微生物室工作流程.ppt

细菌室学习体会 苏长青 细菌室的主要任务： n一、培养、鉴定病原菌的类别 n二、做出致病菌的药敏结果 n三、监测院内感染 n四、菌种保存及科研 细菌室的工作流程： n标本采集标本接收编号登记 接种培养鉴定做药敏发 报告 合抱之木始于毫末 n标本采集主要由临床科室负责 n标本接收做好核对工作 患者基本信息 核对 标本类型 标本采集时间 标本量 不确定标本应与临床科室联系 不合格标本就予以退回 n标本接收后应及时处理，因一些细菌对环 境比较敏感，比如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈 瑟菌和流感嗜血杆菌等在脱离人体后极易 死亡； n如不能及时处理则应该妥善保存： 标本不能冷标本不能冷 冻或冷藏冻或冷藏 编号：目的是为保证标本号的唯一性 细菌室标本采用每日编号形式，用7位数“月 、 日、标本号”联合编号 如0708082 07为七月 08为七月八号 082为七月八号的第82个标本 90 91 培养基选择 根据标本的不同需要接种不同的平板 首先了解一下平板的性质和用途： 血平板（BA）：除含有普通营养琼脂所包含 的所有营养之外，还加入了5%的羊血，大 大增加了其中的蛋白质和生长因子，适用 各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分 离都应接种在此平板。 n麦康凯（MAC）：内含有胆盐可抑制革兰 阳性菌的生长，有利于革兰阴性菌的生长 ，是常用的选择性培养基；发酵型革兰阴 性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上 菌落颜色不同，便于鉴别菌种。 n巧克力平板（CA）：内含有V和X因子，嗜 血杆菌、奈瑟菌等生长良好。凡疑有这些 菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。 nSS琼脂：因胆盐含量较高，具有较强的抑 制力，是常用的强选择性培养基。其中的 胆盐抑制革兰阳性菌的生长，枸椽酸盐和 粕绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病菌的 沙门菌、志贺菌容易分离到。因选择性过 强，可能会影响检出率，使用时常加弱选 择性培养基以配对互补。 n小BB：即为营养肉汤，用于标本和各类细 菌的增殖。 标本类型 培养基 n血 血培养瓶 n中段尿 血平板、麦康凯平板 n脑脊液 小BB、血平板、巧克力平板 n穿刺液 小BB、血平板、麦康凯平板、巧 克力平板 n胆汁 血平板、巧克力平板、麦康凯平 板 n呼吸道标本 血平板、麦康凯平板、巧克力平 板、沙宝氏平板 n粪便标本 SS平板、MAC平板和血平板 n病灶分泌物 血平板、巧克力平板、麦康凯平 板 接种 n血培养：将血培养瓶上条形码贴到化验单 上，点击血培养瓶图标进入输入窗口 扫描条形码（血培养箱右侧） 打开右 侧抽屉将血培养瓶放入亮灯空位点击 “”关上血培养箱。 n痰培养：接种环在加热器内烧红冷却后， 取脓性部分一环分三区划线，分别接种于 BA、Cho、Mac(CO2温箱)、SDA(30温箱 )培养。 n粪便培养：接种环在加热器内烧红冷却后 ，取粪便病变明显部位标本适量，分别在 SS平板，BA和MAC平板上三区划线。 注意：在划第二区之前应再次灭菌接种环 以分出单个菌落。 小便培养：用加样器无菌取10ul分区划线接 种于BA 、Mac，置CO2温箱培养。 脑脊液 穿刺液 首先接种小BB：取600ul标 其它无菌体液 本打入小BB试管中，再各 取一滴分别接种在BA、 CA 、 MAC，灭菌接种环后三区 划线 棉拭子 用灭菌后的镊子钳取标本后在 BA、 组织标本 MAC、CA、SDA上滚动接种，然后三 区划线 n深静脉导管（PICC）：用无菌移液管将小 BB移入装有PICC的无菌试管中。 n支原体：将棉拭子标本与营养液R1充分混 匀后，取出棉拭子，将营养液R1与营养液 R2混匀，然后将混合液加入药敏板，每孔 55ul. 注意事项 n接种环使用前后均应灭菌，以免造成环境 污染及交叉污染。 n脑脊液与其他无菌体液均应先接种小BB进 行增菌，以免小BB污染造成假阳性结果。 n接种标本时应待接种环冷却后进行，以免 将细菌烫死从而造成假阴性结果。 n三区划线时应轻柔，不破坏平板；线条应 疏密合适，从而更好分离出单个菌落。 培养 n需氧培养：临床细菌室最常用的培养方法 ，将已接种好的平板置于35度温箱中孵育 。 n二氧化碳培养：有些细菌初次分离培养时 需置5%-10%CO2环境才能生长良好，如一 些奈瑟菌属，布鲁菌属等。 鉴定及药敏 n依据细菌的菌落形状、气味、颜色、溶血 类型及有无等和一系列的生化反应对细菌 进行鉴定，然后进行药敏试验。 “无菌概念” n“无菌概念”