热化疗对大鼠卵巢癌细胞增殖的影响.pdf

分类号：密级： u d c ：一一论文编号： 硕士学位论 m a s t e rt h e s i s 文 腹腔热化疗对大鼠卵巢癌细胞增殖的影响 尹艳英 大连医科大学 独创性声明 本人声明所呈交蛉学位论文是本人在导师指导下进行静研究7 - 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标泣和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过螅磺究成果，也不包含 为获褥大连鏊科大学或英德教育杭构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何赁献均已在论文中律了明 确的说赡并表示谢意。 学位论文律者签名：翌塑篷 签字留期：型年月竺日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名：星型垂 指导教师签名： 0 0 5 ) ；( 2 ) e c l i a 对血清c a l 2 5 测定结果发 现：应用顺铂治疗的大鼠血清c a l 2 5 表达水平较不加药组显著降低( 尸 ，本实验荠未发现药 物和加热方式对血清c a l 2 5 表达水平的影响鼹翁交互作用( p o 0 5 ) 。 ( 3 ) 免疫组化法对腹腔转移瘸组织中p c n a 和v e g f 的测定缩果显示： 应用顺铂治疗的大鼠腹腔转移瘤组织中两种鬣自的表达水平均较不加 药组显著降低( p 0 。0 5 ) 。( 2 ) 硅er e s u l t so fe c l i aw e r ea sf o l l o w s 。 慧eg r o u p so fu s i n g c i s p l a t i nh a dal o w e rl e v e lo fc a l 2 5i nb l o o ds e r u m ( p 0 0 5 ) 移下蠡er e s u l t so fi n n u n o h i s t o c h e m i s t r yw e r ea sf o l l o w s t h ee x p r e s s i o no f p c n aa n dv e g fi nt h eg r o u p so fu s i n gc i s p l a t i nw a sl o w e r ( p o 0 5 ) 。绘制曲线图， 见阁2 和图3 所示。 t i m e ( d ) 图2 各组体重变化曲线图 t i m e ( d ) 图3 各组腹刚变化曲线图 一a 镬 一a 征 a 任 一a 2 e a 2 e a 篾 3 动褥处死爱潮捻冤：黢腔内鸯大量盘性菝永，大黧膜增簿挛缩 璺饼状，黢膜、弱系膜、肠管等处均冤散在的粟粒大小转移结节，盛 径在1 - 3 r a m ，h - f , 币i h , 无明显结节病灶。对照组与各治疗组比较，腹水 量多，且转移结节多见。挛缩的大网膜组织和腹腔内结节病灶经病理 证实含有大量的肿瘸细胞，h e 染色照片如图4 所示。 图4 h e 染德c x 4 0 0 ) 二、盘清c a l 2 5 电化学发光免疫分析结果 赢清c a l 2 5 测定应用电化学发光免疫分析法( e c l i a ) ，利用多 因索方差分析，发现药物及加热方式对血清c a l 2 5 表达水平的影响均 具谢统计学意义( p o 0 5 ) 。 应用顺铂治疗( a 2 ) 的大鼠血清c a l 2 5 表达水平较不加药组( a 1 ) 显 著降低( p o 。0 5 。该实验结果也 提示，斑瀵c a l 2 5 测定霹作为评徐卵巢癌疗效的重要指标之一。 三、腹腔热他疗对卵巢癌缨胞中p c n a 表达的影响 肿癯细胞最根本的生物学特征是分化受阻零鞋无限铡增殖，冀增殖 涟性与胎瘤的生物学行为、特别是与肿癣的浸润、转移帮预君等密甥 棚关。增殖细胞核抗原( p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n ，p c n a ) 是分 子量为3 6 k d 的d n a 多聚酶s 懿一种辅助蛋鲁，奁d n a 复制过程中 起重要的调节作用【26 2 7 j ，其表达隧细臌鼹期变化，在g ，旱勰开始上升， s 期达豢峰，g ：、m 期持续下降，g o 勰维持在极低东平。众多研究都 客观一致地显示 2 8 2 9 】：p c n a 是目前公认的反映核增疆承平的标志牲 基因，p c n a 蛋自检测霹壹接反欧细胞合成代谢及增麓状态。它对细 胞增生活性、肿瘤生长方式、没淄程度、复发情况等生物学方面具有 一定的指导意义，已经用于判断如脑胶璜瘤、群癌、卵巢浆液性癌、 泌尿系蒡孛瘤等多年孛恶性瓣瘩细胞增殖程度帮恶性程度的一颈重要指 椽。 本安验利爝p c n a 免疫组化染色方法，比较不同治疗方法下腹腔 热化疗对大鼠辨鬃癌纲胞增殖的影响。萁结果显示：应用顺铂治疗的 大鬣腹腔转移瘤缝织中p c n a 表达水平较不加药组遵著降低( p 4 1 ) 既能 增强筵对翳瘩缨脆的恭伤力，同时又不增翻对正常缀织豹毒副作焉。 目前众多国内外学者在实旌卵巢癌i p h c 时多是选用单独d d p 1 6 3 2 6 j 或d d p 与丝裂霉素( m m c ) 【3 m3 1 】联合灌注，均获得了理想中的疗效。 