DNA的粗提取与鉴定1.ppt

2 2：如何证明他们是遗传物质？：如何证明他们是遗传物质？ 3 3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 1 1：构成生物体的遗传物质是什么？：构成生物体的遗传物质是什么？ DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 一、基础知识一、基础知识 （一）提取（一）提取DNADNA的的方法方法 1 1、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理 或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子 2 2、生物大分子：、生物大分子：主要指蛋白质、酶和核酸主要指蛋白质、酶和核酸 3 3、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路 利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化 学性质方面的差异，提取学性质方面的差异，提取DNADNA，去除其他成分去除其他成分 4 4、DNADNA的溶解性的溶解性 DNADNA和和蛋白质等其他成分在不同浓度的蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶液中 溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能 使使DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 5 5、讨论：、讨论： 根据根据DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在溶液中的溶解度曲线图，思考在 什么浓度下，什么浓度下， DNADNA的的溶解度最小？溶解度最小？ DNADNA在在NaClNaCl溶溶 液中的溶解度是如何变化的？液中的溶解度是如何变化的？ 在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA的溶解的溶解 度随度随NaClNaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 0.14 mol/Lmol/L时，时，DNADNA溶解度最小；当溶解度最小；当NaClNaCl溶液浓度继续溶液浓度继续 增加时，增加时，DNADNA的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2mol2molL L时，时，DNADNA的的 溶解度最大，浓度为溶解度最大，浓度为 0.14 mol0.14 molL L时，时，DNADNA的溶的溶 解度最低。利用这一原理，可以使解度最低。利用这一原理，可以使DNADNA在盐在盐溶液溶液 中溶解或析出。中溶解或析出。 如何通过控制如何通过控制NaClNaCl溶液的浓度使溶液的浓度使DNADNA在盐溶液中在盐溶液中 溶解或析出？溶解或析出？ 根据根据DNADNA与杂质的溶解度不同分离提取与杂质的溶解度不同分离提取DNADNA NaCI 酒精（体积积分数 为为95%的冷酒精） DNA不溶 蛋白质质 在NaCI从2mol/L逐渐渐稀释释 的过过程中溶解度逐渐渐增大 某些蛋白质质可溶 95%95%的酒精在的酒精在DNADNA提取中的作用：提取中的作用： 1.1.溶解某些蛋白质；溶解某些蛋白质； 2.2.抑制核酸水解酶的活性，防止抑制核酸水解酶的活性，防止DNADNA降解；降解； 3.3.降低分子运动，易于形成沉淀析出；降低分子运动，易于形成沉淀析出； 4.4.低温有利于增加低温有利于增加DNADNA分子的柔韧性，减少断裂分子的柔韧性，减少断裂 。 根据根据DNADNA分子与杂质对酶、高温、洗涤分子与杂质对酶、高温、洗涤剂剂的耐受性不同来的耐受性不同来 分离提取分离提取DNA.DNA. DNADNA蛋白质质 蛋白酶没影响水解 高 温80以上才会变变性6080会变变性 洗涤涤剂剂剂剂没影响 瓦解细细胞膜 （破坏膜中的蛋白质质分子） DNADNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则 可以溶于酒精。利用这一原理，可以将可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNADNA与蛋白与蛋白 质进一步分离质进一步分离 6 6、DNADNA在在酒精溶液中的酒精溶液中的溶解性溶解性 7 7、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNADNA没有影响没有影响 大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA 在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白去除脂质和蛋白 质质, ,但对但对DNADNA没有影响没有影响 8 8、DNADNA的鉴定的鉴定 DNADNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色， 因此，二苯胺可以作为鉴定因此，二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂的试剂 紫外灯照射法紫外灯照射法 A A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的 溴化已锭（溴化已锭（EBEB） B B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上， 再滴一滴再滴一滴EBEB溶液染色溶液染色 C C、将蜡纸放在紫外灯将蜡纸放在紫外灯(260nm)(260nm)下照射（暗室中），下照射（暗室中）， 可见橙红色的荧光可见橙红色的荧光(DNA(DNA的紫外吸收高峰在的紫外吸收高峰在260nm260nm处处) ) 甲基绿甲基绿 （绿色）（绿色） 二、二、DNADNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取（一）实验材料的选取 1.1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动 物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、 在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中 选取选取2 23 3种实验材料）种实验材料） 2.2.原则：凡是含有原则：凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑，但选的生物材料都可以考虑，但选 用用DNADNA含量相对较高的生物组织，成功的可含量相对较高的生物组织，成功的可 能性更大。能性更大。 