全国艾滋病检测技术规范(试行.ppt

全国艾滋病检测技术规范 （试 行） 甘肃省疾病预防控制中心 性病艾滋病科 赵煜君 艾滋病检测工作具有严格的科学性和 政策性，为了加强我省艾滋病（AIDS）检 测工作的规范化管理，不断提高HIV抗体检 测实验室的检测工作质量，确保每一份检 测的准确性和可靠性，及时有效地发现感 染者和上报疫情，必须认真学习、贯彻执 行全国艾滋病检测工作管理办法和 全国艾滋病检测技术规范中各项规定。 只有严格按要求开展检测工作，才能使我 省HIV抗体检测各级实验室管理逐步规范化 、制度化，更好地发挥HIV检测在艾滋病防 治工作中的作用。 n全国艾滋病检测工作规范 卫生部1997年9月颁 布 n全国艾滋病检测工作管理规范 卫生部待颁 布 n全国艾滋病检测技术规范（试行） 中国CDC2003年5月颁 布 全国艾滋病检测技术规范（试行） 包括： 1、样品的采集和处理 2、HIV抗体、抗原检测 3、HIV核酸检测 4、艾滋病检测实验室安全防护 5、艾滋病实验室质量管理 6、艾滋病确认实验室质量考评办法 7、HIV诊断试剂临床评估方案 全国艾滋病检测技术规范（试行） 附件： 1、HIV抗体筛查报告 2、HIV抗体筛查阳性送检率 3、HIV抗体检测确认报告 4、HIV抗体检测数及阳性人数统计报表 5、艾滋病职业暴露个案登记表 6、职业暴露后预防HIV感染的评价和处 理程序 附录： 1、HIV RNA测定 样品的采集和处理样品的采集 样品是血液（血清、血浆和全血）、唾 液和尿液 n血清样品采集：抽取的静脉血，室温自然 放置1-2小时，待血液凝固后， 3000rpm/min离心15分钟，吸出血清备用 。 n抗凝血样品的采集：用加有抗凝剂的真空 采血管或注射器抽取静脉血，移至加抗凝 剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞 备用。 样品的采集和处理样品的保存 nHIV抗体检测： 血清或血浆存放于-20以下，短期（ 一周）内检测可存放于2-8。 n抗原和核酸的检测： 血浆和血细胞存放于-20以下，如长 期保存应置于-80。 样品的采集和处理样品的运送 n血清或血浆（一般不运送全血）：置于带 盖的塑料管内，有明显的标记（编号或姓 名，采集时间）附送检单。 n短期内（48小时）可室温运送，较远或 较热，应在2-8条件下运送。 样品的采集和处理样品的接受 n样品由经过培训的工作人员接受。 n核对样品与送检单，检查有无破损和溢漏 ， 记录有无严重溶血、污染等情况。 n自发荧光的样品不可用荧光测试。 n消毒处理被污染的盛器和物品。 HIV抗体检测试剂 1、筛查试剂要求 n国家食品药品监督管理局注册批准 n批批检合格 n临床评估质量优良 n在有效期内 2、确认试剂要求 n国家食品药品监督管理局注册批准 n种类：免疫印迹、条带免疫、免疫荧光 n常用试剂：免疫印迹 HIV抗体检测试剂 n严格按照试剂说明书操作 n防止交叉感染 n严格遵守实验室操作规程 HIV抗体检测筛查试验检测程序 n筛查试验： （1）阴性反应，报告HIV抗体阴性 （2）阳性反应，须进行重复检测 n重复检测： （1）采用原有试剂和另外一种不同原理或不同 厂家的试剂 （2）如两种试剂均阴性，报告HIV抗体阴性 （3）如均阳性或一阴一阳，送确认实验室确认 ， 新采标本和原标本一并送检 HIV抗体检测筛查试验的流程图 样品 筛查检测 重复检测 筛查试剂 阳性反应阴性反应 一阴一阳均阴性反应均阳性反应 阴性报告 送确认实验室 进行确认 原有试剂加另外一种筛查试剂 HIV抗体检测确认试验 试剂：有免疫印迹试剂HIV1+2混合型和单一型 1.用HIV1+2混合型 阴性，报告HIV抗体阴性 阳性，报告HIV-1抗体阳性 如不满足阳性标准，判为HIV抗体不确定 2.