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第六章 基因工程的主要操作原理 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 2 2 第一节 DNA提取 （一）总DNA的提取 n n 大肠杆菌总大肠杆菌总DNADNA提取提取 n n 植物总植物总DNADNA提取提取 n n 动物总动物总DNADNA提取提取 n n 质粒质粒DNADNA提取提取 n n 噬菌体噬菌体DNADNA提取提取 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 3 3 DNADNA的应用：的应用： n n 构建基因组文库：构建基因组文库：100kb100kb n n SouthernSouthern杂交杂交( (包括包括RFLP)RFLP)：50kb50kb n n PCRPCR分离基因等：分离基因等：50kb50kb 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 4 4 n n 因因“ “材材” ”施提施提 n n 根据不同研究需要，保证结构的相应完整根据不同研究需要，保证结构的相应完整 性性 n n 尽量排除其它大分子成分的污染尽量排除其它大分子成分的污染( (蛋白质、蛋白质、 多糖及多糖及RNARNA等等) ) n n 保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有 机溶剂及高浓度的金属离子机溶剂及高浓度的金属离子 在DNA提取过程中应做到 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 5 5 1.大肠杆菌总DNA提取 n n 机械裂解机械裂解 n n 化学裂解：溶菌酶化学裂解：溶菌酶 or EDTA or both, SDSor EDTA or both, SDS n n 去蛋白去蛋白：酚：酚/ /氯仿抽提氯仿抽提 n n 浓缩浓缩：乙醇，加单价阳离子，如：乙醇，加单价阳离子，如NaNa + + n n 储存：储存：-20-20放置放置 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 6 6 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 7 7 操作步骤 uu100 mL 100 mL 细菌过夜培养液细菌过夜培养液, 5000rpm, 5000rpm离心离心1010分钟分钟, , 去上清液。去上清液。 uu加加9.5 mL TE9.5 mL TE悬浮沉淀悬浮沉淀, , 并加并加0.5ml 10% SDS, 50l 20mg/ml(0.5ml 10% SDS, 50l 20mg/ml(或或 1mg1mg干粉干粉) )蛋白酶蛋白酶 K, K, 混匀混匀, 37, 37保温保温1 1小时。小时。 uu加加1.5 mL 5mol/L NaCl, 1.5 mL 5mol/L NaCl, 混匀。混匀。 uu加加1.5 mL CTAB/NaCl1.5 mL CTAB/NaCl溶液溶液, , 混匀混匀, 65, 65保温保温2020分钟。分钟。 uu用等体积酚用等体积酚: :氯仿氯仿: :异戊醇异戊醇(25:24:1)(25:24:1)抽提抽提, 5000rpm, 5000rpm离心离心1010分钟分钟, , 将将 上清液移至干净离心管。上清液移至干净离心管。 uu用等体积氯仿用等体积氯仿: :异戊醇异戊醇(24:1)(24:1)抽提抽提, , 取上清液移至干净管中。取上清液移至干净管中。 uu加加1 1倍体积异丙醇倍体积异丙醇, , 颠倒混合颠倒混合, , 室温下静止室温下静止1010分钟，沉淀分钟，沉淀DNADNA。 uu用玻棒捞出用玻棒捞出DNADNA沉淀沉淀, 70%, 70%乙醇漂洗后乙醇漂洗后, , 吸干吸干, ,溶解于溶解于1ml TE, -201ml TE, -20 保存。如保存。如DNADNA沉淀无法捞出沉淀无法捞出, ,可可5000rpm5000rpm离心离心, , 使使DNADNA沉淀。沉淀。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 8 8 2.植物细胞总DNA提取 总原则： n n 取材取材 n n 液氮研磨液氮研磨 n n 裂解裂解 n n 去蛋白和细胞物去蛋白和细胞物 n n 浓缩浓缩 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作 9 9 （1）CTAB法 n n CTAB(cetyltriethylammoniumbromide) (CTAB(cetyltriethylammoniumbromide) (十六烷基三乙基溴化铵十六烷基三乙基溴化铵) ) n n 一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在 高盐溶液中高盐溶液中(0.7 mol/L NaCl)(0.7 mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐浓度到是可溶的，当降低溶液盐浓度到0.3 0.3 mol/L NaClmol/L NaCl时，从溶液中沉淀。