国家自然科学基金申请书—针刺对类风湿关节炎转基因鼠易感基因的调控的研究.rtf

项目类别申报学科代码1科学部编号 c c03050309 国家自然科学基金 申 请 书 项目名称：针刺对类风湿关节炎转基因鼠易感基因的调控的研究 申 请 者：刘雨星 所在单位：成都中医药大学 邮政编码：610075 通讯地址：四川省成都市十二桥路37 号 电 话传 真申请日期：2000/3/16 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 一九九七年制 填 报 说 明 一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请 办法及规定。申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达 要明确、严谨，字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表 达。第一次出现的缩写词，须注出全称。 二、申请书为十六开本，复印时用 b5 复印纸，于左侧装订成 册。第三页起各栏空格不够时，请自行加页。一式六份（至少一份 为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然 科学基金委员会对口科学部。地区科学基金项目，申请书另报送省 （自治区）科委一份原件。 三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别 和申报学科代码1 由申请者填写。 四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为 项目组成员参加研究： 在读（含在职）研究生 已离退休的科研人员 申请单位的兼职科研人员 五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请 （含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含 重点项目、重大项目），不得超过两项。 六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。 七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的 专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原 件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。科 学部将对此信息保密。 八、国家自然科学基金委员会通讯地址：北京市海淀区花园北 路35 号东门 邮政编码：100083 一 一、简表简表 研 究 项 目 名 称 中 文 针 刺 对 类 风 湿 关 节 炎 转 基 因 鼠 易 感 基 因 的 调 控 的 研 究 英 文 the research on regulating susceptible gene of ra transgenic rats by acupuncture 类别 a.自由申请 b.高技术探索 c.青年 d.地区 高技术探索 项目主题号 e.重大 f.重点 h.专项c 申报 学科 名称 1中医针灸学名称2 a. 基础研究 b. 应用基础 代码 1c03050309代码2a 申请金额15.00 万元 起止年月 2001 年 1 月至 2003 年 12 月 所用实验室 a. 国家重点 b. 部门开放实验室编号 申 姓 中 文 刘雨星 性a. 男 出生年月1968/10/05 民 名称 汉 拼 音 liuyuxingb. 女a身份证号43010319681005155 代码 01 专业 技术 名称 助理研究员 学 位 a. 博士 b. 硕士 博士学位 授予国别 国(地区)名 a. 院士 b. 博士生导师 代码 0063 代 码 所 在 名 称成都中医药大学系（所）针推学院单位代码61007501 性 质a. 高等院校 b. 科研机构 邮政编码610075 隶属 名称四川省 a 申请者电话代码 951 所在地 四川 省 (自治区、直辖市) 成都 市(县) 金牛 区 十二桥 街(路) 37 号 项 总人数高级中级初级博士后博士生硕士生参加单位数 951122 姓名身份证号 专业技 术职务 所在单位名称及代码 项目中 的分工 签字 梁繁荣 11010119561101151 教授 成都中医药大学 协助课题设 主 卢光琇 43010519390406302教授 湖南医科大学 转基因，分 子生物学 郝亮 43300119700613153 博士成都中医药大学 神经免疫 学，病理学 唐勇 51112119740508571 研究生成都中医药大学转基因 宋开源 51010319370418251教授 成都中医药大学 分子生物学 黄迪君 51010319410318252教授 成都中医药大学针灸治疗 吴 轰 43010219350626351 教授 湖南医科大学 转基因 罗 荣 51092219720507473 研究生 成都中医药大学 神经免疫 1 研 究 摘 本 课 题 以 类 风 湿 关 节 炎 ra 转 基 因 小 鼠 为 研 究 对 对 象 , 采 用 电 针 刺 激 经 穴 , 观 察 了 电 针 对ra 易 感 基 因 的 敏 感 性 及 其 mrn a 在 相 关 组 织 中 表 达 的 影 响 。 