刘萍等【18 j 采用顺铂与卡铂联合的双铂方案，提高了铂类药物的总剂量 强度而毒性不重叠，从而提高疗效；尚有学者【3 2 j 报道d d p 与足叶乙甙 ( v p 1 6 ) 簿腹腔与静脉a u c ( 药物浓度越线下的面积) 比值大，丽 盈局部甏反应轻，楚液腔纯疗的蕾选药物。 2 紫杉醇( t a x e l ) 紫杉静通过干扰有丝分裂抑制细胞生长，是肺癌、乳腺癌、卵巢 瘵翻霉癌等麓瘗豹鬻簇药甥，i 莲年来还发现低裁量t a x e l 逐有嚼显懿抗 血管生成作用。d eb r e e 等【3 3 j 对8 例接受多两紫衫醇( d o c e t a x e l ) 持续 高温灌注腹腔化疗( c h p p c ) ( 7 5 m g m 2 , 4 1 - 4 3 ) 的卵巢癌患者进行 骏腔液和血浆药代攀分丰斤，发现腹腔液和痰浆药物峰浓度毙平均达 4 5 ( 1 7 9 5 ) ，雨馥腔和全身的暴露比率更甍达2 0 7 ( 1 0 5 。5 5 5 ) ，腹腔a u c 较静脉应用1 0 0 m g m 2 多西紫杉醇高1 3 2 7 倍，而药物的全身毒性则得 到了良好控制；采用该法治疗1 9 例早期复发或持续性卵巢癌患者，所 有意者黢水消失，平均隧访3 9 个月，c h p p c 后 年帮3 年累计生存 率达7 9 和6 3 【3 4 1 。 尚有学剖h 】证实在有效热度下，对药物产生耐受的细胞热休克蛋 自( h e a ts h o c kp r o t e i nh s p ) 的合残降低，因两阻止热对受发生，这耱 情况在丝裂霉素、博米霉素、顺铂等药物实验中都已得到证实。国外 有学者采用蒽类【2 9 ”】( m i t o x a n t r o n e ) 进行麟腔热灌注化疗，也取得了 琵好的效聚。 ( 三) 卵巢癌i p h c 灌注澄度及时阀等闻题 目前多数学者主张采用等渗液进行灌液，灌注液的容量需根据具 体的化疗时间因人而舜；灌注时间应达到6 0 9 0 m i n ，其取决于热杀伤 效应熬作耀时闻，有踺黧需琵合术中术后麴帻瑟瑟定。 加热时的温度是个关键俄问题，它既要保证肿瘸组织受热后， 瘤内p h 值降低，使癞细胞内环境呈酸性状态，从而提高癌细胞对热的 敏感性，影嚷瓣瘪细戆鳇增建及d n a 、r n a 合成；又要保证掷制麓 瘤细胞对热损伤的修复和耐热陵的产生。大量的基础和临床研究发现 3 6 1 ，当温度 4 5 ) 加温，再采用较低温度( 4 2 ) 加温，其 细胞毒作用较递增加温( 既逐渐升高的加温方法) ，或持续4 2 的加温 方法有跟显提高。 阉时，我们应注意到羧腔燕化疗对襄巢瘗露治疗价德滠粪l 上局隈 予：种植在黢腔脏器表面或疆膜表丽豹微小瘸灶；全身化疗失败， 耐药或复发的病人；控制恶性腹水生长；第二次探查阳性者。主 要禁总症是：腹腔严重粘连；全膜放疗史；病燮已超过腹腔范 围。主要并发症有感染、化学性腹膜炎、肠穿孔、脏器损伤及腹痛。 三前景与震鬟 腹腔热化疗( i n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i cc h e m o t h e r a p y ，i p h c ) 作为 卵巢癌综合治疗的种新模式，已经得到了大家的广泛关注，通过对 体外窳验、动物实验、临床实验等的不峨深入研究，篡理论和实践更 加憝予藏熟，它对予卵巢癌术惹黢腔蠢残存癌细胞霹造戏一定鲍损害， 虽然仍不足以将萁全部杀灭，但对予推迟脖瘩的复发、延长患者无瘸 生存期，改善生存质撼起到不可比拟的作用。目前对于腹腔热化疗的 作用机制，特别是热化疗对癌细胞多翁耐药性、细胞调亡、细胞周期 及其调节因子的影响，以及加温技术，药物选择与搭配等问题尚需进 一步磺究。 参警文献 1 r o n gxm a c k 砖e ta 1 a p o p t o s i si n d u c e db yh y p e r t h e r m i ai nd u m ao s t e o s a r c o ma c e l ll i n ei nv i t r o i n tjh y p e r t h e r m i a ，2 0 0 0 ，1 6 ( 1 ) ：1 9 - 2 7 2 t a l a s ut ，l y o n sj c ，p a r kh j ，e ta 1 a p o p t o s i sa n dp e r t u r b a t i o no fc e l lc y c l e p r o g r e s s i o ni n 敞a c i d i ce n v i r o n m e n ta f t e rh y p e r t h e r m i a 。c a n c e rr e s ，1 9 9 8 ， 5 8 ( 1 2 ) ：2 5 0 4 2 5 1 2 3 h i l d e b r a n d tb ，w u s tp ，a h l e r so ，e ta 1 t h ec e l l u l a ra n dm o l e c u l a rb a s i so f h y p e r t h e r m i a 。c r i tr e v o n c o lh e m a t o l ，2 0 0 2 ，4 3 ( 1 ) ：3 3 5 6 。 4 。v a nd e rz e e j ，h e a t i n gt h ep a t i e n t ：ap r o m i s i n ga p p r o a c h a n no n c o l ，2 0 0 2 ，1 3 ( 8 ) ： 1 1 7 3 1 1 8 4 ， 5 王刚，郑闻亭，等，擎纯加温与加灏联用顺铂对人卵巢癌细臌增殖及调亡的影 璃。