时，从溶液中沉淀。 高盐提取高盐提取-低盐沉淀低盐沉淀-高盐溶解高盐溶解 -乙醇沉淀乙醇沉淀 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1010 经典的经典的CTABCTAB法使用两种缓冲液法使用两种缓冲液 n n 高盐提取缓冲液：高盐提取缓冲液：1 1（冷冻干燥材料）或（冷冻干燥材料）或2 2CTABCTAB（新（新 鲜材料）、鲜材料）、0.7 mol/L0.7 mol/L或或1.4 mol/L NaCl1.4 mol/L NaCl n n 沉淀缓冲液：沉淀缓冲液：1 1CTABCTAB，不含，不含NaclNacl CTABCTAB法的优点法的优点 n n 能很好地去除糖类杂质对于含糖较高的材料可优先使用能很好地去除糖类杂质对于含糖较高的材料可优先使用 n n 在提取前能同时得到高质量的在提取前能同时得到高质量的DNADNA及及RNARNA。可根据需要。可根据需要 分别进行纯化，如只需要分别进行纯化，如只需要DNADNA，则可用，则可用RNaseRNase（核糖核（核糖核 酸酶）水解掉酸酶）水解掉RNARNA。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1111 (2)SDS法 n n 利用高浓度的利用高浓度的SDSSDS，在较高温度，在较高温度(55(556565) )条件下裂解细条件下裂解细 胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提 高盐浓度及降低温度的作法使蛋白质及多糖杂质沉淀高盐浓度及降低温度的作法使蛋白质及多糖杂质沉淀( (最常最常 用的是加入用的是加入5mol5molL L的的KAcKAc于冰上保温，在低温条件下于冰上保温，在低温条件下KACKAC 与蛋白质及多糖结合成不溶物与蛋白质及多糖结合成不溶物) )，离心除去沉淀后，上清液，离心除去沉淀后，上清液 中的中的DNADNA用酚氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的用酚氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的 DNADNA。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1212 SDS SDS 法的优缺点法的优缺点 n n 优点：优点：SDSSDS法操作简单、温和，也可提取到分法操作简单、温和，也可提取到分 子量较高的子量较高的DNADNA。 n n 缺点：产物含糖类杂质较多。缺点：产物含糖类杂质较多。 n n 该方法所得的该方法所得的DNADNA样品也可直接用于样品也可直接用于SouthernSouthern 杂交，但在限制性内切酶消化时需加大酶用量杂交，但在限制性内切酶消化时需加大酶用量 ，并适当延长反应时间。，并适当延长反应时间。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1313 3.动物细胞总DNA提取 n n 取材取材 n n 液氮研磨液氮研磨 n n 裂解：裂解：SDSSDS和蛋白酶和蛋白酶K K n n 去蛋白和细胞物去蛋白和细胞物 n n 浓缩浓缩 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1414 操作步骤 n n 切取组织切取组织5g5g左右左右, ,剔除结缔组织剔除结缔组织, ,吸水纸吸干血液吸水纸吸干血液, ,剪碎放入剪碎放入 研钵研钵( (越细越好越细越好) )。 n n 倒入液氮倒入液氮, ,磨成粉末磨成粉末, ,加加10ml10ml分离缓冲液。分离缓冲液。 n n 加加1 mL 10% SDS, 1 mL 10% SDS, 混匀混匀, ,此时样品变得很粘稠。此时样品变得很粘稠。 n n 加加50 50 l l或或1mg 1mg 蛋白酶蛋白酶 K, 37K, 37保温保温1-21-2小时小时, , 直到组织完全直到组织完全 解体。解体。 n n 加加1 mL 5 mol/L NaCl, 1 mL 5 mol/L NaCl, 混匀混匀,5000rpm,5000rpm离心数秒钟。离心数秒钟。 n n 取上清液于新离心管，用等体积酚取上清液于新离心管，用等体积酚: :氯仿氯仿: :异戊醇异戊醇(25:24:1)(25:24:1) 抽提。待分层后抽提。待分层后,3000rpm,3000rpm离心离心 5 5分钟。 分钟。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1515 n n 取上清加取上清加1/10 1/10 体积体积3 mol/L NaAc, 3 mol/L NaAc, 及及2 2倍体积无水乙醇颠倍体积无水乙醇颠 倒混合沉淀倒混合沉淀DNADNA。室温下静止。室温下静止10-2010-20分钟，分钟，DNADNA沉淀形成沉淀形成 白色絮状物。白色絮状物。 n n 用玻棒钩出用玻棒钩出DNADNA沉淀沉淀,70%,70%乙醇中漂洗后乙醇中漂洗后, ,在吸水纸上吸干在吸水纸上吸干, , 溶解于溶解于1ml TE1ml TE中中,-20,-20保存。