从 分 子 免疫 学 及 遗 传 学 角 度 探 索 针 刺 对ra易 感 基 因 的 调 控 ， 维 持 机 体 自 身 免 疫 稳 定 性 的 作 用 。 为 针 刺 有 效 治 疗ra提 供 客 观 依 据 ， ， 深 化 针 刺 治 疗ra的 作 用 机 理 研 究 。 主题词1. 主题词数量不多于三个；2. 主题词之间空一格（英文用/分隔）。 中文针 刺类 风 湿 关 节 炎易 感 基 因 英文acupuncture/ rheumatoid arthritis (ra)/ susceptible gene 简 表 填 写 要 求简 表 填 写 要 求 一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字。简表中所有代码以最 新发布的国家自然科学基金申请项目分类目录及代码为准填写。高技术探索课题主题号按高 技术新概念新构思探索课题项目指南中主题号填写，申请其重点项目时项目类别也填写 b，并在申 请书封面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。 二、凡选择性栏目，将相应提示符 a、b 等之一填入该栏的右下角。 三、部分栏目填写要求： 项目名称应确切反映研究内容和范围，最多不超过25 个汉字 (包括标点符号）。 基础研究指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。 应用基础研究指有广泛应用前景，但以获取新原理、新技术、新方法为主要目的的研究。 申报学科申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。 申请金额以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。 起止年月起始时间从申请的次年 1 月算起。终止时间为完成年度的 12月。 所用实验室系指研究项目将利用的实验室，仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的 开放实验室。 所在单位名称及代码按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得 填“中科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字，一律写中文， 例如：中国航天工业总公司第七一所。首次申请国家自然科学基金的单 位，尚未编入单位代码，其代码暂不填写。 参加单位数指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位(合作者所在单位)，以 阿拉伯数字表示。 项目组主要成员指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作 用的人员，本人应在申请书上亲自签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。 研究内容和意义摘要与主题词均录入软盘。 2 二、立论依据二、立论依据 （包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处） 对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义； 对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论 述其应用情景。 1类风湿关节炎（ra）是全身性自身免疫性疾病，现代研究表明自身免疫性病具有明显 的遗传倾向（易感性），尤其是与控制免疫识别的 hla 等位基因有关。kaiw 等发现 93%ra 有高滴度类风湿因子（rf）及脾肿大症状明显者，携带有 dr4基因 1，袁氏等发现 51%ra 患者为 dr4携带者2，这说明 hla-dr4在 ra 患者中频率很高，人体 hla-dr4与 ra 的发生及 症 状 加 重 等 密 切 相 关 。 