动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加 入一定量的蒸馏水入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后，同时用玻璃棒搅拌，过滤后 收集滤液即可收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液 1 1、动物细胞、动物细胞 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水 分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅 拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂( (细胞膜和细胞膜和 核膜的破裂核膜的破裂) )，从而释放出，从而释放出DNADNA 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2 2、植物细胞、植物细胞 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于有利于DNADNA的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是NaClNaCl，有有 利于利于DNADNA的溶解的溶解 实例：实例：提取洋葱提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加入时，在切碎的洋葱中加入 一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨， 过滤后收集研磨液过滤后收集研磨液 答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，释放不完全， 提取的提取的DNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝 状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的 影响？影响？ （三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质 讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中能除去在高盐中 不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，能除去析出，能除去 溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与 析出析出DNADNA，就能够除去与就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂溶解度不同的多种杂 质质 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使 提取的提取的DNADNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNADNA和和 蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性， 与与DNADNA分离。分离。 （四）（四） DNADNA的的析出与鉴定析出与鉴定 DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶冷却的酒精溶 液（体积分数为液（体积分数为95 95 ） ，静置，静置2 23min3min，溶液中溶液中 会出现会出现白色丝状物，白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。用玻璃棒用玻璃棒 沿沿一个方向一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面 的水的水 1 1、DNADNA的析出的析出 用冷却的酒精析出用冷却的酒精析出DNADNA 2 2、 DNADNA的鉴定的鉴定 鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一只于两只试管中，其中一只 加入加入DNADNA丝状物，各加入丝状物，各加入二苯胺二苯胺4ml 4ml 试剂。混合试剂。混合 均匀后，将试管置于沸水中加热均匀后，将试管置于沸水中加热5min,5min,待试管冷却待试管冷却 后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有 DNADNA的溶液是否有的溶液是否有蓝色蓝色 （一）案例一：以鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNADNA的粗提取的粗提取 三、实验案例三、实验案例 鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞 作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求 较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长 1 1、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因 鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得 2 2、实验原理、实验原理 DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaCl的浓度的浓度 的变化而改变的。当的变化而改变的。当NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为0.14 0.14 molmolL L时时,DNA,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以的溶解度最低。利用这一原理，可以 使溶解在使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。 DNADNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白 质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一 步提取出含杂质较少的步提取出含杂质较少的DNADNA。 DNADNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此， 二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。 3 3、实验材料和用具：、实验材料和用具： 鸡血细胞液（鸡血细胞液（5 510ml10ml）；）；体积分数为体积分数为95%95%的冷酒精的冷酒精 溶液（实验前置于冰箱内冷却溶液（实验前置于冰箱内冷却24h24h）；）；蒸馏水；质量蒸馏水；质量 浓度为浓度为0.0.g/mlg/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别 为为2mol/L2mol/L和和0.015mol/L0.015mol/L的氯化纳溶液；二苯胺试剂的氯化纳溶液；二苯胺试剂 。铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网。铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网 ；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml100ml，一一 个）；烧杯；（个）；烧杯；（100ml100ml，一个，一个，50ml50ml、500ml500ml各二个各二个 ）；试管（）；试管（20ml20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。二个）；漏斗；试管夹；纱布。 4 4、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为取质量浓度为0.1g/ml0.1g/ml的的柠檬酸钠溶液（抗凝剂柠檬酸钠溶液（抗凝剂 ）100ml100ml，置于置于500ml500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约烧杯中。