急性镉中毒的肝脏损伤机制及金属硫蛋白的保护作用

精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 1 / 13 急性镉中毒的肝脏损伤机制及金属硫蛋白的保护作用 金慧英 胡惠民 周雍 李法卿 谭维国 李素芹 陈华标 u et 要 目的 研究脂质过氧化和自由基在急性镉中毒性肝脏损伤中的作用及金属硫蛋白（ 保护作用。方法 测定镉染毒后不同时间大鼠肝脏的 脂质过氧化产物丙 二醛（ 含量及抗氧化酶的活力，观察肝细胞超微结构的损伤，进行自由基 (定位。结果 大鼠急性染镉后P );抗氧化酶活力在 3 小时显著受抑 (P ), 6 小时明显恢复； 3 小时即有增加， 6 小时达正常组的倍 ;肝细胞膜上 阳性沉积物 3 小时最严重， 24小时已消失，但此时细胞损伤最严重， 48小时肝细胞再生、修复。结论 镉可引起肝脏脂质过氧化及自由基的大量产生，抑制抗氧化酶的活力，造成细胞的严重损伤。 质过氧化的减轻、自由基的清除及损伤的肝细胞的保 护可能有重要作用。 关键词 急性镉中毒 脂质过氧化 金属硫蛋白 大鼠肝脏 of in 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 2 / 13 of et 10002 o of by of T) in T (of in at ,of (by DA ) of ) h h,as as 品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 3 / 13 of on h,24 h at 8 h is to in of of of of at 属硫蛋白 (T)是富含巯基的小分精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 4 / 13 子蛋白质，对金属具有高亲合力。 此，我们着重探讨脂质过氧化及自由基损伤、抗氧化防御系统和 镉中毒的防治以及抗氧化剂 临床应用奠定基础。 材料与方法 一、材料 康雄性 重 240 300 g，第二军医大学实验动物中心提供。 酸钠 (公司，德国 )，二硫二硝基苯甲酸 (还原型谷胱甘肽 (司，德国 )，丙二醛 (司，美国 )，其余试剂均为国产分析纯。00 透射电镜、 8300 原子吸收光谱仪、温高速离心机 (日立公司 )， 550 酶标仪（美国）， 721 分光光度仪 (上海第三分析仪器厂 )。 二、方法 和分组：健康 6只随机分为 7 组，每组 8 只： 1 组为正常对照组， 6 组为实验组。实验组按每公斤体重 计尾静脉注射 照组注射生理盐水。于注射后、 1、 3、 6、 24、 48小时取肝组织 , 加 %蔗糖溶液 ,匀浆， 4 、 15 000 g 离心 30 分钟，取上清测定精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 5 / 13 超氧化物岐化酶 (谷胱甘肽过氧化物酶 (过氧化氢酶 (力，取匀浆测定 量。取 1 g 肝组织测定 (1)镉浓度：原子吸收光谱法。(2) 1。 (3) 力：邻苯三酚自氧化反应终止法 2。 (4)力：催化 化法 3。 (5)色法 4。 (6)5。 (7)蛋白含量：染料法。 (8)细胞损伤及 :大鼠肝门静脉灌注 1 的 衡液，继而灌注戊二醛固定液，灌流压力保持在 75 肝组织切成1 块，常规固定、脱水包埋、切片、铅 镜观察。 果采用 t 检验比较组间的差异。 结 果 急性染毒后大鼠肝脏各项 指标的变化见表 1。 2细胞化学定位（图 1 8）依981)的观点，将正常细胞从损伤到坏死的演变分为形态正常（第 1 阶段）、可逆性改变（ 2 4 阶段）和不可逆改变（ 5 7 阶段）期。计数每个网孔内各期细胞数并观察性沉淀 ,结果见表 2。 