其 它 有 关 亚 型 hla-dw4（ drb1*0401 ） 、 hla- dw14（drb1*0404）、hla-dw15（drb1-*0405）亦与 ra 密切相关4、5。通过显微注射法将 人 hla-dr4 基因整合至 c57bl/6*dba/1f1 代受精卵原核中（转基因小鼠）可使型胶 原纤维诱导的类风湿关节炎发生时间提早，病理损伤加重等，证明 hla-dr4为类风湿关节 炎的易感基因，是 ra 易感的基础6。hla-dr4携带者发生 ra 的危险性显著增高，是正常 人群的 3-4 倍7-9。有关 ra 的发病机制研究发现抗原进入人体后，首先被巨噬细胞吞 噬，经消化后与其细胞膜 hla-dr 分子结合成复合物，作用于 tx 细胞的受体，使 t 辅助细 胞被活化，引起一系列免疫反应，其中易感基因（hla-dr4）容易启动自身免疫反应，促 使cd4+b细胞、t 细胞活化，侵入滑膜组织，致使 il-1、il-9、ifn-y增高，滑膜细胞增 殖过盛及血管翳形成，从而导致骨与软骨关节破坏等10。现代研究表明，当 hla-dr4敏 感性增高及其 mrna 在组织中的表达，使免疫识别功能紊乱，促进和激活 t 细胞等释放过 量具有杀伤作用的细胞因子等对自身结缔组织产生攻击反应，导致机体免疫稳定性的破 坏。因此，有效调控易感基因（hla-dr4）的敏感性及其（相关）表达是控制 ra 的根本性 环节。 2针灸治疗 ra已进行了大量的临床及实验研究。大量临床研究显示；采用针刺、温 针、铺灸、电热灸、疤痕灸及麦粒灸、蜂针、耳针等治疗 ra 治愈率为11-16%，总有效率 在80-98%11。且温针能使 ra 患者外周血il-2 及 nk 细胞活性升高，同时能使 igg、iga 下降；rf 转阴；esr降为正常等12；说明针灸治疗能有效改善ra 的对临床症状，具有 疗效稳定，不易复发等特点。对其作用机理研究发现：针灸对佐剂性关节炎模型动物的 异常免疫功能有调节作用，艾灸可诱导大鼠脾淋巴细胞增殖反应，促进 il-2，抑制 il- 3-1 活性和清除免疫复合物的作用。13用6-羟基多巴损毁交感肾上腺素能神经，可导致佐剂 性关节炎大鼠恢复减慢，而电针可促进模型大鼠被破坏的交感肾上腺素能神经末梢再生和 关节炎的恢复.14同时研究发现电针可抑制 ra 炎症局部原癌基因 c-fos 的表达，促进炎 症局部 eop 的合成与释放15。在探讨针灸治疗 ra 作用机理所选用的动物模型方面，多 用不完全福氏佐剂，完全福氏佐剂或型胶原蛋白所诱发的关节炎模型。但对于应用 ra 转基因鼠模型探讨针刺对 ra 易感基因的敏感性及表达的作用，尚未见诸报道和研究。 3ra 为全身性自身免疫性疾病，包括免疫机能、内分泌、激素等的异常改变。而且 ra 是一种难治性疾病，虽然免疫调节剂、慢作用抗风湿改善病情药对控制 ra 有一定作 用，但毒副作用较大，如骨质疏松，肝、肾功能损害等从而影响治疗。而针刺治疗安全、 无毒副作用，且具有整体性、综合性的特点，通过腧穴经络脏腑的有机联系来改善机 体各系统的功能状态、达到有效治疗作用。因此，针刺治疗类风湿关节炎等全身性疾病有 其优势。 本课题拟研究针刺对类风湿关节炎易感基因的调控，从分子免疫学与遗传学角度探索 针刺维持免疫稳定性的作用。 参考文献参考文献 1. kai w, etal. j experiment medicine; 181 :1597-1601.1995 2. 袁国华，等中华内科杂志；37(4)：234-237 1997 3. 吴轰、李芬等第二届中南六省中西医结合风湿病学术会议论文汇编p1-3，1998 4. richard p.pollsm etc. rheumtology mkashp.znd edition p74-117.1997 5. eduard e.r.etc. j expmed 185(6)：1118-1122, 1997 6. 王米渠主编国际中医遗传学与中医心理学论丛，新加坡医药卫生出版社出版，p1-4，1998 7. michaelf. arthitis and rheumatism 42(6):1071-1073, 1999/11/26 8. stmon k.etc cell 58:583-589, 1989 9. 赵武述，等现代临床免疫学，第一版，人民卫生出版社，1994，590- 592 10. 吴轰，高洁生中华医学会湖南分会及中西结合学会、湖南风湿免疫专业委员分首届学术年会 专题报告及论文汇编，长沙，1999 年 10 月 11. 王天俊上海针灸杂志，1993.12（4）：176-178 12. 刘心莲，等中国针灸，1994，59（2）:1-4 13. 唐照亮，等针刺研究，1996；21（2）：67-70 14. 文琛，等神经解剖学杂志，1995；11（3）：256 15. 赵仓焕暨南大学学报，1997（5）：158 3-2 三、研究方案三、研究方案 1. 