番茄叶霉病拮抗细菌的分离和筛选.pptx

番茄叶霉病拮抗细 菌的分离和筛选 1. 1. 前前 言言 生物农药存在的问题及解决方法 关于番茄叶霉病 番茄叶霉病病原菌的分类及形态特征 番茄叶霉病病原菌的生物学特性 番茄叶霉病的识别症状 番茄叶霉病的发生和流行规律 番茄叶霉病防治的研究进展 2 2 材料与方法材料与方法 供试试菌株 供试试培养 基 主要仪仪 器 （1）试验材料 番 茄 叶 霉 病 原 菌 细 菌 抗菌谱测 定供试指 示菌: A 人参锈腐菌（Cylindrocarpon destructans），玉米链格孢 菌（Alternaria longissima），葡萄白腐菌（Coniella diplodiella），大豆链格孢黑斑菌（Alternaria alternata） ，向日葵黑斑菌（Alternarua helianthi），由本试验 室分 离保存； 禾谷镰刀病原菌(Fusarium graminearum)，玉米弯孢霉叶 斑病原菌(Curvularia lunata)，玉米茎腐病原菌（Fusarium moniliforme），玉米大斑病原菌(Exserohilum Helminthosorium turcicum)由吉林省农科院植保所提供； 大豆灰斑菌（Cercospora sojina），人参立枯菌（ Rhizoctonia solani），人参菌核菌（Sclerotinia schinseng ），人参灰霉菌（Botrytis cinerea），辣椒炭疽菌 (Colletotrichum capsici)，由本学院植病教研室提供。 供试菌株供试菌株 PDA培养基 马铃 薯200g 葡萄糖20g 琼脂15g， 水1000ml pH7.0。 NA培养基 牛肉浸膏3.0g 蛋白胨10.0g NaCI5.0g 琼脂20g 水1000ml pH7.0 供试培养基供试培养基 生物显微 镜 井深电子 显微镜 真空干燥 箱 高压灭 菌 锅 超净工作 台 光照培养 箱 恒温振荡 培养箱 高速冷冻 离心机 等 主要仪器主要仪器 细细菌菌 株单孢单孢 分离和 纯纯化 菌株的 筛选 拮抗细 菌S46发 酵液抗菌 谱测 定 （2）试验方法 平 板 分 离 法 倒 平 板 制 备 土 壤 稀 释 溶 液 涂 布 培 养 纯 化 保 存 细菌菌株单孢分离和纯化细菌菌株单孢分离和纯化 拮抗菌株 的初筛 （1）菌 碟的制备 （2）平 板对峙法 （3）筛 菌 拮抗菌复 筛 发酵液制 备 拮抗试验 菌株的筛选菌株的筛选 拮抗细菌拮抗细菌S46S46发酵液抗菌谱测发酵液抗菌谱测 定定 本试验共用14株植物病原真菌对S46进行抗菌 谱测定，将一些无菌水倒入纯化的植物病原真 菌平板中，并用接种环将孢子和菌丝刮落制成 菌悬液，取一种真菌的菌悬液3ml加入100 mL 已融化且冷却到约45的PDA培养基中，迅速 混匀并平均倒入3个无菌培养皿内，待培养基 完全凝固后，用直径10 mm的打孔器在每个培 养皿内打孔，注入滤过菌的发酵上清液200L ，置于28的恒温箱中进行培养，待平板有菌 丝长出后，测量抑菌圈直径。14种病原菌都做 相同的处理。 （3）结果分析 分离纯化 58株细菌 冰箱中4保存 备用 细菌菌株的分离和筛选细菌菌株的分离和筛选 初筛结果 通过活体菌株对病原菌抑菌活性测定，结果表明：编号为S02，S06，S35， S29，S46，S47的这6个菌株对供试病原菌均有不同程度的抑制作用。 复筛结果 通过制备各菌株的发酵液对初筛得到的具有拮抗作用的菌株来进行复筛, 结果表明编号为S35，S46，S47的这三种菌株的发酵液抑菌效果较好 。抑菌圈 分别可达22 mm、26 mm、33mm左右。 拮抗菌株的分离和筛选拮抗菌株的分离和筛选 针对上述试验结果得出优势菌株s 46对14种 常见植物真菌进行抗菌谱测定，结果如表1- 2所示，有拮抗作用，其中对番茄叶霉菌拮 抗作用最大，抑菌圈可达到27mm左右，对 向日葵黑斑无拮抗作用。 菌株菌株S46S46发酵液抗菌谱的测定发酵液抗菌谱的测定 （4）小结 采用稀释分离法从土壤中分离得到细菌58株， 通过试验测定活菌体的拮抗性，并初筛出了6 种不同的有拮抗作用的菌株。之后对这6种具 有拮抗作用的菌株的发酵液的抗性进行了进一 步的测定，其中编号为S47菌株拮抗作用最 好。但是，S47疑似是一种致病原菌，所以， 选择抑菌圈达到26mm左右的S46菌株作为本试 验主要研究的生防菌。 并对S46菌株做了抗菌谱测定，该菌株抗菌谱 较广，其中对番茄叶霉病原菌拮抗作用最大， 抑菌圈可达到27mm。 3 3 结论与讨论结论与讨论 本试验以番茄叶霉病病原菌为靶菌对土壤中具有拮 抗作用的细菌进行了分离和筛选，得到了编号为 S02，S06，S35，S29，S46，S47的这6个细菌株，均 对番茄叶霉病有抗性，其中S35，S46，S47抗性较强 抑菌圈分别可达22 mm、26 mm、33mm左右。但是 ，S47疑似是一种致病原菌，所以本试验采用S46菌 株作为供试菌株材料，并对其发酵条件进行了优化 使其高效的产生活性物质；同时也对筛选得到的其 它几种菌株做了长期保存工作（甘油悬液于-80冰 箱），可以作为其它试验题目的菌株材料。拮抗菌 株的分离、纯化和筛选是本试验的基础部分，工作 量较大，耗时长，为后面的试验做了准备工作，所 以也是本试验至关重要的部分。 致 谢 本论文是在我的导师马贵龙老师的悉心指导下完成的。使我从 中学到了很多知识，在本论文的试验及写作过程中，他严谨并 耐心的指导我，不仅使我的理论素养大幅提高，而且使我的专 业知识更加巩固，在此表示感谢。 感谢在我论文完成过程中给我极大关心、支持和帮助的所有老 师、学长和同学们，感谢你们的大力帮助让我可以顺利完成毕 业论文。同时也感谢学院为我提供良好的做毕业设计的环境。 现在我即将毕业，但我深深的知道这也将是我人生旅途新的开 始。四年的求学时光给我留下了