希菌和产气肠杆菌的鉴 别。本试验常与MR试验 一起使用，一般情况下 ，前者为阳性的细菌， 后者常为阴性，反之亦 然。但肠杆菌科细菌不 一定都这样规律，如蜂 房哈夫尼亚菌和奇异变 形杆菌的VP试验和MR试 验常同为阳性。 .8 尿素酶试验 原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培养 基中，分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，此时 培养基中的酚红指示剂显红色。 .9 赖氨酸脱羟试验 赖氨酸脱酸主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，也可用于某些非发酵 菌。试验关培养基中含有赖氨酸和葡萄糖，酸碱指示剂为溴甲酚紫（ 中性和碱性时紫色，酸性黄色），未用时为紫色。如果待测细菌将赖 氨酸脱羧，则产生胺，为碱性，溴甲酚紫保持紫色，如果不脱羧，肠 杆菌科的细菌都能分解葡萄糖，产酸，溴甲酚紫变为黄色。 氨基酸脱羧的对照管其实就是一个葡萄糖发酵管，不含氨基酸。由于 实验结果阳性的为保持紫色不变，阴性结果为黄色，为保证结果的可 靠性，须同时接种对照管，如对照管变为黄色，说明细菌接种成功， 证实试验管紫色（不变色）却为阳性，而非未接种好细菌。 此外，由于氨基酸脱羧的产物为尸胺、腐胺等，遇氧不稳定，故各管 接种完细菌后，需加入几滴液体石蜡隔绝空气，保持胺的稳定性。 .10 淀粉水解试验 原理：产生淀粉酶的 细菌能将淀粉水解为 糖类，在培养基上滴 加碘液时，可在菌落 周围出现透明区。 应用：用于白喉棒状 杆菌生物型的分型， 重型淀粉水解试验阳 性，轻、中型阴性； 芽胞杆菌属菌种和厌 氧菌某些种的鉴定。 .11 胆汁七叶苷水解试验 原理：在10%40胆 汁存在下，测定细菌 水解七叶苷的能力。 七叶苷被细菌分解生 成的七叶素，七叶素 与培养基中的枸橼酸 铁的二价铁离子发生 反应形成黑色化合 物。 应用：主要用于鉴别D 群链球菌与其它链球 菌的区别，以及肠杆 菌科的某些种、某些 厌氧菌（如脆弱拟杆 菌等）的初步鉴别。D 群链球菌本试验为阳 性。 .12 糖（醇、苷）类发酵试验 原理：不同种类细菌含有 发酵不同糖（醇、苷）类 的酶，因而对各种糖（ 醇、苷）类的代谢能力也 有所不同，即使能分解某 种糖（醇、苷）类，其代 谢产物可因菌种而异。检 查细菌对培养基中所含糖 （醇、苷）降解后产酸或 产酸产气的能力，可用以 鉴定细菌种类。 应用：糖（醇、苷）类发 酵试验，是鉴定细菌的生 化反应试验中最主要的试 验，不同细菌可发酵不同 的糖（醇、苷）类，如沙 门菌可发酵葡萄糖，但不 能发酵乳糖，大肠埃希菌 则可发酵葡萄糖和乳糖。 即便是两种细菌均可发酵 同一种糖类，其发酵结果 也不尽相同，如志贺菌和 大肠埃希菌均可发酵葡萄 糖，但前者仅产酸，而后 者则产酸、产气，故可利 用此试验鉴别细菌。 .13 甘油复红试验 原理：甘油可被细菌 分解生成丙酮酸，丙 酮酸脱去羧基为乙醛 ，乙醛与无色的复红 生成醌式化合物，呈 深紫红色。 应用：主要用于沙门 菌属内各菌种间的鉴 别。伤寒沙门菌、甲 （丙）型副伤寒沙门 菌、猪霍乱沙门菌、 孔道夫沙门菌和仙台 沙门菌本试验为阴性 ，乙型副伤寒沙门菌 结果不定，其它不常 见沙门菌多数为阳 性。 .14 葡萄糖酸氧化试验 原理：某些细菌可氧 化葡萄糖酸钾，生成- 酮基葡萄糖酸。-酮基 葡萄糖酸是一种还原 性物质，可与班氏试 剂起反应，出现棕色 或砖红色的氧化亚铜 沉淀。 应用：主要用于假单 胞菌的鉴定和肠杆菌 科菌分群。 .15 氧化发酵试验 原理：细菌在分解葡萄糖 的过程中，必须有分子氧 参加的，称为氧化型；能 进行无氧降解的为发酵型 ；不分解葡萄糖的细菌为 产碱型。发酵型细菌无论 在有氧或无氧环境中都能 分解葡萄糖，而氧化型细 菌在无氧环境中则不能分 解葡萄糖。本试验又称氧 化发酵（O/F或Hugh Leifson，HL）试验，可用 于区别细菌的代谢类型。 应用：主要用于肠杆菌科 与其它非发酵菌的鉴别。 肠杆菌科、弧菌科细菌为 发酵型，非发酵菌为氧化 型或产碱型。也可用于鉴 别葡萄球菌（发酵型）与 微球菌（氧化型）。 .16 枸橼酸盐利用试验 原理： 枸橼酸盐培养基系一综合性培养基，其中枸橼酸钠 为碳的唯一来源，磷酸二氢铵是氮的唯一来源。 有的细菌能利用枸橼酸钠为碳源，能在培养基上生 长，并且能分解枸橼酸盐，最后产生碳酸盐，使培 养基变为碱性。 培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色。 不能利用枸橼酸盐为碳源的细菌在该培养基上不生 长，培养基不变色。 .17 呼吸酶类试验 氧化酶试验 原理：某些细菌具有氧 化酶，能将二甲基对苯 二胺或四甲基对苯二胺 试剂氧化（先使细胞色 素C氧化，电子传递体） 成红色醌类化合物。 该实验用于分辨革兰氏 阴性杆菌中的肠杆菌科 （阴性）与弧菌科（阳 性）。 触酶活力试验 原理：具有触酶的细菌 能催化过氧化酶，放出 生态氧，继而形成氧分 子，出现气泡。 方法：取3%过氧化氢 0.5ml，滴加到不含血液 的被检细菌琼脂培养物 上，或滴加到不含血液 的肉汤培养物中，观察 结果。 结果：培养物出现气泡 者为阳性。 .18 硝酸盐