实嗣瓣瘗杂恚，2 0 0 4 ，1 9 ( 5 ) ：4 0 5 4 1 0 6 g r a n tm f , t u r n e re m ，e ta 1 e f f e c t so fh y p e r t h e r m i aa n dt u m o rn e c r o s i sf a c t o ro n i n f l a m m a t o r yc y t o k i n es e c r e t i o na n dp r o c o a g u l a n ta c t i v i t yi n e n d o t h e l i a lc e l l s c y t o k i n e ，2 0 0 0 ，1 2 ( 4 ) ：3 3 9 3 4 7 7 h e r o l dm e n d ec ，s t e i n e rh h ，r i e d ed ，e ta 1 e x p r e s s i o na n df u n c t i o n a ls i g n i f i c a n c e o fv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r si nh u m a nt u m o rc e l l s l a bi n v e s t ， 19 9 9 ，7 9 ：l5 7 3 一l5 8 2 8 f r i e d ltt u r n e re ，e ta l 。a u g m e n t a t i o no fe n d o t h e l i a lc e l lm o n o l a y e rp e r m e a b i l i t y b yh y p e r t h e r m i ab u tn o tt u m o rn e c r o s i sf a c t o r ：e v i d e n c ef o rd i s r u p t i o no fv a s c u l a r i n t e g r i t yv i a v e - c a d h e r i n - d o w n - r e g u l a t i o n i n tjo n c o l ，2 0 0 3 ，2 3 ( 3 ) ：6 1 1 - 6 1 6 9 。壤小谦，金建华，等壤戆受疫臻黪竣灏在羧黢热往疗治疗熬缝羧承孛熬貉庆 意义中阐肿瘤临床与康复，2 0 0 4 ，1 1 ，( 3 ) ：1 9 7 1 9 9 + l0 i t o a ，s h i n k a im ，h o n d ah ，e ta l + a u g m e n t a t i o no fm h cc l a s sia n t i g e n p r e s e n t a t i o nv i ah e a ts h o c kp r o t e i ne x p r e s s i o nb yh y p e r t h e r m i a c a n c e ri m m u n o l i m m u n o t h e r , 2 0 0 1 ，5 0 ( 1 0 ) ：5 1 5 - 5 2 2 1 1 s z n i g i e l s k is ，s o b c z y n s k ij ，e ta 1 e f f e c t so fl o c a lp r o s t a t i ch y p e r t h e r m i ao nh u m a n n ka n dtc e l lf u n c t i o n + i n th y p e r t h e r m ，19 9 1 ，7 ：8 6 9 t 2 。t a k a h a s h ii ，e m iyh a s u d as ，e ta 1 c l i n i c a ta p p l i c a t i o no f h y p e r t h e r m i ac o m b i n e d w i t ha n t i c a n c e rd r u g sf o rt h et r e a t m e n to fs o l i dt u m o r s s u r g e r y , 2 0 0 2 ，1 3 1 ( 1 ) ： 7 8 8 4 1 3 。t a n i g u c h im ，o c h i a lm ，s a k u r a lye ta l 。e x p e r i m e n t a ls t u d yo fi n t r a p e r i t o n e a i h y p e r t h e r m i cc h e m o t h e r a p y g a n t ok a g a k ur y o b o ，1 9 9 8 ，2 5 ( 7 ) ：1 0 8 3 i4 w e s t e r m a n na m ，g r o s e ne a ，k a t s c h i n s k id m ，e ta 1 ap i l o ts t u d yo fw h o l eb o d y h y p e r t h e r m i aa n dc a r b o p l a t i ni np l a t i n u mr e s i s t a n to v a r i a nc a n c e ne u rjc a n c e l 2 0 0 1 ，3 7 ( 9 ) ：1 l l l - 1 1 1 7 。 