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 目标： 通过针刺对类风湿关节炎易感基因的调控，从分子免疫学与遗传学角度探索针 刺维持免疫稳定性的作用。 内容： 1）ra 模型复制模型复制 1 通过显微注射法将人 hla-dr4（cdna 由美国康纳尔大学 jacksliver 分子医学研 究室提供）整合于 c57bl/6 x dba/2 小鼠受精卵原核中复制 hla dr4 转基因小鼠 模型并传代。 2 在转基因小鼠基础上，应用 ii 型胶原纤维加福氏完全佐剂诱导 ra 转基因阳性小鼠 模型和 ra 转基因阴性小鼠模型。 3 应用 ii 型胶原纤维结合福氏完全佐剂诱导 dba/2小鼠复制非转基因 ra小鼠模型。 2）实验分组及方法）实验分组及方法 1 分组 将 ra 转基因阳性小鼠 120 只，ra 转基因阴性小鼠 120 只，非转基因 ra 小 鼠 120 只，随机均分为：a：模型组 b：针刺经穴治疗组 c：针刺非穴治疗组 d：西药治疗组 （2）方法 针刺方法：在 ra 模型复制成功后采用电针（用 wq-10c 型多用电子穴位测定治疗 仪）治疗；刺激参数选用疏密波，频率为 20-100hz，电压 2-4v，针刺深度为 0.3cm,持续 时间15 分钟，每日上午治疗 1次，7 天为一疗程。 针刺腧穴为“肾俞”、“足三里”，参照实验针灸学及动物比较学方法定位。选 穴依椐：文献报导针刺肾俞、足三里等能有效调整 ra 的免疫机能异常。肾俞为肾脏之气 输注于背部的腧穴，且肾为先天之本，主骨，骨与骨之间的连接为关节。因此，针肾俞能 快捷有效地调理肾之经气。足三里为胃之下合穴，善治脾胃之疾，脾主肌肉、四肢，脾胃 为后天之本。 西药治疗方法：选甲氨蝶呤。以人 0.4mg/kg-1.w-1 浓度椐小鼠的体重表面积的关系 换算所得剂量溶于生理盐水行腹腔注射连服 7天，每天 1 次。 3）主要检测指标：）主要检测指标： （1）应用 pcr southern blot 杂交检测dna 整合率判断转基因复制成功与否。 （2）hla dr4敏感性的检测：ara 发生时间及发生率；bra 的病理组织学改变， 包括血管翳形成，软骨破坏，骨质侵蚀等；c、对免疫细胞活性的影响，包括 tc、nk 等；d、ii 型胶原纤维抗体水平（用 elisa 法检测血清 ii 型胶原抗体水平）。 （3）hla-dr4 mrna 的表达：主要观察其在脾、肝、肾、关节滑膜等组织中的表达，采 用rt-pcrnorthern 杂交法测定 dr4 mrna 的表达。 拟解决的问题拟解决的问题 （1）转基因鼠模型的建立与 hla-dr4基因的稳定保持与传代； （2）ra转基因小鼠的类风湿关节炎表现水平。 （3）运用最新的遗传工程和分子生物学工程技术,建立的转基因小鼠模型能在基因水 平深化针刺治疗的作用机理研究； （4）对发病的关键性环节-易感基因（-）的敏感性增高与在相关组织 的表达过盛进行研究。 4 ? ? ? ra?ra? ?ra? ii? ?ra? ?(ra) ?,?,?,? hla-dr4 mrna? ?ra? ?ra? dba/2? 2拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 传 代 dna 整合率检测 5-1 可行性分析：可行性分析： (1).胶原纤维结合福氏完全佐剂诱导的 hla-dr4 转基因小鼠 ra 模型成功率高，症状典 型，为研究提供了理想模型； (2).转基因工程技术成熟，转基因小鼠饲养条件、繁殖条件完备，均有专业技术人员和 专门实验室，hla-dr4转基因小鼠模型已建立，并已建立鼠株繁殖传代（已有 8 代）； (3).课题组长期从事针灸及中西医结合治疗类风湿关节炎的临床与实验研究，具有扎实 的前期工作基础，如出版了相关论著、发表了多篇相关学术论文和获得了相关科技成果 奖； (4)课题组成员为多学科结合，并长期从事科研管理及实验研究工作，有较强的科研业 务能力，已完成了国家自然科学基金课题 3 项。研究方法成熟，已运用这些方法从事过 其它项目的研究。 (5)良好的科研场所和仪器设备，有国家级重点学科（湖南中国医学遗传中心）及省级重 点实验室（针灸学实验室）提供实验研究条件，可以确保研究任务的完成； 3 本项目的创新之处本项目的创新之处 1首次以转基因小鼠模型研究针刺对 ra 的作用机理； 2首次研究针刺对 ra 易感基因（hla-dr4）的敏感性及表达的调节，在分子生物学 的深度探索针刺治疗 ra 的根本机理； 3首次研究针刺（肾俞、足三里）对 hla-dr4 的敏感性及在脾、肝、肾、关节滑膜 等组织中的表达的影响，在个体、细胞、分子水平上为针刺“治本”提供客观依 据。 4首次从易感基因的调控研究角度探索针刺对免疫稳定性的作用机理。 5-2 4. 