如出现HIV-2型的特异性指标条带用HIV-2单一 型 阴性，报告HIV-2抗体阴性 阳性，报告HIV-2抗体阳性 如需鉴别，应进行核酸序列分析 HIV抗体检测确认试验流程图 免疫印迹法（HIV1/2混合型） 阴性反应HIV-1阳性反应不确定反应 出现HIV-2指示条带 免疫印迹法（HIV-2） 阳性反应 阴性反应 报告HIV-2血清学阳性 必要时测核酸 不确定反应阴性反应 阴性报告HIV-1阳性报告 每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告；如随访期间出现阳性反应则报告阳性 HIV抗体检测确认试验结果和判定 1.HIV-1抗体阳性 至少有二条Env带出现或至少有一条Env带和 P24 带同时出现 2.HIV-2抗体阳性：同时符合以下二条标准 符合WHO阳性判定标准，即出现至少二条Env 带 符合试剂盒提供的阳性判定标准 3.HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现 4.HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判阳性 两种不同结构蛋白 HIV-1 HIV-2 Env Gp160 Gp140 Gp120 Gp105 Gp41 Gp36 Gag P55 P56 P24 P26 P17 P16 Pol P66(65) P68 P51 P53 P31 P34 检测结果的报告和处理HIV抗体筛查 1.筛查试验阴性出具HIV抗体阴性报告 2.筛查试验阳性可出具“HIV抗体待复查”报 告 （附表1），不能出阳性报告。尽快进行以 下 处理： n填写HIV抗体复查送检单（附表2） n尽可能重新采集受检者的血样 n将两份血样（或原血样）连同复查送检单一 并送HIV筛查中心实验室，转送确认实验室或 直接送确认实验室确认 检测结果的报告和处理HIV抗体筛查 n筛查中心实验室尽快用两种试剂复检。 n如结果均阳性或一阴一阳，则将标本和复查单一 并送确认实验室确认 n如结果均为阴性，在HIV抗体筛查报告上盖上“HIV 抗体阴性”，及时将结果反馈送检单位，不必再 送 确认实验室 n做好检测后咨询 检测结果的报告和处理HIV抗体确认 1、HIV抗体阳性应出具阳性确认报告（附 表 3），并做好咨询，保密和报告工作 2、HIV抗体阴性应出具阴性确认报告，如 近 期有高危行为，为排除“窗口期”的可能， 可以进行P24抗原或HIV核酸检测或2-3个 月后再做抗体检测 检测结果的报告和处理HIV抗体确认 3、HIV抗体不确定，应出具HIV抗体不确定确认报 告，在备注中应注明“3个月后复查”，同时进 行 以下处理： -随访复查：每3个月随访复查一次，连续2次，共 6 个月。仍呈不确定或阴性，则报告HIV阴性； 如 随访期间发生带型进展，符合阳性判定则报告 HIV-1或HIV-2抗体阳性 -必要时可做P24抗原或HIV核酸测定，结果只作 辅 助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果 -做好检测后咨询 HIV抗体检测情况报告流程图 艾滋病筛查实验室 艾滋病筛查中心实验室艾滋病确认实验室 艾滋病确认中心实验室同级卫生行政部门 国家艾滋病参比实验室省级卫生行政部门 中国CDC性艾中心 每季首月5日前报告 上季检测情况 每季首月10日前 报告上季检测情况 每季首月15日前 报告上季检测情况 每季首月20日前 报告上季检测情况 没有艾 滋病筛 查中心 实验室 的地区 每季首月5日前 报告上季检测情况 HIV感染监测工作中实验室检测策略 符合以下三条，可按HIV感染报告疫情。 1.艾滋病确认中心实验室条件： 本年度质量考评成绩优良 有严格的实验室质量管理制度 2.HIV抗体筛查试剂条件 经过国家食品药品监督管理局批准或注 册，批批检验合格，临床评估质量优良 复检用两种不同原理或不同厂家的筛查 试 剂（包括进口或国产第三代ELISA试剂 ） HIV感染监测工作中实验室检测策略 3.HIV抗体阳性的判定条件 两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA 试 剂复检样品OD值与临界值（Cutoff）的比 值（S/CO）6.0 两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA 试 剂复检样品S/CO比值在1.0-6.0之间，或 两 种试剂复检结果一阴一阳，应进一步确认 检测及疫情报告流程图 送检样品 用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括第三代ELISA试剂） 