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文档简介

细胞生物学与遗传学教研室细胞生物学与遗传学教研室 遵义医学院遵义医学院 2009年9月研制 第二次实验 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示 实验目的 1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的 分布情况； 2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的 原理和方法。 实验原理 1. 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱 性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理 2. 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响 的两种染色剂，由于其自身分子结构的特 点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞 争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA 的分布部位。 实验用品 95%乙醇 三氯醋酸 甲基绿-派洛宁 0.1%酸性固绿 0.1%碱性固绿 操作流程 暴露 胸腔 双毁髓法处死 取心脏血 晾干 制 血涂片 固定 10min 9025min 洗涤1min 反复冲洗 三氯醋酸 95%乙醇 0.1%酸性固绿 5min 0.1%碱性固绿 30min 晾干 镜检 冲洗5秒 晾 干 洗 涤 甲基绿派洛宁 5min 染 色 冲洗 5 秒 结果观察 酸性蛋白碱性蛋白 DNA和RNA的显示 l 使用三氯醋酸处理的目的 l 两人一组，每组制三张血涂片 注意事项 1. 请回答细胞化学法在本次实验中的应用。 2. 通过本次实验学到哪些基本操作技能？ 3. 请描述本次实验的显微观察结果。 作业 小结 l 评价本次实验的得失 l 本次实验需要巩固的概念 细胞化学法 l 本次实验需要掌握的实验技能 1. 双毁髓处死蟾蜍的方法 2. 血涂片制作方法 3. 染色的
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