年度研究计划及预测进展 2001.12001.6 建立 hla- dr4转基因小鼠株，并将建株小鼠传代和检测其 dna 整合率。hla-dr4mrna表达。 2001.72001.9 对转基因小鼠进行型胶原纤维加完全福氏佐剂诱导，完成模型复 制。 2001.102002.3 复制 ra 转基因小鼠模型并观察其易感性。 2002.52003.4 比较观察针刺经穴对 ra 转基因小鼠模型易感基因的影响，包括其敏 感性及其 mrna 的表达。 2003.52003.12 研究资料的分析、综合处理，论文写作与发表，课题总结。 5 预期研究成果 发表学术论文等。 6 四、研究基础 四、研究基础 1. 与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 1) 课题组长期系统指导硕、博士研究生完成有关类风湿关节炎的课题研究。 2) 发表相关学术论文共计 15篇，并出版了中医风湿病学专著。 3) 承担了四川省中医管理局课题-多种针法对佐剂性关节炎镇痛效应的比较研究 （已 结题）。 4) 四川省教委课题：下丘脑在针刺镇痛后效应中作用机制研究 （1997.102000.10） 5) 四川省中医管理局课题：类风搽剂治疗类风湿关节炎（ra）的研究，获省中医管理 局中医药科学技术进步奖。 6) 用转基因动物模型研究扶正培本治则与免疫调节的关系，国家自然科学基金 （39370865） （1994.11997.12） 2. 已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（包括利用国家重点实验室和 部门开放实验室的计划与落实情况） 1) 拥有日本尼康倒置显微镜及显微操作仪。美国生产的 bio-rad 电转印仪及美国生 产 的 hybiod 分子杂交炉。 2) 拥有国家级重点学科（中国医学遗传中心湖南）的生殖工程研究室和四川省省 级 重点实验室针灸学实验室（痛症研究室）。 7 3. 申请者和项目组主要成员的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要 论著目录*和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务；青年科学基金申请者还应 注明学位论文名称及导师姓名与工作单位 刘雨星 刘雨星 助理研究员，硕士学位，课题总体设计与负责助理研究员，硕士学位，课题总体设计与负责 主要研究工作经历 主要研究工作经历 1987 年9 月至1992 年 7 月 湖南中医学院针灸系读本科，获医学学士学位； 1992 年9 月至1995 年 7 月 成都中医药大学中西医结合基础硕士研究生，获医学硕士学位； 1995 年7 月至今 成都中医药大学针灸学实验室助理研究员。 硕士学位论文 硕士学位论文: 针刺调整大鼠倒相节律活动的实验研究 导师导师: 宋开源教授 成都中医药大学 所参加课题及其他所参加课题及其他 1、四川省教委 针刺调整轮班性节律紊乱的中枢机制研究，1998.10至 2000.10；主研。 2、国家体育总局 运动性疲劳的中医药防治及部分生理生化机制研究，1998.4至 2000.4；主研。 3、四川省教委重点课题：下丘脑在针刺镇痛后效应中作用机制研究 1997.102000.10；主研 参加编撰中国当代民族医药集成（副主编），应用时间生物学等学术专著5 部； 第一作者已发表论文 3 余篇，第二、三作者发表论文8 篇 梁繁荣 教授 梁繁荣 教授 硕士 协助课题设计，指导 硕士 协助课题设计，指导 主要工作简历主要工作简历 1982 年12 月-1984 年 8 月 湖南中医学院针灸教研室助教 1984 年9 月-1987年 7 月中国中医研究院攻读针灸硕士研究生 1987 年至今成都中医药大学副校长、教授、博士导师 目前承担课题 目前承担课题 1、四川省科委重点课题：液压针刺补泻手法仪的研制 1999年 3月至 2002年3 月 课题负责人 2、四川省教委重点课题：下丘脑在针刺镇痛后效应中作用机制研究 1997年月 10月至 2000年10 月 课题负责人 多种针法对佐剂性关节炎镇痛效应的比较研究，四川省中医管理局课题，已鉴定。 发表相关论文 发表相关论文 不同针灸疗法对佐剂关节炎大鼠外周镇痛机理的研究 中国针灸1999年 6期。 电 针 对 佐 剂 性 关 节 炎 大 鼠 炎 症 局 部 b-ep 和 lek 含 量 的 影 响 中 国 中 医 基 础 医 学 杂 志1999，16（5）：41-43 卢光卢光琇 琇 教授 教授 本科 分子生物学及转基因本科 分子生物学及转基因 个人工作简历个人工作简历 1986-5 至1988-10湖南医科大学生殖工程研究室主任； 1990-10 至1991-3美国红十学会病毒研究所学习分子生物学； 1988-10 至今湖南医科大学生殖工程中心主任、中国医学遗传中心副主任。 