保存。 n n 如果如果DNADNA溶液中有不溶解颗粒溶液中有不溶解颗粒, ,可在可在5000 rpm5000 rpm短暂离心短暂离心, ,取取 上清上清; ; 如要除去其中的如要除去其中的RNA,RNA,可加可加5 5 l RNaseA(10 l RNaseA(10 g/g/ l), l), 3737保温保温3030分钟分钟, , 用酚抽提后用酚抽提后, , 按步骤按步骤8-98-9重沉淀重沉淀DNADNA。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1616 （二）质粒DNA提取 如何区分细菌染色体如何区分细菌染色体DNADNA和质粒和质粒DNA?DNA? n n 二者的分子构型不同二者的分子构型不同。 n n 大肠杆菌染色体大肠杆菌染色体DNADNA构型：线性的或开环的构型：线性的或开环的 DNADNA分子分子 n n 质粒：共价闭合环状的质粒：共价闭合环状的DNA(cccDNA)DNA(cccDNA)分子分子 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1717 1.碱法提取质粒的原理 n n 当溶液的当溶液的pHpH值在值在12.012.012.512.5时，线性的时，线性的DNADNA会被变会被变 性，两条链彻底分开；性，两条链彻底分开； n n 而对于而对于cccDNAcccDNA，虽然氢键会断裂，但互补的两条链，虽然氢键会断裂，但互补的两条链 仍然会紧密地结合在一起。仍然会紧密地结合在一起。 n n 中性中性pHpH值是值是cccDNAcccDNA迅速地复性；而线性的染色体迅速地复性；而线性的染色体 DNADNA不能复性不能复性, ,聚集形成网状结构。聚集形成网状结构。 n n 离心离心: : 留在上清液中的是留在上清液中的是cccDNAcccDNA，沉淀中是线性，沉淀中是线性 DNADNA和细胞残骸蛋白和细胞残骸蛋白 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1818 提取的主要步骤 细菌的培养 细菌的收集和裂解 质粒DNA的分离和纯化 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作1919 试剂试剂 n n 溶液溶液: : 50mM 50mM葡萄糖，葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM 10mM EDTA(pH 8.0EDTA(pH 8.0）。）。 n n 溶液溶液：0.2N NaOH0.2N NaOH，1% SDS1% SDS。 n n 溶液溶液：醋酸钾（醋酸钾（KAcKAc）缓冲液，）缓冲液，pH 4.8pH 4.8。 n n TE bufferTE buffer： 10mM Tris-HCl(pH 8.0) 10mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM EDTA(pH 8.0)1mM EDTA(pH 8.0) n n 苯酚苯酚/ /氯仿氯仿/ /异戊醇异戊醇（2525：2424：1 1） n n 乙醇乙醇（无水乙醇、（无水乙醇、70%70%乙醇）乙醇） 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2020 操作步骤操作步骤 n n 挑取挑取LBLB固体培养基上生长的单菌落，接种于固体培养基上生长的单菌落，接种于2.0 2.0 mmL L LB LB（含相应抗生素）液体培养基中，（含相应抗生素）液体培养基中，3737、 250 g250 g振荡培养过夜（约振荡培养过夜（约12-14 hr12-14 hr）。）。 n n 取取1.5 m1.5 mL L培养物入微量离心管中，室温离心培养物入微量离心管中，室温离心 8000 g1 min8000 g1 min，弃上清，将离心管倒置，使液，弃上清，将离心管倒置，使液 体尽可能流尽。体尽可能流尽。 n n 将细菌沉淀重悬于将细菌沉淀重悬于100 100 L L预冷的预冷的溶液溶液中，剧烈中，剧烈 振荡，使菌体分散混匀。振荡，使菌体分散混匀。 n n 加加200 200 L L新鲜配制的新鲜配制的溶液溶液，颠倒数次混匀并将，颠倒数次混匀并将 离心管放置于冰上离心管放置于冰上2-3 min2-3 min，使细胞膜裂解。，使细胞膜裂解。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2121 n n 加高浓度的醋酸钾溶液，沉淀染色体，去除染色加高浓度的醋酸钾溶液，沉淀染色体，去除染色 体体DNADNA及大部分蛋白质。及大部分蛋白质。 n n 离心取上清液，用苯酚离心取上清液，用苯酚- -氯仿萃取，去除蛋白质。氯仿萃取，去除蛋白质。 n n 乙醇或异丙醇沉淀水相质粒乙醇或异丙醇沉淀水相质粒DNADNA。 