注入新鲜的鸡血（约 180ml180ml），），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶 液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱 内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血 液倒入离心管内，用液倒入离心管内，用1000r/min1000r/min的离心机离心的离心机离心2min2min， 血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离用吸管除去离 心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。） 过程过程 柠檬酸钠作用：柠檬酸钠作用： 防止血液凝固防止血液凝固 作用机理作用机理 柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的CaCa2+ 2+发生反应，生成柠 发生反应，生成柠 檬酸钙络合物，血浆中游离的檬酸钙络合物，血浆中游离的CaCa2+ 2+大大减少，血 大大减少，血 液就不会凝固液就不会凝固 鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的DNADNA，容易被玻璃容易被玻璃 容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNADNA的损的损 失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 注意事项注意事项 讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNA时，为什么时，为什么除去血液中的除去血液中的 上清液？上清液？ 答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细 胞，离心后除去的上清液是血浆胞，离心后除去的上清液是血浆 5 5、方法步骤、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液5mL5mL10mL10mL，注入到注入到50mL50mL烧杯中烧杯中 。向烧杯中加入蒸馏水。向烧杯中加入蒸馏水20mL20mL，同时用同时用玻璃棒沿一个方向玻璃棒沿一个方向快快 速搅拌速搅拌5min5min，使血细胞加速破裂。使血细胞加速破裂。然后，用放有然后，用放有3 34 4层层纱纱 布的漏斗布的漏斗将血细胞液过滤至将血细胞液过滤至1000mL1000mL的烧杯中。取其滤液。的烧杯中。取其滤液。 提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质 鸡血细胞液鸡血细胞液10mL10mL， 注入到注入到50mL50mL烧杯中烧杯中 加入蒸馏水加入蒸馏水20mL20mL 玻璃棒沿一个方向快速搅拌玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min5min 用用3 34 4层纱布的过滤，取其滤液备用。层纱布的过滤，取其滤液备用。 讨论：讨论： 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸 水以至胀破水以至胀破 （1 1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞 会有什么变化？会有什么变化？ （2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。 注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太 猛，防止打碎猛，防止打碎DNADNA （3 3）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？得到的是什么？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是 与蛋白质等物质结合在一起的与蛋白质等物质结合在一起的DNADNA 溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 将物质的量浓度为将物质的量浓度为 2mol2mol的氯化钠的溶液的氯化钠的溶液40mL40mL加加 入到滤液中，并用入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌玻璃棒沿一个方向搅拌1min1min，使使 其混合均匀，这时其混合均匀，这时DNADNA在溶液中呈溶解状态在溶液中呈溶解状态 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不玻璃棒沿一个方向不 停地轻轻搅拌，停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状 物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会 越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶 液中氯化钠的物质的量浓度相当于液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol0.14 molL L） 析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物 讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低降低NaClNaCl溶液浓度到使溶液浓度到使DNADNA溶解度最低点，溶解度最低点， 使使DNADNA从从NaClNaCl溶液中析出溶液中析出 将溶液中的将溶液中的DNADNA与其他杂质分离，这一步骤是实与其他杂质分离，这一步骤是实 验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水， 并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNADNA 分子的附着和缠绕分子的附着和缠绕 注意事项：注意事项： 滤取含滤取含DNADNA的粘稠物的粘稠物 用放有用放有多层纱布多层纱布的漏斗，过滤步骤的漏斗，过滤步骤3 3中的溶液至中的溶液至 1000mL1000mL的烧杯中，含的烧杯中，含DNADNA的的粘稠物被留在纱布上粘稠物被留在纱布上 将将DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解 取取1 1个个50mL50mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的 量浓度为量浓度为2mol2molL L的溶液的溶液20mL20mL。用钝头镊子将纱用钝头镊子将纱 布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒沿一个用玻璃棒沿一个 方向不停地搅拌方向不停地搅拌3min3min，使粘稠物尽可能多地溶解使粘稠物尽可能多地溶解 于溶液中于溶液中 注入氯化钠浓度为注入氯化钠浓度为2mol2molL L的溶液的溶液20mL20mL 过滤含有过滤含有DNADNA的氯化钠溶液的氯化钠溶液 取取1 1个个100 100 mLmL烧杯，用放有烧杯，用放有两层纱布两层纱布的漏斗过滤的漏斗过滤 步骤步骤5 5中的溶液。取其滤液，中的溶液。取其滤液，DNADNA溶于滤液中溶于滤液中 提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNADNA 在上述滤过的溶液中，加入在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为冷却的、酒精的体积分数为9595的的 溶液溶液50mL50mL（使用冷却的酒精，对使用冷却的酒精，对DNADNA的凝集效果较佳），并的凝集效果较佳），并 用用玻璃棒搅拌，玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒 将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要 成分就是成分就是DNADNA。