圆二色谱仪使用.doc

圆二色谱仪使用手册实验前请先阅读第一部分注意事项2011年4月6日整编河北大学理化中心目 录一、 注意事项 二、 光源的选择 三、MOS 450波长的校正四、电压的调节 五、 MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程六、MOS 450-SFM 300动力学操作方法 一、注意事项1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。实验结束时首先拔掉搅拌电源。在样品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。2、光源(也就是氙灯或汞氙灯)不可频繁开关。举例而言，如果马上不用仪器，但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关闭。短时间内频繁开关光源反而会缩短光源寿命。3、光电倍增管移动时(比如从圆二色模式换为荧光模式)，注意用软件将Hv（高压）关闭。4、扫描速度在0.5-5s/nm。使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低于0.5秒/nm,过快的扫描速度易造成calibration移位。5、如需用到emission单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速度要大于1s/nm,连0.5s/nm都不能用。6、PMT的HV不要超过1000V.7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水槽温度设为20度以下即可。8、TCU上设置为remote; Power supply设置为ARC.9、仪器运行过程中，更换样品时，shutter最好关闭。二、光源的选择1、电源：图1中的Lamp power supply处有Xe（红色）、Xe(Hg)（红色）、零线（黑色）三个插孔。零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在Xe（红色）插孔中，在做快速动力学测量的时候插在Xe(Hg)插孔中。2、光源选择：图2中的Vertical setting部位下方的底座上有Xe、Xe(Hg)两个标示前后排列。手动松开中间的大圆头Screws(图2中)，可以拉出或推进Vertical setting。当Vertical setting的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上，也就是那个标示所示的灯正对着光路，为测试用光源。做快速动力学测量的时候选Xe(Hg)，做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选Xe，最后再旋紧中间的大圆头Screws。注：Xe（Hg）灯中的Hg元素有一些很强的特征谱线，加强了Xe元素发光的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱图。而对于光谱扫描，单独的Xe元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。 图1 图2三、MOS 450波长的校正仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长校正的操作步骤如下：1、 确认样品仓中没有任何样品和样品池。2、 根据光源选择的操作说明，将光源换为Xe（Hg）灯。3、 打开ALX-250、MM-450和PMS-450电源。4、 点击电脑中的BioKine软件图标，进入测量主界面。5、 在主界面选择Device菜单的Scanning spectrometer命令，进入光谱扫描界面。点击按钮设置参数，在光谱测量模式里选择Fluorescence模式，波长扫描范围200-750nm，进行光谱扫描，得出如图1所示谱图。此时检测器位置为与入射光成180度的位置，不用改为荧光的位置。图16、 谱图在546nm处应该出一个峰，比较546nm处的峰是否有偏差。如果超出+/-1nm的范围，需要进行波长校正。7、 举例说明，如果在550nm处出峰，波长偏了4nm，那么就在图2所示主界面左下栏的Ex处填入550nm，按回车键。图28、 点击图2主界面Install菜单的Spectrometer advanced settings命令，出现图3所示的窗口，点击Excitation下方的Calibration按钮，进入波长校正界面，如图4。图3图4在图4所示窗口里的Current wavelength处输入546，点击OK按钮，进行波长校正。Xe 灯校准波长467nm；Xe(Hg)灯校准波长546nm。操作完以上各步骤，波长校正完成。可进行正常的测量操作。四、电压的调节1. 选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；2. 在打开ALX-250的同时，打开MM-450电源，机器预热10min；3. 确保空仓（样品池中无待测样品）。狭缝设置为2nm4. 点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。点击Install 的Device，出现图1 ，只选中MOS-450，点击OK。图1进入图2界面，点击，图2输入EX值200nm，打开shutter，Hv on，Auto值为200左右。五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程1、选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；2、在打开ALX-250的同时，打开仪器电源，先开MM-450，再开PMS-450。机器预热10min；3、 清洗好样品池，添加待测样品的空白溶液（如水或缓冲盐）到样品池中。4、 安装上样品池盖。5、 如果测量波长小于210nm，需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气，调整流量计流速为1000L/h，通氮气几分钟。确认电源线插在氙灯的位置，并且氙灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。然后打开ALX-250光源开关，将氮气流量计流速设为400L/h，查看ALX-250面板显示，当氙灯能量达到150W，氙灯稳定。如果无需氮气吹扫，直接打开ALX-250电源，等待氙灯稳定后进行下一步操作。6、 点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。7、 点击图1主界面的Device/Scanning Spectrometer，进入光谱扫描界面，如图2。 图1 图27. 点击主界面上方的按钮，进行光谱测定参数的设定，如图3。 图3Acquisition mode：选择测量模式CD。Begin(nm)：扫描初始波长End(nm）：扫描结束波长Scan Repeat ：扫描次数Acquisition duration：每个nm的测量持续时间，范围0.5s-20s，此项相当于扫描速度的设定。园二色谱扫描速度不能低于0.5s。使用emission 单色器，扫描速度为1nm/sShutterAutomatic mode：选择Always open，挡板处于始终打开的状态。PM gain*10：当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。CD parameters：CD的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000、300、100和30 mdeg。其他选项根据需要可以选择。以上参数都设置好后，点击OK按钮，参数设置完成，回到主界面。8. 在要测量波长的范围内取一个波长点，输入到图2下方的Ex处，点击Enter键。这时确认按钮变为，然后点击，自动调整HV电压，然后再点击按钮，锁定此电压值。电压值一般小于800V。9. 空白的测量 点击图2主界面Blank spectum区域的Record按钮，记录第一步添加的空白样品谱图，空白谱图显示在主界面中。测量后选择Subtract复选框，将在随后的样品光谱的测量中扣除空白值。10. 样品的测量 再点击按钮，关闭挡板，取出样品池，将空白样品换成被测样品，然后再放回到样品支架上，盖好样品仓盖。这时再点击，打开挡板。点击图2主界面Acquisition control区域的按钮，记录样品的园二色谱图，显示在图2主界面中。11. 谱图的平滑第十步测量的谱图为样品园二色原始测量图，需要经过平滑处理，得到平滑的曲线图，操作如下：选择主界面Analysis菜单，这时界面变为分析界面，选择Tools菜单下的Smoothing命令，出现平滑的设置界面，选择第二项。 选择平均平滑点数，此数值必须是奇数，然后点击Proceed按钮，这时平滑后的曲线出现在界面中。12. 保存数据选择主界面的File菜单下的Save As，出现图5界面。图5选择要保存文件到哪个文件夹，并给文件命名，选中Save as text，然后点击Save按钮，文件保存到指定的文件夹中。13. 如果对园二色数据需要进行蛋白质二级结构分析，进行如下操作：在BioKine软件中选择File菜单的Load data file命令，打开要进行分析的文件，然后选择File菜单的Exprot data to/Dicroprot f