l5 s p r a t tj s ，a d c o c kr a ，m u s k o v i nm ，e ta 1 c l i n i c a ld e l i v e r ys y s t e r mf o r i n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i cc h e m o t h e r a p y c a n c e rr e s ，19 8 0 ( 4 0 ) ：2 5 6 2 6 0 i 6 。覆彦杰，藩务乐，镰热灌注纯疗对跨治爨鬃癌壤象筵转移的猛寐稀察中国 现代隰学杂志，2 0 0 4 ，1 4 ( 1 0 ) ：1 3 8 1 4 0 1 7 倪小谦，会建华，等腹腔热化疗治疗癌性腹水的临床观察中国癌症杂志， 2 0 0 4 ，1 4 ( 3 ) 5 6 1 5 6 2 。 1 8 裁萍，杨家梅，等腹腔灌注联念射频透热治疗2 8 铡晚期卵巢癌肿瘸学杂志， 2 0 0 3 ，9 ( 2 ) ：7 1 7 2 19 f _ - q 群，等f p m 方寨腹腔热灌注他疗治疗郛爨瘘腹腔积液l8 倒的疗效观察。实 翔癣痰杂志，2 0 0 2 ，1 7 ( 4 ) ：4 3 5 4 3 6 2 0 孔忆寒，李占营，镣腹腔热灌注化疗并微波体外加热治疗晚期恶性肿瘤中 华物理医学与康复杂志，2 0 0 5 ，2 7 ( 2 ) ：9 4 9 5 2 1 李敏，等擞波羧整燕纯疗鹃羲瘴残瘸及护理。中国薅爨与漆凑， 2 0 0 0 ，s ( 3 ) ：1 9 0 - 1 9 2 2 2 s c h l e m m e rm ，l i n d n e rl h ，e ta 1 p r i n c i p l e s ，t e c h n o l o g ya n di n d i c a t i o no f h y p e r t h e r m i aa n dp a r tb o d yh y p e r t h e r m i a + g e r m a nr a d i o l o g e ，2 0 0 4 ，4 4 ：3 0 1 3 0 9 。 2 3 g o dj ，c a s t a n or ，t o z i a n o m ，h a h i c hd ，e ta 1 i n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i c c h e m o t h e r a p yi no v a r i a nc a n c e li n tjo y n e c o lc a n c e l2 0 0 5 ，1 5 ( 2 ) ：2 3 3 2 3 9 2 4 h a g e re d ，d z i a m b o rh ，h o h m a n nd ，e ta 1 i n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i cp e r f u s i o n c h e m o t h e r a p yo fp a t i e n t sw i t hc h e m o t h e r a p y r e s i s t a n tp e f i t o n e nd i s s e m i n a t e d o v a r i a nc a n c e r i n tjg y n e c o lc a n c e r ，2 0 0 1 ，1 1 ( 1 1 ) ：5 7 - 6 3 2 5 c h a t z i g e o r g i o nk ，e c o n o m o u ss ，e ta 1 t r e a t m e n to fr e c u r r e n te p i t h e l i a lo v a r i a n c a n c e rw i t hs e c o n d a r yc y t o r e d u c t i o na n dc o n t i n o u si n t r a o p e r a t i v ei n t r a p e r i t o n e a l h y p e r t h e r m i cc h e m o p e r f u s i o n ( c i i p h c p ) z e n t r a b lo y n a k o l ，2 0 0 3 ，1 2 5 ( 1 0 ) ： 4 2 4 4 2 9 2 6 v a nd e rv a n g en ，v a ng o e t h e ma & e ta 1 e x t e n s i v ec y t o r e d u c f i v es u r g e r y c o m b i n e dw i t hi m m - o p e r m i v ei n t r a p e r i t o n e a lp e r f u s i o nw i t hc i s p l a t i nu n d e r h y p e r t h e r m i cc o n d i t i o n s ( o v h i p e c ) i np a t i e n t sw i t hr e c u r r e n to v a r i a nc a n c e r ：a f e a s i b i l i t yp i l o t e u rjs u r go n c o l ，2 0 0 0 ，2 6 ( 7 ) ：6 6 3 - 6 6 8 2 7 李秀繁，王蕊荚，簿。