注意观察丝状物是什么颜色的。注意观察丝状物是什么颜色的。 答：因为答：因为DNADNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在 酒精中，使含杂质较少的酒精中，使含杂质较少的DNADNA丝状物可以析出丝状物可以析出, , 悬浮于溶液中悬浮于溶液中 讨论：讨论： （2 2）观察丝状物呈什么颜色？）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色答：白色 （1 1）为什么要加）为什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？ 取两支取两支20mL20mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为2mol2mol L L的溶液的溶液5 5 mLmL，将丝状物放入其中一支试管中，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌用玻璃棒搅拌 ，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL4mL的二苯胺试的二苯胺试 剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5min5min，待试管冷却待试管冷却 后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 DNADNA的鉴定的鉴定 讨论：讨论： 有丝状物的试管变成蓝色，另外试管还是原来颜色有丝状物的试管变成蓝色，另外试管还是原来颜色 （2 2）这一鉴定结果说明什么问题？）这一鉴定结果说明什么问题？ （1 1）比较试管中溶液的颜色有什么不同？）比较试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是答：提取出的丝状物是DNADNA （3 3） DNADNA的直径约为的直径约为2nm 2nm ，实验中出现的丝状物的，实验中出现的丝状物的 粗细是否表示粗细是否表示1 1个个DNADNA分子直径的大小？分子直径的大小？ 答：答： DNADNA分子直径只有分子直径只有2nm2nm。丝状物是多个丝状物是多个DNADNA 子聚在一起形成的子聚在一起形成的 答：整个实验共答：整个实验共“两次两次蒸馏水，蒸馏水，三次过滤，三次过滤， 两次析出，五次搅拌两次析出，五次搅拌” 6 6、讨论：讨论： 两次两次蒸馏水蒸馏水 第一次：第一次：细胞吸水胀破细胞吸水胀破 第一步第一步 第二次：使第二次：使DNADNA黏稠物析出黏稠物析出 第三步第三步 （1 1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过 滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？ 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关 ，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层 纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为 1 12 2层层 三次过滤三次过滤 第一次：第一次： DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步 第二次：第二次： DNADNA被被留在纱布上留在纱布上 第四步第四步 第三次：第三次： DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步 两次析出两次析出 第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI 溶液含杂质多溶液含杂质多 第三步第三步 第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精 第七步第七步 五次搅拌：五次搅拌： 其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌， 在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯 底部，这样才能保证得到完整的底部，这样才能保证得到完整的DNADNA （2 2）为什么反复地溶解与析出）为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质？能够去除杂质？ 答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中能除去在高盐中 不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，能除去析出，能除去 溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与 析出析出DNADNA，就能够除去与就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂溶解度不同的多种杂 质质 （二）（二）案例二：以菜花为实验材料进行案例二：以菜花为实验材料进行DNADNA的粗提取的粗提取 1 1、课前准备、课前准备 将新鲜菜花和体积分数为将新鲜菜花和体积分数为9595的乙醇溶液放入冰的乙醇溶液放入冰 箱冷冻室箱冷冻室24 h24 h 2 2、提取、提取DNADNA的具体步骤的具体步骤 取材：称取取材：称取30 g30 g菜花，去梗取花，切碎菜花，去梗取花，切碎 研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 10 mLmL研磨液，研磨液， 充分研磨充分研磨10 min 10 min 研磨液的配制方法如下：将研磨液的配制方法如下：将10.1g 10.1g TrisTris加入到加入到50 50 mLmL蒸馏水蒸馏水 中，使其溶解，然后，用中，使其溶解，然后，用2moL/L2moL/L的的HClHCl溶液调节溶液调节pHpH至至8.08.0 ，再加入，再加入8.76g 8.76g NaClNaCl 、37.2g EDTA 37.2g EDTA 、20g SDS20g SDS。待上述待上述 药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1000 1000 mLmL Tris/HClTris/HCl: :提供缓冲体系，提供缓冲体系，DNADNA在这一体系中呈稳定态在这一体系中呈稳定态 （TrisTris为三羟甲基氨基甲烷）为三羟甲基氨基甲烷） EDTAEDTA（乙二胺四乙酸二钠）乙二胺四乙酸二钠）: :是是DNADNA酶的抑制剂，可以酶的抑制剂，可以 防止细胞破碎后防止细胞破碎后DNADNA酶降解酶降解DNADNA SDSSDS（十二烷基硫酸钠）：可以使蛋白质变性，与十二烷基硫酸钠）：可以使蛋白质变性，与DNADNA分离分离 过滤：过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤 到烧杯中到烧杯中( (有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中 进行离心，用进行离心，用1000 r/min1000 r/min的转速，离心的转速，离心2 25 min5 min， 取上清液放入烧杯中取上清液放入烧杯中) )。在。在44冰箱中放置几分钟后，冰箱中放置几分钟后， 再取上清液再取上清液 沉淀：沉淀：将一倍体积的上