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实验七 培养基的配制与灭菌 一、实验目的 1、掌握培养基配制的一般方法与步骤。 2、了解常见的灭菌方式，掌握高压灭菌的原理及操作。 3、掌握基本实验器材的包扎。 二、实验原理 （一）培养基的配制 培养基是由人工配制的能够满足微生物生长、繁殖或 积累代谢产物所用的营养基质。 培养基的六大营养因素： 碳源 氮源 能源 生长因子 无机盐 水 培养基的类型 据组成成分可分为: 1、合成培养基 2、天然培养基 3、半合成培养基 从培养基的物理状态可分为： 1、液体培养基 2、固体培养基 3、半固体培养基 据用途可分为： 1、基础培养基 2、加富培养基 3、选择培养基 4、鉴别培养基 实验基本流程： 设计，计算，准备原料称量、溶解调节pH 分装 （过滤澄清 ） 灭菌 塞棉塞和包扎 （摆斜面） 液体：试管 ，三角瓶1/3 固体：三角瓶 1/2 （二）灭菌和消毒技术 1. 火焰灼烧：对金属器皿的灭菌 2. 干热灭菌：18023小时（对器皿的灭菌） 3. 湿热灭菌 常压蒸汽灭菌 ：巴氏消毒法，间歇灭菌法 蒸汽持续灭菌法 高压蒸汽灭菌： 121 30分钟 4. 过滤除菌 5. 紫外线杀菌：紫外线照射20分钟以上，对空气杀菌 6. 化学药剂消毒和杀菌 n热蒸汽 n121, 25min 115, 35min n 加水， 装锅，升压保压，降压与排气， 出锅， 烘干。 高压蒸汽灭菌 三、实验材料 n250ml、500ml三角瓶 n15ml试管 n培养基配制的化学药品和琼脂 n棉花 n报纸 n10ml移液管，100ml量筒，500ml量筒，1000ml量筒各2 个 n1ml移液管5根 n10N NaOH n孟加拉红水溶液 npH试纸 ，电炉，标签纸 ，玻棒，铝锅 ，天平 四、实验内容 n牛肉膏蛋白胨培养基 固体 3L（500ml 三角瓶分装 X 9，每 瓶加琼脂8克） n马丁氏培养基 固体 1L （500ml 三角瓶分装 X 3，每瓶加 琼脂8克） n高氏一号培养基 固体 1L 同上 n淀粉培养基 固体 1L 同上 n葡萄糖蛋白胨水培养基 液体 5ml/试管 40 支 n蛋白胨水培养基 液体 5ml/试管 40支 n3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基 液体 5ml/试管 75支，内装指 形管 n伊红美兰培养基 固体 500ml （500ml 三角瓶分装 X 2，每 瓶加琼脂7.5克） n无菌水 9ml/支 30 支 n无菌水 90ml/瓶 20 瓶 n牛肉膏蛋白胨培养基: 1%NaCl 5%NaCl 各300mL（500ml 三角瓶，每瓶加琼脂8克） 10%NaCl pH5 pH7 各300mL（500ml 三角瓶，每瓶加琼脂8克） pH9 四、实验内容 五、 思考题 1、简述高压灭菌锅的灭菌原理及使用注意点。 2、培养
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