襄鬃癌羧黪内热纯疗瓣茨丘舞巢潼零磊瓮羧获笈发魏研 究河南医学研究，2 0 0 1 ，1 0 ( 4 ) ：3 5 1 - 3 5 4 3 5 2 8 y o s h i d ay ，s a s a k ih ，e ta 1 e f f i c a wo fi n t r a p e r i t o n e a lc o n t i n u o u sh y p e r t h e r m i c c h e m o t h e r a p ya sc o n s o l i d a t i o nt h e r a p yi np a t i e n t sw i t ha d v a n c e de p i t h e l i a lo v a r i a n c a r i c e r ：al o n g t e r mf o l l o w u p ，o n c o lr e p ，2 0 0 5 ，1 3 ( 1 ) ：1 2 1 1 2 5 2 9 p i s op d a h l k em h ，e ta 1 e y t o r e d u c t i v es u r g e r ya n dh y p e r t h e r m i ci n t r a p e r i t o n e a l c h e m o t h e r a p yi np e r i t o n e a lc a r c i n o m a t o s i sf r o mo v a r i a nc a n c e lw o r l djs u r g o n c o l ，2 0 0 4 ，2 8 ，( 1 ) ：2 1 3 0 。d e r a c o m ，r o s nc r ，p e n n a c c h i o l ie ，c ta l 。c y t o r e d u c t i v es u r g e r yf o l l o w e db y i n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i cp e r f u s i o ni n t h et r e a t m e n to fr e c u r r e n t e p i t h e l i a l o v a r i a nc a n c e r ：ap h a s ei ic l i n i c a ls t u d y t u m o r i ，2 0 0 1 ，8 7 ( 3 ) ：1 2 0 - 1 2 6 31 。r y uk s ，k i mj h ，e ta 1 e f f e c t so fi n t r a p e r i t o n e a lh y p e r t h e r m i cc h e m o t h e r a p yi n o v a r i a nc a n c e r g y n e c o lo n c o l ，2 0 0 4 ，9 4 ( 2 ) ：3 2 5 - 3 3 2 3 2 h o s f i n al s ，d ev r i e se g f , m u l d e rn h ，e ta 1 i n t r a p e r i t o n e a lc h e m o t h e r a p yi n o v a r i a nc s 1 - l c e ec a n c e rt r e a tr e v , 2 0 0 0 ，2 0 ( 3 ) ：1 3 3 1 4 3 。 3 3 。d eb r e ee ，r o s i n gh ，e ta t p h a r m a c o k i n e t i cs t u d yo fd o c e t a x e li ni n t r a o p e r a t i v e h y p e r t h e r m i ci p c h e m o t h e r a p y f o ro v a r i a nc a r l c e r a n t i c a n c e r d r u g s ， 2 0 0 3 ，1 4 ( 2 ) ：1 0 3 1 l o 3 4 。d eb r e ee ，r o m a n o sj ，m i c h a l a k i sj ，e t a t 。i n t r a o p e r a t i v eh y p e r t h e r l i c i n t r a p e r i t o n e a lc h c r n o t h e m p yc a r c i n o m a t o s i so fg y n a e c o l o g i c a lo r i g i n a n t i c a n c e r r e s ，2 0 0 3 ，2 3 ( 3 ) ：3 0 1 9 3 0 2 7 3 5 n i c o l e t t om o ，p 翻r i n ir ，g a l e o t t if ，e ta l ，p h a r m a c o k i n e t i c so fi n t r a p e r i t o n e a l h y