《微生物的营养》PPT课件.ppt

微生物的营养 你认识到了吗 l了解、认识了各种微生物的形态和繁殖特点，就 为进一步认识、研究并利用微生物打下了基础。 l要研究、利用微生物的有益特性以及防止、控制 微生物的有害影响，就必须首先能够培养它，才 能进一步研究其生理生化、生长代谢以及遗传变 异等特征，使之尽量在人类的掌控之内。 因此，学习微生物的营养和培养基知识，是实 现认识、利用和研究微生物的必要基础。 ？。 营养是生命活动的起点，是必需的物质基础。 微生物的营养过程为其生命活动提供了物质、能量 、代谢调节物和必要的生理环境的保障。 l营养(nutrition)： 生物体从外部环境中摄取生命活动必需的物质和 能量，以满足正常生长、繁殖和各种生理活动之 所需。 广义地说，营养是微生物获得和利用营养物的过 程，是微生物维持和延续其生命形式的一种基本 生理过程。 l营养物(nutrient)： 具有营养功能的物质和能量（指光能对微生物 来说） 第一节 微生物的营养五要素 1 微生物菌体的化学组成元素水平 主要元素：碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙等 微量元素：锌、锰、氯、钼、硒、钴、铜等 占细胞干重的97% 不同的微生物中元素含量有较大的差异 P79 2 微生物的营养要素 营养五要素：碳源、氮源、生长因子、无机盐和水 按照营养物质在菌体中的生理作用的不同，可以将 它们分成六大类。 无论从元素水平还是营养要素水平，微生物的营养要求 与摄食型的动物（含人类）和光合自养型的植物都十分 接近。 生物之间存在“营养上的统一性” 2.1 碳源 在微生物生长繁殖过程中，能为其提供碳素营养来 源的物质称碳源。即，是用来构建菌体物质中或代 谢产物中的碳素骨架的营养物质。 碳源谱 有机碳 C.H.O 无机碳 C.O,C.O.X 异养微生物 自养微生物 微生物利用的碳源物质主要有糖类、有机酸、醇类、 脂类、烃类、和蛋白质、氨基酸、核酸以及CO2、 碳酸盐等等。碳源利用还具有选择性。 从微生物的整体来看，可利用的碳源物质的范围称 碳源谱。 可以无机碳源提供主要碳素营养的自养微生物 （较少） 自然界中，利用有机碳源的微生物种类占绝大多数。 其中必须以有机碳源提供碳素营养的异养微生物 （绝大多数）； 从整体上看，微生物是自然界中碳源谱最广的生命 形式。 从某种角度来说，世界上存在的所有有机物，几乎 没有微生物不能利用的！ 微生物的生物多样性 l对大多数异养菌来说，其最适碳源是“C.H.O”型 碳源，利用碳源能力有差别，其中： 糖类最广泛、最经济 酸醇脂类次要 糖类中： 单糖双糖、多糖 己糖戊糖 葡萄糖、果糖半乳糖、甘露糖等 淀粉纤维素、几丁质等 一般不把含蛋白质、氨基酸的牛肉膏、蛋白胨等原料降格做 碳源使用。 目前在微生物发酵工业中所利用的碳源物质主要有 单糖、蔗糖、淀粉、糖蜜、麸皮、米糠. 注意： l“碳源谱广泛”是针对整个微生物界来说的，对 某一具体微生物来说，差异很大。 l对一切异养菌来说，其碳源可同时兼作能源， 因此碳源是它们的双功能营养物。 l对天然来源的碳源营养物（如糖蜜、淀粉质原 料）来说，除主要提供碳源营养外，其中还含 有氨基酸、无机盐等多种营养成分。 在微生物生长繁殖过程中，能为其提供氮素营养来源 的物质称氮源。即，是用来满足菌体物质中或代谢产 物中的氮素需要的营养物质。 2.2 氮源 氮源谱 有机氮 N.C.H.O 无机氮 N.H,N.O NH3 铵盐（NH4+） 硝酸盐 N2 蛋白质 核酸 氨基酸 尿素 一般而言，能利用有机氮的也可以利用无机氮 但是，能利用无机氮的不一定能利用有机氮。 l对大多数异养菌来说，其最适氮源是“N.C.H.O”型或 “N.C.H.O.X”型氮源(有机氮源)， “N.H”型氮源(无机氮源，如NH4+)次之。 l在论及微生物培养基成分时，最常用的有机氮源是 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏及饼粕粉（黄豆饼、花生麸） 蚕蛹粉、鱼粉等 l微生物对氮源的利用具有选择性 l微生物利用铵盐和硝酸盐的能力较强! 2.3 生长因子 微生物生长所必需的、但其自身不能合成或合成量不 足以满足机体生长需要的、需要量很小的有机化合物. 