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全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 北华大学医学检验学院 赵云冬 实验 12 透射比浊法测定C反应蛋白 1 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 实验目的 v掌握：透射比浊法测定C反应蛋白（CRP）原理。 v熟悉：透射比浊法测定CRP试剂成分。 2 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 实验原理 光线通过浑浊介质溶液时，一部分被混浊颗 粒吸收，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这 种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。 免疫透射比浊法是利用抗原和抗体的特异性 结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少 对抗原或抗体进行定量的方法。 使用抗CRP抗体和样品中的CRP进行抗原-抗 体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度 的变化反映CRP浓度。 3 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 试剂与器材 1试剂（R1） 100 mmol/L Tris缓冲液（pH7.5）； 聚乙二醇； 0.95g/L叠氮钠。 2试剂（R2） 100 mmol/L Tris缓冲液（pH8.0）； 羊抗人CRP抗血清； 0.95g/L叠氮钠。 3仪器 自动生化分析仪。 4 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 操作步骤 按表3-5操作 加入物(l)空白管（B）测测定管（U） 血清标标本15 生理盐盐水15 试剂试剂 250250 混合， 375 min，在波长长340nm，生理盐盐水调调零， 读读各管吸光度(A1B，A1U) 试剂试剂 5050 混合， 375 min，在波长长340nm，生理盐盐水调调零， 读读各管吸光度(A2B，A2U) 表3-5 免疫透射比浊法测定C反应蛋白操作步骤 5 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 计算 式中265/315是进进行体积积校正参数，265为为 加入试剂试剂 前体积积，315为为加入试剂试剂 后体积积 。 按照试剂试剂 配套标标准品使用要求，用5个不同 水平的标标准液，并以生理盐盐水为为空白，经经校准 测测定，仪仪器自动对标动对标 准品响应应量通过过合适的数 学模型如Logit-Log，拟拟合成校准曲线线。校准仪仪 器后，仪仪器直接报报告检测结检测结 果。 6 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 参考范围 新生儿：血清CRP0.6mg/L； 出生后l周至l个月婴婴儿：血清CRP1.6mg/L； 孕妇妇：血清CRP47mg/L； 成人和儿童：血清CRP（0.0688.2）mg/L。 7 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 临床意义 CRP是机体对对炎性刺激或组织损伤发组织损伤发 生的急 性时时相反应时应时 出现现的一种急性时时相蛋白。 1各种细细菌感染 急性化脓脓性炎症、肺炎、心内 膜炎、尿路感染等，风风湿热热，传传染性单单核细细胞性 增多症等炎症性疾病，血清CRP升高。 2组织损伤组织损伤 心肌梗塞、外伤伤、烧伤烧伤 等，恶恶性 肿肿瘤，风风湿性疾病，肉芽肿肿，何杰金氏病，肾肾移 植排异反应应等疾病。 8 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 临床意义 3鉴别诊鉴别诊 断 CRP测测定在鉴别鉴别 有明显显的炎症或 组织损伤组织损伤 的疾病与无炎症或炎症极轻轻的疾病、鉴鉴 别细别细 菌性或病毒性炎症时时很有价值值。 4评评估病情及疗疗效 CRP升高标标志病情发发展，由 升高变为变为 下降，标标志病情趋趋于稳稳定，是评评价风风湿 热热等疾病病情活动动性的最佳参数之一，也是某些疾 病治疗疗有无效果的参考指标标。 5用于器官移植排异反应应的检测检测 排异反应时应时 血 清CRP水平持续续升高。 9 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 注意事项 1CRP参考值值范围围随测测定方法、试剂试剂 不同而异 ，请请参照不同试剂试剂 盒说说明书书。 2不同的厂家，不同批号的试剂试剂 不能混用。 10 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 评价 1测测定CRP的方法：灵敏度较较低的免疫扩扩散法 、火箭电电泳法、胶乳凝集试验试验 ；高灵敏度、高精 密度的放射免疫、酶免疫、免疫比浊浊等定量试验试验 ； 其他方法如ELISA、免疫发发光法和化学发发光法， 虽虽然灵敏度和精确度都较较高，但其成本也较较高。 免疫比浊浊法具有试剂稳试剂稳 定、操作简简便、流程短 、重复性和精确性好的优势优势 ，适合CRP定量测测定。 11 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 评价 2前带带限制 CRP浓浓度2 000mg/L时时无前带现带现 象 。抗原与抗体反应时应时 如果抗原抗体比例适当可形成 大的抗原抗体复合物，反应应体系出现浑浊现浑浊 ；当待测测 物质质（抗原）含量过过高时时，抗原与抗体的比例不适 合，所形成的结结合物少且小，反应应体系不出现浑浊现浑浊 称为为前带现带现 象。 3特异性/干扰扰 当样样品中Vc浓浓度1 704mol/L、 胆红红素浓浓度684mol/L、血红红蛋白浓浓度5g/L、甘 油三酯浓酯浓 度22.6mmol/L时时无干扰扰。 12 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 评价 4灵敏度/检测检测 限 本试剂试剂 的检测检测 限为为2mg/L。 5超敏C反应应蛋白（Hs-CRP） 是根据测测定方法 更敏感而命名。临临床测测定CRP的方法检测线检测线 性一 般为为2 mg/L 250mg/L，缺乏较较高的灵敏性。胶乳 增强的免疫比浊浊法等技术术大大提高了分析的灵敏 度（检测检测 低限为为0.005 mg/L 0.1mg/L），可检测检测 出低水平（0.1mg/L10mg/L）的CRP浓浓度。Hs- CRP可作为为一种急性炎症的标标志物，而且可区别别 在正常范围围内低程度炎症反应应中CRP的水平。 13 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实