承担课题承担课题 湖南省科委课题，人类疾病模型的转基因动物研究，1998-2002，课题负责人 鼻咽癌易感动物模型的制备和研究 1992-1995，国家“八五”攻关项目，课题负责人； 人类体外受精、胚胎及供胚胎移植技术 获湖南省科技进步一等奖，同时获国家科技进步三等奖； 发表相关论文发表相关论文 显微注射法制备转基因小鼠模型的研究 动物学杂志1997年 2期 显微注射法制备携带 eb 病毒潜伏膜蛋白转基因小鼠,湖南医科大学学报1996年 1期 发表学术论文 20 篇，著有不孕症妇女心理困境分析及其对策研究等专著。 * 论文：作者题目刊名年份卷（期）页码 专著：作者书名出版者年份 8-1 郝亮 博士研究生 郝亮 博士研究生 神经免疫学，病理学 神经免疫学，病理学 个人工作简历个人工作简历 199281995.8 在湖南省怀化市中医院从事针灸临床工作。 1995.81998.8 在成都中医药大学攻读针灸专业硕士研究生。 19989至今 在成都中医药大学攻读针灸专业博士研究生。 所承担的课题 国家自然科学基金课题 艾灸治疗类风湿关节炎的神经免疫调节机制的研究，1999-01 至2001-08， 一般参加 发表相关论文发表相关论文 择时电针对实验性血瘀证大鼠全血 5-羟色胺和组胺含量的影响 四川生理科学杂志 1999；21（特刊）：21-22 参加编写继续再教育丛书针灸学中“痹证”部分。1997. 唐勇 硕士研究生唐勇 硕士研究生 转基因 转基因 个人工作简历 个人工作简历 1992.8.1998.8.在四川省仁寿县禄加区卫生院从事针灸临床 1998. 9至今 在成都中医药大学攻读针灸专业硕士研究生 所承担的课题所承担的课题 四川省科委课题“电针诱导类风湿关节炎模型大鼠免疫耐受的作用机制”，1999.3-2002.3 * 论文：作者题目刊名年份卷（期）页码 专著：作者书名出版者年份 8-2 五、经费预算 五、经费预算 支 出 科 目 金 额 （万元） 计 算 根 据 及 理 由 1. 合 计 15.00 1. 科研业务费科研业务费 1.30 1.1 调研 0.60 1.2 查新检索 0.05 1.3 业务资料印刷 0.15 1.4 学术交流,论文发表0.50 2. 消耗材料费消耗材料费 6.70 2.1 实验动物 1.00 800 x 12元/只 2.2 动物饲料 0.20 2.3 玻璃器皿等 0.10 离心管, 玻管, 2.4 dna 全套试剂 2.50 2.5 mrna 试剂 1.00 2.6 有机试剂 0.90 3. 科研协作费科研协作费 2.00 协作, 指导等劳务费用 4仪器设备费仪器设备费 3.00 实验室及仪器设备等的租用, 部分仪器购置。 5. 科研管理费科研管理费 1.00 4.1 课题管理费 0.75 4.2 评估验收 0.25 6. 实验室改装费实验室改装费 1.00 注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 实验室改装费 5. 协作费 6. 项目组织实施费。开支范围详见国家自然科学基金资助项目财务管理办法第二章。 9 六、申请者正在承担的其它研究项目六、申请者正在承担的其它研究项目 （攀登计划、863 计划、攻关任务和各部委、省市任务等项目的名称及编号、任务来 源、起止年月、负责或参加以及与本申请项目的关系等情况） 1. 四川省教委重点课题：下丘脑在针刺镇痛后效应中作用机制研究 1997.102000.10；主研 2. 四川省教委 针刺调整轮性节律紊乱的中枢机制研究，1998.10 至2000.10；主研。 3. 国家体育总局 运动性疲劳的中医药防治及部分生理生化机制研究，1998.4 至 2000.4；主研。 七、申请者承担（负责或参加）国家自然科学基金资助项目的情况七、申请者承担（负责或参加）国家自然科学基金资助项目的情况 批准号项目名称起止年月负责或参加进展或完成情况 10 对申请者负责的前一个已结题科学基金资助项目（项目名称及批准号）完成情况， 后继研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结 摘要（300 字）及已发表主要相关论文首页复印件（限三篇）。 八、申请者承诺八、申请者承诺 我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守国家自 然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，按时 报送有关材料。 申请者（签章） 年 月 日 11 九、推荐意见九、推荐意见 （不具有高级专业技术职务的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同行专家推 荐