微 生 物 生长因子 需要量（ /ml） III型肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）胆碱 6 ug 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）硫胺素 0.5ng 白喉棒杆菌（Cornebacterium diphtherriae）B-丙氨酸 1.5ug 破伤风梭状芽孢杆菌（Clostridium tetani）尿嘧啶 0-4ug 肠膜状串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）吡哆醛 0.025ug l广义的生长因子 维生素、生物碱、卟 啉、甾醇、短链的分支或直链脂 肪酸、氨基酸等 l狭义的生长因子 仅指维生素 生长因子自养型微生物：多数真菌、放线菌和不少细菌 生长因子异养型微生物：乳酸菌、营养缺陷型突变株及 致病菌等 生长因子过量合成的微生物：可用其生产有关的生长因 子（如维生素），如阿舒假囊酵母生产B2，谢氏丙杆 菌、有些链霉菌生产B12等。 l配制培养基时，常使用生长因子丰富的天然物 质制备物作为补充生长因子的培养基成分。 如：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、肝浸液等。 2.4 无机盐 参与微生物中氨基酸和酶的组成； 调节微生物的原生质胶体状态，维持细胞 的渗透与平衡 酶的激活剂 除C、H、O外的元素，有时又称无机盐，其基本作用： 配制培养基时，大量元素一般首选K2HPO4、MgSO4 等，可同时提供4种大量元素。 常用天然水、自来水来配制培养基以提供各种微量元素. 微量元素(参与酶的组成或使酶活化) 指那些在微生物生长过程中起重要作用，而机体对这些元素的 需要量极其微小的元素，需要量通常在10-6-10-8mol/L，如： 锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。 根据微生物对矿质元素需要量的大小，可分为： 大量元素：Na、K、Mg、Ca、S、P等。 2.5 水 生理功能主要有： 起到溶剂与运输介质的作用； 参与细胞内一系列化学反应； 维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构象； 通过水合作用与脱水作用控制由多亚基组成的结构. 高比热、高汽化热等，以保证微生物的生命活动； 微生物细胞含水量很高，细菌、酵母和霉菌菌体分别 是80%、75%和85%，而霉菌孢子含水39%，细菌芽 孢含水很低，约为30%左右。 水活度值 l在一定的温度与压力下，溶液的蒸气压力与同 样条件下纯水蒸汽压力之比。 l0.6-0.99 l不同菌的条件不一。 第二节 微生物的营养类型 异养型生物 自养型生物 生长所需要的营养物质 生长过程中能量的来源 光能营养型 化能营养型 根据微生物生长所需要的主要营养要素即碳源 和能源的不同，可以将微生物划分为不同的营 养类型： 根据碳源、能源及电子供体性质的不同， 可将微生物分为： 光能无机自养型(photolithoautotrophy) 光能有机异养型(photoorganoheterotrophy) 化能无机自养型(chemolithoautotrophy) 化能有机异养型(chemoorganoheterotrophy) 1光能无机自养型（光能自养型） 能以CO2为唯一或主要碳源； 进行光合作用获取生长所需要的能量； 以无机物如H2、H2S、S等作为供氢体或电子供体， 使CO2还原为构成细胞物质的有机物； 例如，藻类及蓝细菌等和植物一样，以水为电子供体（供氢体）， 进行产氧型的光合作用，合成细胞物质。而红硫细菌，以H2S为 电子供体，产生细胞物质，并伴随硫元素的产生。 CO2+ 2H2S 光能 光合色素 CH2O + 2S+ H2O 2光能有机异养型（光能异养型） 不能以CO2为主要或唯一的碳源； 以有机物作为供氢体，利用光能将CO2还原为细胞物质； 在生长时大多数需要外源的生长因子； 例如，红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体，将CO2 还原成细胞物质，同时积累丙酮。 