n n 用无用无DNaseDNase的的RNaseRNase去除残余的去除残余的RNA RNA 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2222 （三）噬菌体DNA提取 n n 溶源性噬菌体：诱导裂解溶源性噬菌体：诱导裂解 n n 参考第三章参考第三章 接种量是诱导裂解的关键接种量是诱导裂解的关键 n n 细胞密度低：接种后所有细胞很快裂解细胞密度低：接种后所有细胞很快裂解 n n 细胞密度高：持续感染，没有裂解细胞密度高：持续感染，没有裂解 n n 接种密度合适：细胞可以持续生长一段时间，并且最终接种密度合适：细胞可以持续生长一段时间，并且最终 全部被裂解从而释放子代噬菌体。全部被裂解从而释放子代噬菌体。 第二节 RNA的提取 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2424 防止防止RNARNA降解降解, ,抑制抑制RNaseRNase活性活性 所有的组织中均存在所有的组织中均存在RNARNA酶酶, ,人的皮肤、手指、试人的皮肤、手指、试 剂、容器等均可能污染样品。剂、容器等均可能污染样品。 n n 需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套）需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套） 。 n n 所用的玻璃器皿需置于干燥烘箱中，所用的玻璃器皿需置于干燥烘箱中，200200烘烘 烤烤2 2小时以上。小时以上。 n n 材料如塑料容器等皆需用材料如塑料容器等皆需用0.1%0.1%的焦碳酸二乙酯的焦碳酸二乙酯 (DEPC)(DEPC)水溶液处理水溶液处理, ,高压灭菌。高压灭菌。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2525 DEPCDEPC使用方法使用方法 n n DEPCDEPC是是RNaseRNase的化学修饰剂的化学修饰剂, ,它和它和RNaseRNase的活性基团（的活性基团（ 组氨酸的咪唑环）反应而抑制酶活性。组氨酸的咪唑环）反应而抑制酶活性。 n n DEPCDEPC与氨水溶液混合会产生与氨水溶液混合会产生致癌物致癌物, ,因而使用时需小因而使用时需小 心。心。 n n 试剂也可用试剂也可用DEPCDEPC处理处理, ,加入加入DEPCDEPC至至0.1%0.1%浓度高压灭菌浓度高压灭菌 以消除残存的以消除残存的DEPC,DEPC,否则否则DEPCDEPC也能和腺嘌呤作用而破坏也能和腺嘌呤作用而破坏 mRNAmRNA活性。活性。 n n DEPCDEPC能与胺和巯基反应能与胺和巯基反应, ,因而含因而含TrisTris和和DTTDTT的试剂的试剂不不 能能用用DEPCDEPC处理。处理。TrisTris溶液可用溶液可用DEPCDEPC处理的水配制然后处理的水配制然后 高压灭菌。配制的溶液如不能高压灭菌高压灭菌。配制的溶液如不能高压灭菌, ,可用可用DEPCDEPC处理处理 水配制水配制. . 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2626 n n 无无RNaseRNase灭菌水灭菌水：用经高温烘烤的玻璃瓶装：用经高温烘烤的玻璃瓶装 蒸馏水，然后加入蒸馏水，然后加入0.01%0.01%的的DEPCDEPC（体积（体积/ /体体 积），处理过夜后高压灭菌。积），处理过夜后高压灭菌。 n n 75%75%乙醇：乙醇：用用DEPCDEPC处理水配制处理水配制75%75%乙醇，乙醇， （用高温灭菌器皿配制），然后装入高温（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温 烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2727 提取方法提取方法 n n 异硫氰酸胍热苯酚法异硫氰酸胍热苯酚法 n n Trizol Trizol 法法 n n mRNAmRNA纯化：纯化：3 3 末端末端ploy(A) tailploy(A) tail 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2828 （一）动植物总RNA提取Trizol法 n n 适用范围适用范围: :人类、动物、植物、微生物的组织或培人类、动物、植物、微生物的组织或培 养细菌，养细菌，(mg(mgg)g) n n 优点：优点：无蛋白和无蛋白和DNADNA污染污染 n n 用途：用途： n n NorthernNorthern n n 斑点杂交斑点杂交 n n Poly(A)-mRNAPoly(A)-mRNA分离分离 n n 体外翻译体外翻译 n n RNaseRNase封阻分析封阻分析 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作2929 n n 组织液氮研磨组织液氮研磨 n n 加加TrizolTrizol（1mL Trizol/50-100 mg1mL Trizol/50-100 mg材料）材料） 室温放置5分钟， n n 0.2 mL 0.2 mL氯仿氯仿/1mL Trizol/1mL Trizol n n 离心取上清离心取上清 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3030 n n 0.5 mL 0.5 mL 异丙醇异丙醇/mL