第三代ELISA试剂复测 结果的S/CO比值6.0 第三代ELISA试剂复测结果 的S/CO比值1.06.0之间 确认试验 判断阳性，上报疫情 判断阴性 阳性反应选用筛查试剂阴性反应 两种均阳性一阴一阳两种均阴性 阳性 阴性 P24抗原检测 1、适用范围： nHIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断 nHIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助 鉴别诊断 n第四代HIV-1抗原/抗体ELISA检测呈阳性 反应，但确认试剂阴性者的辅助诊断 n监测病程进展和抗病毒治疗效果 P24抗原检测 2、试剂：经批准注册的ELISA双抗体夹心法 试剂 3、操作：严格按照试剂盒说明书 4、结果报告和解释： P24抗原阳性必须经过中和试验确认 P24抗原阳性仅作HIV感染的辅助诊 断依据，不能确诊 P24抗原阴性只表示本试验无反应，不 能 排除HIV感染 HIV核酸检测实验室条件 n功能分区：在不同的房间分别设有试剂准 备区、样品处理区，扩增区和扩增产物分 析区四个功能不同的独立工作去 n工作人员：必须具有艾滋病实验室的上岗 资格，一并接受过安全及操作技术培训 n设施和设备：根据检测项目配备相应的设 施和设备 各区的设施和设备为区域性专用 各区备有专用工作服、帽子和鞋套，必 要 时配备防紫外线眼镜或面罩 HIV核酸检测方法和试剂 n分类：定性和定量检测两类 定性：HIV感染的辅助诊断 定量：监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治 疗 效果 n方法： 定性：常用PCR或RT-PCR技术 定量：常用逆转录PCR实验（RT-PCR）核酸 序 列扩增实验（NASBA）分支DNA杂交 实 验（bDNA） n试剂：通用的扩增试剂，引物来自文献或自行 设 计 HIV核酸检测检测程序 n样品的采集和处理 n核酸提取 n试剂配置 n加样和扩增 n扩增产物测定和分析 n定量检测 HIV核酸检测结果的判定和报告 1、定性检测：根据扩增产物的电泳图像判 定 阳性结果要进行核酸序列测定确定 阴性：报告本次实验结果阴性，不排除 HIV感染 阳性：作为诊断HIV感染的辅助指标， 不 单独用于HIV感染的诊断 报告定性检测结果时注明反应条件和所 使用的引物序列 HIV核酸检测结果的判定和报告 2、定量检测： 按照仪器读数报告结果，注明试验方法 、 样品种类和样品量 注明最低检测限水平，低于最低检测限 的 结果不能排除HIV感染 附上仪器打印的数据 HIV核酸检测实验室管理 制定严格的实验室管理制度，并严格遵 照执行。 n生物安全 n严格执行分区制度 n仪器和材料的专用制度 n单向流向制度，不得逆向流动 n废弃物处理制度 n质量控制和评价 艾滋病检测实验室安全防护 n建立安全制度 n人员管理和培训 n安全保障措施 - 个人保健 - 带入或带出实验室的物品 - 减少利器的使用 - HIV消毒方法 n实验室事故处理 - 紧急处理措施 - 事故登记（附表5） - 报告和检测 - HIV职业暴露后的药物预防（附表6） 艾滋病实验室质量管理 n质量保证（QA） n质量控制（QO） n质量评价（EQA） HIV确认实验室质量考评办法 n考评目的 - 评价HIV抗体检测和确认的水平，为各实验室 提 供外部质控机制，为检查和重新认定资格提供 技术依据 - 促进实验室建设，逐步完善实验室功能 - 提高实验室技术和管理水平 n考评对象及组织单位 - 所有经正式批准的实验室为受考评单位 - 中国CDC组织并委托性病艾滋病中心负责考评 工作 - 考评每年一次 HIV确认实验室质量考评办法 n考评内容和方式 - 内容：HIV抗体筛查和确认技术，结果报告和各 项职能工作的完成情况 - 方式：实验操作；问卷调查；现场抽查 n考评工作程序 - 审评专家组确定考评的具体实施方案，问卷调查内容及 有 关事宜 - 制备考评血清（6-10份样），随机编号发给参评实验室 ， 同时发给考评问卷调查表 - 参评实验室检测考评血清 - 按规定期限上报检测报告和问卷调查表 - 检测结果的评判 - 结果反馈 HIV确认实验室质量考评办法 