CHOH + CO2 H3C H3C 2 光能 光合色素 2 CH3C0CH3 + CH2O + H2O 3化能无机自养型（化能自养型） 生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能； 以CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长时，利用 H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-等作为电子供体使CO2还原 成细胞物质。 化能无机自养型只存在于微生物中，可在完全无机及无 光的环境中生长。它们广泛分布于土壤及水环境中,参 与地球物质循环； 4化能有机异养型（化能异养型） 生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能； 生长所需要的碳源主要是一些有机化合物，如淀粉、 糖类、纤维素、有机酸等。 有机物通常既是碳源也是能源； 大多数细菌、真菌、原生动物都是化能有机异养型 微生物； 所有致病微生物均为化能有机异养型微生物； 不同营养类型之间的界限并非是绝对的 异养型微生物并非绝对不能利用CO2； 自养型微生物也并非不能利用有机物进行生长； 有些微生物在不同生长条件下生长时,其营养类型也会发生改变: 例如紫色非硫细菌(purple nonsulphur bacteria)： 没有有机物时，同化CO2， 为自养型微生物； 有机物存在时，利用有机物进行生长，为异养型微生物； 光照和厌氧条件下，利用光能生长，为光能营养型微生物； 黑暗与有氧条件下，依靠有机物氧化产生的化学能生长，为化能 营养型微生物 微生物营养类型的可变性无疑有利于提高其对环境变化的适应能力 培养基 培养基培养基: 应科研或生产的需要，由人工配制的、适合 于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质 （混合养料）。 培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础 任何培养基都应该具备微生物所需要六大营养要素（碳 源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水）且比例适当. 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理: 常用高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2, 121.3, 15-20min； 0.56kg/cm2, 112.6, 15-30min; 绝大多数微生物都可以在人工培养基上生长，除少 数严格寄生或共生的微生物外。 另外，有一种观点，认为自然界中还存在着一类不 可培养的微生物。目前这类微生物作为一种资源已 受到广泛关注。 微生物培养基的用途： 促进微生物生长繁殖；积累代谢产物； 分离微生物菌种；鉴定微生物种类； 微生物细胞计数；菌种保藏； 制备微生物制品 1 培养基的配制原则 培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确） 营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） 物理化学条件适宜（条件适宜） 根据培养目的来选择不同来源的原料（经济节约） 1.1 培养基组分应适合微生物营养特点（目的明确） 即根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。 不同营养类型的微生物，其对营养物的需求差异很大。如 自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组 成。 异养型微生物的培养基至少需要含有一种有机物质，但有机物的 种类需适应所培养菌的特点。 按微生物的主要类群来说，它们所需要的培养基成分也不同: 细菌：牛肉膏蛋白胨培养基、LB (Luria-Bertani)培养基 放线菌：高氏一号培养基 真菌：查氏合成培养基、PDA (Potato-Dextrose-Agar)培养基 酵母菌： 麦芽汁培养基 当对“试验菌”营养需求特点不清楚的时候，可以采用生长谱法进 行测定。 