表 1 急性镉染毒后不同时间大鼠肝脏各项指标的变化精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 6 / 13 (s,n=8) of d,AT T in of at d s,n=8) (g/mg (mg (U/mg (U/g (K/mg (g/g 染镉组 Cd h * * * * * h * * * * * h * * * * * * h * * * * h * * * * * h * * * * * 对照组 与对照组比较， *P， *P *P ,*P vs 2 急性镉中毒大鼠肝细胞损伤及 2品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 7 / 13 by in d 镉后时间 d(h) 形态正常细胞数 ( 可逆改变细胞数 ( 不可逆改变细 胞数 ( 细胞总数 ( 淀 23 23 - 18 15 33 + 5 12 15 32 + 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 8 / 13 8 16 24 + 4 24 28 - 25 3 28 - 图 1 正常肝细胞：糖原颗粒聚集 ,粗面内质网 (富，线粒体嵴清晰 10 500; 图 2 染镉后 30分钟 :肝细胞 结构正常，未见 10 500; 图 3 染镉后 1 小时： 糖体已大部脱落，线粒体轻度肿胀；可见少量 内皮细胞 (上 12 000; 图 4 染镉后 3 小时： 粒体膨胀，内外膜模糊不清；见大量 积在 s 细胞 (K)膜上 15 000; 图 5 染镉后 6 小时 :处于不可逆改变状态的肝细胞胞浆清亮，少有细胞器；仍 可见少量 5 500; 图 6 染镉后 24 小时 :可见破碎的 肝细胞，胞内膜结构大多已不清晰；未见 的沉积 7 000 品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 9 / 13 R) 10 500; 30 no of 10 500; 1 h R on of C) C) 12 000; 3 h R a on C,EC s C) 15 000; 6 h in a on C C 5 500; 24 h 品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 10 / 13 7 000 图 7 染镉后 48 小时：核已固缩的 增生的成纤维细胞(F) ，无 沉 积 5 500 48 h r C ) 5 500 图 8 染镉后 48 小时：正常形态的肝细胞无 4 200 48 h in 4 200 讨 论 以上结果表明 :大鼠尾静脉注射镉后，镉很快聚集在肝脏，肝脏是镉急性中毒损 伤的主要靶器官。镉作为过渡金属可通过 2用于质膜，造成膜的脂质过氧化。同时，镉直接与抗氧化酶中的金属相互作用，抑制酶的活力，使自由基的清除受到影响。自由基作用于不饱和脂肪酸，加重了膜的脂质过氧化，因而在镉中毒后 质过氧化和自由基可造成细胞的结构和功能的改变，使细胞损伤进行性加重，是镉中毒损伤的主要因素 6。 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 11 / 13 金属硫蛋白是小分子可诱导蛋白，含有 20 个半胱氨酸残基，可被镉、汞、锌等二价金属诱导。由于镉的诱导，在染镉后 3 小时，已有 合 成， 镉的亲和力升高，逐步增加细胞内结合镉的浓度，减少游离镉的浓度，使镉不能作用于其靶分子，从而减轻镉对抗氧化酶的抑制，加快自由基的清除，抑制脂质过氧化；同时 含巯基的特殊结构使其具有多种生物学功能，包括自由基特别是羟自由基的清除以及抑制膜的脂质过氧化 7。所以，随着 合成增加， 量的下降非常显著，肝细胞膜上的自由基 2性沉积物也逐步减少，最终减轻了镉对肝细胞的损伤。肝细胞在染毒后 24小时大量破碎 ,而 48小时肝内 正常细胞又占多数，肝血窦重新被内皮细胞包围，即 中毒剂量的镉引 起的肝脏损伤有保护作用。 总之，镉急性中毒后，自由基和脂质过氧化的产生和减少，肝细胞损伤的出现和修复，抗氧化酶 (活力下降和恢复及 彼此之间有着密切的消长时相关系。因此 ,可以认为自由基和脂质过氧化是镉损伤的主要因素。同时在镉中毒后抗氧化酶和 协同作用的方式互相补充发挥了抗氧化的功能，减轻了细胞损伤。本实验较系统地研究了急性镉中毒后 脂质过氧化、自由基损伤及抗氧化酶变化相互间的伴随关系，有利于镉中毒的防治和 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 12 / 13 参 考 文 献 1 李建武 ,吴中立 第二军医大学学报 ,1987,8:371 373. 2 静天玉 ,赵晓瑜 生物化学与生物物理进展 ,1995,22:84 86. 3 唐琴华 ,徐晓琴 ,黄履成 临床检验杂志