n考评结果的判定 n考评结果的处理 - 对考评合格实验室的资格认证和鼓励 - 对考核成绩较差的实验室进行以下整顿： 考评不及格、核查确有质量问题的，上报组织单位转报 卫 生部疾控司，由卫生部疾控司发撤销实验室资格的通知 考评较差的，暂停确认资格，限期3个月整改，整改后 仍 不合格者按上述规定处理 暂停确认资格的，一年内若不申请再次考评者，撤销其 资 格 撤销资格的须重新培训，再次申请，批准后获得确认 资 格 HIV诊断试剂临床评估方案 评估目的： n对国内销售的国产和进口HIV试剂的敏感 性、特异性、批间差异和适用性进行综合 质量评估，及时发现和解决试剂质量问题 n为卫生行政部门提供有关的决策依据 n作为艾滋病检测实验室选择试剂的依据 n未参加评估的试剂一般不推荐使用 HIV诊断试剂临床评估方案 评估组织及参加单位： 1、国家级评估 n国家艾滋病参比实验室负责组织 n可选择部分具备条件的确认（中心）实验室参 加评估 n每年组织1-2次，使其规范化、制度化 2、省级评估 n省艾滋病确认中心实验室为主要职能单位 n选择省内确认实验室或有条件的筛查中心实验 室参加评估 n每年组织1次，使其规范化、制度化 HIV诊断试剂临床评估方案 评估程序： 1、国家级评估 （1）样品的组成和采集 n一般不少于50份，最好在500份以上，目前常用 的是200份（已知和未知样品各半） n已知样品必须经确认，100份已知样品由国家参 比实验室和参评实验室各提供50份，一般阳 性 样品为10-40% n100份未知样品，由参评实验室在本地区有HIV 阳性者的高危人群中采集 n样品质量：考核样品必须保存良好，清亮、无 溶血、无污染、无过多脂质，避免反复冻融 HIV诊断试剂临床评估方案 （2）试剂的品种及抽检 n试剂种类应覆盖参评省临床使用的所有品种 n每个参评实验室评估的试剂至少为五个品种 n为避免出现重复和遗漏，由国家参比实验室协 调试剂品种 n受评估试剂应在筛查实验室中抽检，避免厂家 直接送检 n可用一种或一种以上高质量的第三代试剂作为 参比试剂 HIV诊断试剂临床评估方案 （3）质评样品的检测 n操作必须在最佳条件下进行，即同一仪器 、同一时间、同一检测人员 n已知样品，可直接用受评估试剂检测 n未知样品，可使用高质量的第三代试剂， 对其中筛查阳性和可疑样品进行确认 HIV诊断试剂临床评估方案 2、省级评估 各省确认中心实验室根据国家级评估方 案及本省具体情况制定省级评估方案 HIV诊断试剂临床评估方案 评估结果的分析及统计处理 敏感性：真阳性/（真阳性+假阴性）*100% 特异性：真阴性/（真阴性+假阳性）*100% 假阳性率：假阳性/（真阴性+假阳性）*100% 假阴性率：假阴性/（真阳性+假阴性）*100% 功效率：是指不产生假阳性和假阴性结果的效率 ， 是敏感性和特异性相结合的综合质量指 标。 （真阳性+真阴性）/（真阳性+假阳性+真阴性+假阴性）*100% HIV诊断试剂临床评估方案 变异系数（CV）：是反映各次OD值相对于均值的 离 散程度的指标，用于衡量试剂的重复性或精密 度 变异系数（CV）= S/ x * 100% ( x为均数、s为标准 差) 阳性预示值（PPV）：表示阳性检测结果为真阳性 的概率 阴性预示值（NPV）:表示阴性检测结果为真阴性 的 概率 PPV=真阳性/（真阳性+假阳性）*100% NPV=真阴性/（真阴性+假阴性）*100% HIV诊断试剂临床评估方案 评估结果和收集、分析、上报和反馈 n参与国家级评估的实验室应及时整理评估资 料，上报并同时附上原始记录的复印件，原始 记 录本室存档备案 n国家参比实验室对收集的资料进行汇总和分析 n国家参比实验室定期将全国HIV诊断试剂临床评 估结果上报并反馈各省、自治区、直辖市卫生 行 政部门、艾滋病检测实验室和试剂生产厂家 n每次国家级艾滋病诊断试剂临床评估的结果将 在艾滋病预防控制信息上公布 HIV诊断试剂临床评估方案 省级确认中心实验室组织的HIV诊断试剂 临床质量评估工作，评估结果上报本省卫 生行政部门和国家参比实验室，以便及时 沟通情况，发现和解决问题 在全国艾滋病检测工作 管理办法暂未颁布前，按 全国艾滋病检测工作规定的 规定执行 实验室设置种类和分级 n种类：分为确认与初筛（或称筛查）实