1.2 营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） 浓度过高微生物的生长受到抑制； 浓度过小不能满足微生物生长的需要； 碳氮比（C/N）直接影响微生物生长与繁殖及代谢产物的形 成与积累，故常作为考察培养基组成时的一个重要指标 碳源中所含碳原子的mol数 氮源中所含氮原子的mol数 C/N比值= 例：谷氨酸生产中 C/N 4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； C/N3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。 注：C/N比有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之 比） 1.3 物理化学条件适宜（条件适宜） 1.3.1 pH: 各类微生物的最适生长pH值各不相同： 细 菌：7.08.0 放线菌：7.58.5 酵母菌：3.86.0 霉 菌：4.05.8 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用 和代谢产物的形成与积累，培养基的初始pH值会发生改 变，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两 种方式： 内源调节： 在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐； 调节培养基合适的碳氮比。 外源调节： 按实际需要不断向发酵液中流加酸液或碱液 磷酸缓冲液：pH值从6.07.6之间 K2HPO4+HCl KH2PO4+KCl KH2PO4+KOH K2HPO4+H2O 加入CaCO3： CO32 HCO3 H2CO3 CO2+H2O +H+ H +H+ H 培养基中所含氨基酸、肽、蛋白质等物质也可起到 一定的缓冲作用。 1.3.2 渗透压和水活度（aw） 渗透压：由溶液中所含分子或离子的质点数决定 的，由2种不同浓度的溶液产生的。溶液的质点 数越多，产生的渗透压就越大。 等渗溶液适宜微生物生长 高渗溶液细胞发生质壁分离 低渗溶液细胞吸水膨胀，直至破裂 大多数微生物适合在等渗的环境下生长。 而有的细菌如Staphylococcus aureus则能在3mol/L NaCl的高渗溶液中生长。 能在高盐环境（2.86.2g/L NaCl）生长的微生物常 被称为嗜盐微生物（Halophiles）。 水活度 在人为或天然环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水 的含量. 一般用：在一定的温度和压力条件下,溶液的蒸汽压力与同样条 件下纯水蒸汽压力之比表示，即： aw=Pw/Pow 式中Pw代表溶液蒸汽压力, P0w代表纯水蒸汽压力。 纯水aw为1.00。 溶液中溶质越多, aw越小。 微生物一般在aw为0.600.99的条件下生长 aw过低时,微生物生长的迟缓期延长,比生长速率和总生长量减少 微生物不同，其生长的最适aw不同。 1.3.3 氧化还原电势(redox potential) 是度量系统中还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的指标， 以Eh表示，其单位是V（伏）或mV（毫伏） 各种微生物对培养基的氧化还原电势的要求不同： 好氧微生物：+0.3+0.4V, (在0.1V以上的环境中均能生长) 厌氧微生物：只能在+0.1V以下生长 兼性厌氧微生物：+0.1V以上呼吸、+0.1V以下发酵 培养基是多氧化还原偶的复杂电化学系统，测出的Eh值仅代表 其综合结果。 对微生物影响最大的是：分子氧和分子氢的浓度 培养基中常用的还原剂：巯基乙酸、抗坏血酸、硫化氢、半胱 氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等。 1.4 根据培养基的应用目的选择原料及其来源（经济节约） 该培养基的应用目的，即： 是培养菌体还是积累代谢产物？ 是实验室种子培养还是大规模发酵？ 代谢产物是初级代谢产物还是次级代谢产物？ 用于培养菌体、种子的培养基营养应丰富，氮源含量宜高（ 碳氮比低）； 用于大量生产代谢产物的培养基其氮源一般应比种子培养基 稍低，（但若发酵产物是含氮化合物时，有时还应提高培养基 的氮源含量）；若代谢产物是次级代谢产物时要考虑是否加入 特殊元素或特定的代谢产物； 当所设计的是大规模发酵用的培养基时，应重视培养基中各 成份的来源和价格，应选择来源广泛、价格低廉 的原料，提倡 以粗代精，以废代好。 