乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究

精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 1 / 10 乙型、丙型、庚型肝炎病毒多重感染研究 【摘要】 目的 探讨庚型肝炎感染患者是否存在双重感染和多重感染。方 法 应用庚型肝炎病毒 (列稀释的 质控血清及 比样品中 对 90 例丙型肝炎病毒 (阳性和 12 例乙型肝炎、丙型肝炎双重感染献血员进行了 检测。结果 列稀释质控血清 1010为阳性； 10阴性。 2 份品均为 性 。 90 例 性样品中， 8 例 性 (%)； 12 例乙、丙 双重感染者中 4 例 (4/12)性。结论 不仅存在 重感染，也存在 多重感染。 【关键词】 肝炎病毒，庚型 肝炎病毒，丙型 逆转录聚合酶链反应 , C u et s 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 2 / 10 00044 【 o if in in (to NA in of o. 0 C 2 of NA at 00at 0-6 0in o. in of 0 NA in of 2 CV 品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 3 / 10 BV 【 从 1995 年美国 及 证实存在庚型肝炎病毒 C 和 来，引起了广大研究人员的极大重视。日本、西欧、澳大利亚、中国 等 均有庚型肝炎病毒的存在。通过基因序列分析研究证实， 者具有 高度的同源性，为庚型肝炎病毒的不同株，一些流行病研究资料也证实，庚型肝 炎病毒与丙型肝炎病毒具有相同的传播方式。本文对 90 例性的患者血 清及 10 例抗 性的献血员进行了双重感染研究，结果如下： 材料与方法 一、材料 90 例 性样品来自本院的门诊病人。 控血清来自我国河北地区 性献血员，并经精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 4 / 10 日本自治医 科大学证实 性。 参照 血清： 07648 52953： 236 血清均由 送。 剂盒来自本研究所。 剂盒由本研究所生产， 外引物序列按文献报道合 成，内引物正链 5 ，负链 5 。 剂盒由本研究所提供，按文献方法进行。 免疫 剂盒由本研究所提供，按文献报道方法进行。 剂盒上海科华生物公司产品。 、抗 剂盒为本研究所产品。 二、方法 用异硫氢酸胍裂解法， 取方法及序如 下： (1)提取 血清 20 l 加裂解液 (含异硫氢酸胍 )80 l ，混匀后置室温 5 分钟，加入氯仿：异戊醇 (491)40 l ，稀释液 (含0 l ， 10 000 r/精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 5 / 10 离心 10 分钟，吸取上清液 100 l ，加入等体积异丙醇 (或保存 )， 12 000 r/心 15 分钟，吸去上清，沉淀物含 (2)逆转录：在上述 含 管内加入逆转录反应混合液 (含 物 )10 l ， 70 1 2 分钟后，加入 转录酶 3 4 个单位， 42 40 分钟后即可进行 增。 (3)第一次 逆转录原管内加入第一次 应混合液 (含缓冲液、引物 及 1 单位 )20 l ，石蜡油封顶，超薄管扩增程序 94 30 秒， 55 30 秒， 72 45 秒 35 个循环。 (4)第二次 第一次 物 3 l ，加第二次 应液 (含缓冲液引物 1 单位 )30 同一条件下扩增 35 个循环。 物设计与操作方法按文献方法进行。 产物的检测：采用聚丙烯酰胺 (泳技术检测 物， 第 一次 物 380 二次 物为 210 第一次 物 158 有 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 6 / 10 ，及第二次 物 83 有 为 结果 例 性患者中 测结果： 90 例 例 性，阳性率为 %。 控血清灵敏度检测结果：取参照血清 100 l 加入无菌小牛血 清 900 l 定为 10次稀释至 10果表明，原血清 1010强阳性， 10阳性， 10 性 (附图 )。 参照血清 测结果：应用 套式 术检测， 两份样品 52953236 及 07648为阳性。 M 分子 量标志物： 7 分别为原血清、 10010 10101011 为 性患者血清样品电泳条件为 6%聚丙烯酰胺凝胶、电极液 图 控血清灵敏度检测结果 例 性的携带者中 测结果： 2、3、 4、 5、 7、 10、 11、 12 均为 一次 性，其中 1、 9精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 7 / 10 为第二次 性， 6、 8 为二次 为阴性。 5端非编码区检测结果， V 及 两者同时阳性为判断标准 (附表 )。 附表 12 例 性携带者 测结果 样品号 - - 1 + - + + + + - 2 + + - + + + - 3 + + - + + + - 4 + + - + + - - 5 + + - + + + - 6 + - + - + + - 7 + + - + + + + 8 + - + - + + - 9 + + - + + + + 10 + + - + + + + 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 8 / 10 11 + + - + + + + 12 + - 未测 + + + - 讨论 本文应用 套式 术检测了美国 品， 并检测经日本证实为 性样品 (为本研究所的质控血清 )，结果表明在 83均有较强的 ，表明本试剂盒采用的 套式 有一定优势， 不仅能检出美国的 ，同时也 能检出经日本检出的中国珠。 90 例 染患者的 测结果表明，有 结果表明，在 12 例 重感染的献血员样品中检出性 4 例， 均未检测到 示至少存在 重感染，这 种感染和多重感染是否对肝病的慢性化、肝硬化及肝癌有促进作用，有待进一 步研究证实。 作者单位：北京医科大学人民医院肝病研究所 100044 精品文档 2016 全新精品资料 全程指导写作 独家原创 9 / 10 参考文献 1N, P, J, et of 1995, 1:564 2, , Y, et a 1996, 271:505 3 陈红松，王宇，魏来，等 北京 医科大学学报， 1996， 28： 401. 4 杜绍财，陶其敏，朱凌，等 量的动态观 察