Trizol/mL Trizol n 室温放置10 min，离心取沉淀 n 75%乙醇洗沉淀，干燥 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3131 （二）mRNA纯化 原理：原理： n n mRNA 3mRNA 3 末端末端-poly(A)+-poly(A)+ n n oligo(dT)oligo(dT)纤维素纤维素-oligd(T)-oligd(T) n n 高盐缓冲液，高盐缓冲液，mRNAmRNA特异的吸附特异的吸附 n n 低盐浓度或蒸馏水中，低盐浓度或蒸馏水中，mRNAmRNA洗脱洗脱 n n 两次两次oligo(dT) oligo(dT) 纤维素柱，可得到较纯的纤维素柱，可得到较纯的 mRNAmRNA 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3232 （三）植物病毒RNA提取 n n 取提纯的病毒颗粒取提纯的病毒颗粒TMVTMV n n 等体积酚等体积酚/ /氯仿抽提氯仿抽提 n n 取上清取上清 n n 等体积酚等体积酚/ /氯仿抽提氯仿抽提 n n 取上清取上清 n n 等体积氯仿抽提等体积氯仿抽提 n n 乙醇沉淀乙醇沉淀 第三节核酸电泳 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3434 1.基本原理 n n DNADNA或者或者RNARNA中磷酸基团是呈离子态的，中磷酸基团是呈离子态的， 可以说可以说DNADNA和和RNARNA的多核苷酸链可以叫做的多核苷酸链可以叫做 多聚阴离子多聚阴离子，在电场下会向，在电场下会向正极移动正极移动。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3535 2.迁移速率的决定因素 n n DNADNA的分子大小的分子大小 线状双链线状双链DNADNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速 率与率与DNADNA分子量对数成反比分子量对数成反比 n n 琼脂糖浓度琼脂糖浓度 一个给定大小的线状一个给定大小的线状DNADNA分子，其迁移速度在不同浓分子，其迁移速度在不同浓 度的琼脂糖凝胶中各不相同度的琼脂糖凝胶中各不相同 n n DNADNA分子的构象分子的构象 超螺旋超螺旋DNADNA移动移动 环状环状 线状双链线状双链DNADNA 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3636 n n 电源电压电源电压 在低电压时在低电压时, ,线状线状DNADNA片段的迁移速率与所加电压成片段的迁移速率与所加电压成 正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNADNA 片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场 强升高引起的迁移率升高幅度也越大。强升高引起的迁移率升高幅度也越大。 电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围减小 电压不得超过电压不得超过5 5v/cmv/cm。 n n 嵌入染料的存在嵌入染料的存在 EBEB嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的 环状环状DNADNA，使其刚性更强，还会使线状使其刚性更强，还会使线状DNADNA迁移率降迁移率降 低低1515。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3737 n n 离子强度影响离子强度影响 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNADNA的电泳迁移率的电泳迁移率 。在没有离子存在时。在没有离子存在时( (如误用蒸馏水配制凝胶如误用蒸馏水配制凝胶) )，电导率最，电导率最 小，小，DNADNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中( (如误加如误加 1010电泳缓冲液电泳缓冲液) )，则电导很高并明显产热，严重时会引起，则电导很高并明显产热，严重时会引起 凝胶熔化或凝胶熔化或DNADNA变性。变性。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3838 3.电泳缓冲液 n n TAETAE：含含EDTA (pH8.0)EDTA (pH8.0)、Tris-Tris-乙酸乙酸 n n TBETBE：Tris-Tris-硼酸、硼酸、EDTAEDTA n n TPETPE：Tris-Tris-磷酸、磷酸、EDTAEDTA 一般配制成浓缩母液，储于室温。一般配制成浓缩母液，储于室温。 2011-9-242011-9-24基因工程基本操作基因工程基本操作3939 4.琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖琼脂糖 n n 是一种线性多聚化合物，从红色海藻产物琼脂中是一种线性多聚化合物，从红色海藻产物琼