经济节约原则 以粗代精 以野代家 以废代好 以国代进以简代繁 以氮代朊 以烃代粮 以纤代糖 2.1 生态模拟 调查所培养菌的生态条件，查看其“嗜好”， 对“症”下料初级天然培养基. 2.2 查阅文献 查阅、分析文献，调查前人的工作资料， 借鉴人家的经验，以便从中得到启发设计有自己 特色的培养基配方. 2.3 精心设计 借助优选法或正交试验设计法等方法. 2 设计培养基的方法 2.4 试验比较 *不同培养基配方的选择比较 *单种成分来源和数量的比较 *几种成分浓度比例调配的比较 *小型试验放大到大型生产条件的比较 *pH和温度试验 附1： 培养基配制时应注意的几个问题： 1、沉淀 2、琼脂胶体强度的破坏 3、褐色物质的形成 4、pH发生变化 高压蒸气灭菌 一般培养基: 1.05 Kg/cm2, 121.3, 15-20 min 含糖培养基: 0.56 Kg/cm2, 112.6 , 20-30 min 过滤灭菌 分别灭菌 间歇灭菌的应用 附2：培养基的灭菌 附图：过滤灭菌 附3：器皿的灭菌及无菌室的消毒 器皿的灭菌： 干热空气： 160， 2 小时 无菌室的消毒： 紫外线 化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛） 3 培养基的种类及其应用 l按所培养微生物的类群分类 l按培养目的来分类 l按培养基的组成成分分类 l按培养基的物理状态分类 l按培养基的功能（或用途）分类 培养基的种类 3.1 根据微生物的类群来分 细菌培养基 放线菌培养基 酵母菌培养基 霉菌 培养基等。 3.2 根据培养目的来分 种子培养基(seed culture medium)是为保证 发酵生产获得大量优质种子而设计的培养基。 特点是营养较丰富，氮源比例较高。有时为使菌种能迅 速适应后面的发酵条件，还有意识地加入发酵培养基的 基质。 发酵培养基(fermentation medium)用于生产 预定发酵产物，一般以碳为主要元素，碳源含量往往高 于种子培养基。大规模生产时，原料应价廉易得，还应 有利于下游的分离提取。 -1 细菌培养基营养肉汤（nutrient broth)： 牛肉膏 3g； 水 1000ml； 蛋白胨 5g ； NaCl 5g ; pH 7.27.4 放线菌培养基高氏1号（淀粉硝酸盐培养基）： 可溶性淀粉 20g； KNO3 1g; K2HPO4 1g MgSO4 0.5g NaCl 1g; FeSO47H2O 0.5g 水 1000ml; pH 7.27.4 霉菌培养基查氏（zapek)培养基（蔗糖硝酸盐培养基）： 蔗糖 30g; NaNO3 3g; MgSO4.H2O 0.5g; KCl 0.5g; K2HPO4 1g; FeSO4 0.5g 水 1000ml; pH 6.7 酵母菌麦芽汁培养基 干麦芽粉加4倍水，在50-60糖化3-4小时，用碘液试验检查至 糖化完全为止，调整糖液浓度为10。巴林，煮沸后，纱布过滤， 调pH为6.0。 如：味精生产 一级种子（北京棒状杆菌AS1.299，用摇床培养） 培养基配方： 葡萄糖 3% 玉米浆 2.53.5% 尿素 0.30.5% K2HPO4 0.10.2% MgSO4 0.05% 二级种子（1200升发酵罐）培养基配方： 以3-5%淀粉水解糖代替3%葡萄糖，其他成分 同一级种子。 发酵培养基（50-100t发酵罐）： 基本同二级种子液。 3.3 根据对培养基成分的了解程度来分 3.3.1天然培养基(complex medium)：也称作 chemically undefined medium。 利用化学成分还不完全清楚或不恒定的天然物 质（如肉汤、蛋白胨、麦芽汁、酵母汁、豆芽 汁、玉米粉、牛奶、血清等）制成的培养基。 天然培养基比较经济，除实验室经常使用外， 更适宜于在生产上用来大规模地培养微生物和 生产微生物产品。 3.3.2 合成（组合）培养基(synthetic medium)：也 称作chemically defined medium. 由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基。 该类培养基的组成成分清楚，重复性强，但微生物 生长较慢，且价格较贵。 故一般适于在实验室范围内及有关微生物营养需要 、代谢、分类鉴定、生物测定以及菌种选育、遗 传分析等方面的研究工作。 如高氏培养基、察氏培养基等都是合成培养基. 