川贝枇杷糖浆的限量检测.ppt

川贝枇杷糖浆的限量检测 配制培养基 清洗、烘干、制无菌水 包扎、灭菌 稀释样液 倒平板、培养 观察、计数 配制培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 注：1.在加入药品后微温溶解，滤过后 加入玫瑰红钠、葡萄糖 2.玫瑰红钠固体在加入1000ml水时 加入0.0133g 玫瑰红钠液体在加入1000ml水时应 加入10ml 蛋白 胨胨 琼琼脂磷酸氢氢 二钾钾 硫酸 镁镁 玫瑰 红钠红钠 葡萄 糖 水 5g+1 g 14g+ 2.6g 1g+o.2 g 0.5g + o.1g 10ml+ 2ml 10g +2g 1000 ml+ 200ml 注释 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源； 磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须的 微量元素；玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可 抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生 长过快而导致菌落漫延生长；琼脂是培养 基的凝固剂.同时玫瑰红钠可供霉菌和酵母 菌的计数，但霉菌的生长可抑制其他菌种 的生长，故在玫瑰红钠培养基中处于优势 生长地位。 葡萄糖琼脂养基培 蛋白胨胨琼琼脂酵母菌 膏 葡萄糖水 5g14g5g20g1000ml 注：加入药品后，微热温溶解， 滤过后再加入葡萄糖 清洗、烘干、制无菌水 1.清洗培养皿、移液管、试管（清洗移 液管要将管内的水滴甩干净，以防烘 干时耗时过长） 2.将培养皿、移液管放于烘箱中烘干 3.在4支试管中分别加入9ml蒸馏水，塞 紧，用纸包扎，一会灭菌 包扎、灭菌 1.烘干的移液管， 在管口处塞上棉 花，不能松也不 能紧，然后与报 纸成30度至45度 包扎起来 2.将烘干的8个培养皿 包扎起来 3.将培养基、培养皿、移 液管、试管一起放入灭 菌锅内灭菌30分钟 (121、103kPa) 稀释样液 1.将8个培养皿分为4组，编号1、2、3、4 2.将移液管、试管分别编号1、2、3、4 3.1组，用1号移液管在1号试管中取无菌水，分别向1 组培养基中加入1ml无菌水 2组，用1号移液管取1ml的川贝枇杷糖浆注入2号试 管，用2号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液于2 组培养皿中 3组，用2号移液管在2号试管中取1ml样液注入3号 试管中，用3号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液 于3组培养皿中 4组，用3号移液管在3号试管中取1ml样液注入4号 试管中，用4号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液 于4组培养皿中 倒平板、培养 1.在无菌环境中将培养基倒入培养皿中 注：培养皿要持平，到后盖上皿盖，放在试验台上 正反旋转几次，以 使培养皿中液体混匀 2.将培养皿放于培养箱中培养72小时 观察、计数 一、菌落计数 1.选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计 数菌落总数 2.低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多可 不记，每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 3.其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无 片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不 到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算 半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 4.当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链 作为一个菌落计数 二、菌落总数计算方法 1.只有一个稀释度平板的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再用平均值乘以相应稀释倍数， 作为每克（或毫升）中菌落总数结果。 2.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内，按 下式计算 N=C/(n1+0.1n2)d 平板菌落数之和 第一平板菌落数 第二平板菌落数 稀释因子 空白对照 稀释10倍 稀释100倍 稀释1000倍 结果 1