3.3.3 半合成（组合）培养基(semi-defined medium) ： 在合成培养基的基础上添加些天然成份，以更有效 地满足微生物对营养物的需要. 如马铃薯-蔗糖培养基 3.4 根据培养基的物理状态来分 3.4.1 液体培养基(liquid medium)： 液体培养基不含任何凝固剂，菌体与培养基充分 接触，操作方便。 常用于大规模的工业化生产以及在实验室进行微 生物生理代谢等基本理论的研究工作。 可根据培养后的“ “浊度浊度” ”判断微生物的生长情况. 3.4.2 固体培养基(solid medium)： 天然固体营养基质制成的培养基（如培养霉菌的培养基）， 或在液体培养基中加入一定量凝固剂（琼脂1.52)而 呈固体状态的培养基。 为微生物的生长提供营养表面。 常用于微生物的分离、纯化、计数、生理测定、育种和菌种 保藏等方面的研究。 可依使用目的不同而制成斜面、平板等形式. 3.4.3半固体培养基(semi-solid medium)： 在液体培养基中加入0.2-0.7的琼脂构成的培养 基。 常用来观察细菌运动的特征，以进行菌种鉴定. 以及测定噬菌体效价等等 . 1.不被微生物分解、利用、液化； 2.不因消毒灭菌而被破坏； 3.在微生物的生长温度内保持固态； 4.凝固点的温度对微生物无害； 5.透明度好，粘着力强 理想凝固剂应 具备的条件 半固体培养物的生长情况： 液体培养物生长情况连续液体培养装置示意图 3.5 根据培养基用途来分 3.5.1 基础培养基(minimum medium): 是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养成分的培 养基； 基础培养基也可作为一些特殊培养基的基础成分（如 制备糖发酵培养基时）. 3.5.2 加富（又称富集）培养基(enriched medium)： 在基本培养基中加入某些特殊的营养物质，如血、血 清、动植物组织液或其他营养物质（或生长因子） 的一类营养丰富的培养基。 用来富集（使数量上占优势）和分离某种特定 微生物。 或用以培养营养要求苛刻的微生物 . 富集-分离微生物： 根据待分离微生物的特点设计培养基,用于从环境中富 集和分离某种微生物 目的微生物在这种培养基中较其他微生物生长速度快, 并逐渐富集而占优势,从而容易达到分离到该种微生物 的目的.) 3.5.3 选择性培养基(selective medium)： 是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要（投其所 好），或根据对某种化合物的敏感性情况（取其所抗 ）而设计出来的一类培养基。 具体说，是加入相应的特殊营养物质或有抑菌性的化学 物质, 以抑制不需要的微生物的生长,而促进所需微生 物的生长。 用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中 分离出来. （续上表） 例：伊红美兰（Eosin-Methylene Blue）乳糖培 养基（简称EMB培养基） 用于食品卫生的微生物学检验，检验食品样品的 “大肠菌群”的指标。 3.5.4 鉴别性培养基(differential medium)： 用于鉴别不同类型微生物的培养基。 在普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反 应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显 的特征性变化，以区别不同的微生物以便于 根据目的选择性挑取或计数等。 大肠菌群的定义： 指存在与大肠内的，分解乳糖产酸产气的G-短杆菌,包 括大肠杆菌和产气肠杆菌和一些中间类型的细菌。 l 伊红和美蓝二种苯胺染料可抑制G+细菌和一些 难培养的G-细菌的生长。在低酸度时, 这二种染 料结合形成沉淀，起着产酸指示剂的作用. 试样中的多种肠道菌会在EMB培养基上产生相 互容易区分的特征菌落, 因而易于辨认。 例如：大肠杆菌强烈分解乳糖而产生大量的混合 酸, 菌体呈酸性,菌落被染成深紫色，从菌落表 面的反射光中还可看到绿色金属闪光。 选择性培养的结果 鉴别性培养的结果 营养物质进入细胞的方式 营养物质能否进入细胞取决于三个方面的因素： 营养物质本身的性质（相对分子量、质量、溶解性 、电负性等; 微生物所处的环境（温度、pH等）； 微生物细胞的透过屏障（原生质膜、细胞壁、荚 膜等）。