酶工程终结版名词解释.doc

酶:有催化功能的生物大分子 分为:蛋白酶(P酶)和核酸类酶(R酶)(主要由RNA组成)酶的特点:催化效率高、专一性强、作用条件温和酶工程主要内容：微生物细胞发酵产酶、动植物细胞培养产酶、酶的提取与分离纯化，酶分子的修饰，酶，细胞和原生质体固定化、酶的非水相催化、酶反应器和酶的应用酶的催化效率比非酶催化反应高1071013倍酶催化作用的影响因素：底物浓度、酶浓度、温度、Ph值、激活剂浓度、抑制剂浓度酶在60度以上易失活常见激活剂：ca、mg 、co、zn 、mn 、cl（淀粉酶），钴离子和镁离子是葡萄糖异构酶的激活剂酶的命名：国际酶学委员会ICE ：推荐名 和 系统名推荐名：底物名+催化反应类型+酶 （水解酶类可省略反应类型名，只在底物后加酶字即可）系统名：作用底物+酶的作用基团+催化反应类型按酶的催化作用类型将蛋白酶分为6大类：氧化还原酶，转移酶，水解酶，裂解酶，异构酶，合成酶将R酶分为：剪切酶、剪接酶、多功能酶还可以由酶的底物是RNA分子还是其他分子，可将R酶分为分子内催化和分子间催化酶活力：是指在一定条件下，酶所催化的反应初速度。酶催化反应速度，通常用单位时间t内底物S的减少量或产物P的增加量来表示1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定的条件下（温度可采用25摄氏度，pH值等条件均采用最适条件），酶1min催化1umol的底物转化为产物的酶量定义为1个酶活力单位，这个单位称为国际单位（IU）。国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（kat），在特定条件下酶1s催化1mol底物转化为产物的酶量定义为1kat酶的比活力，是指在特定的条件下，单位重量(mg)蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。固定化酶：与水不溶性载体结合，在一定的空间范围内起催化作用的酶酶的提取：在一定条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程。酶提取注意事项：1、目标酶分子的特性及其物理、化学特性，2、酶分子和杂质的主要性质差异，3、酶的使用目的和要求，4技术实施的的难易程度，5、分离成本的高低，6、是否会造成环境污染。第二章酶的发酵生产：经过预先设计，通过人工操作，利用微生物的生命活动获得所需酶的技术过程优良产酶菌特点：1、酶产量高，2、产酶稳定性好，3、容易培养和管理，4、利于酶的分离纯化，5、安全可靠，无毒性发酵方式：固体培养发酵，液体深层发酵，固定化微生物细胞发酵，固定化微生物原生质体发酵分解代谢物阻遏调节：某些物质经过分解代谢产生的物质阻遏某些酶（诱导酶）生物合成的现象P33看酶生物合成的诱导作用：加入某些物质使酶的生物合成开始或加速进行的现象。（一种酶有多种诱导物）酶生物合成的反馈阻遏作用：酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的现象酶生物合成的模式：同步合成型，延期合成型，中期合成型，滞后合成型P36看发酵工艺条件及其控制：1、细胞活化与扩大培养，2、培养基的配制，3、pH的调节，4、温度的调节控制，5、溶解氧的调节控制，6、提高产酶措施（添加诱导物，控制阻遏物的浓度，添加表面活性剂（增加细胞的通透性，有利于胞外酶的分泌），添加产酶促进剂）综述：酶所对应的mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在是影响酶生物合成模式的主要因素。其中mRNA稳定性好的，可以在细胞生长进入平衡期以后，继续合成该酶，mRNA稳定性差的，就随着细胞生长进入平衡期而停止酶的生物合成；不受培养基中存在的某些阻遏物影响的，可伴随细胞生长而开始酶的合成，受培养基中某些物质阻遏的，则要在细胞生长一段时间后或进入平衡期后，才开始合成并大量积累。最理想的合成模式是延续合成型原生质体由于去掉了细胞壁这一扩散屏障，有利于细胞内物质透过细胞膜分泌到细胞外，可以用于胞内酶等胞内产物的生产。第三章特点：细胞体积大，周期长，剪切力敏感，回收率高，培养条件复杂 动物细胞培养：血清，co2 ph 贴壁生长 双抗（青霉素，链霉素）动物细胞培养基：氨基酸，维生素（血清），无机盐（血清），葡萄糖，激素（血清），生长因子（血清）植物细胞培养：激素，蔗糖动物细胞培养方式：悬浮培养，贴壁培养，微载体培养 动物细胞培养过程：用胰蛋白酶消化处理，分散成悬浮细胞，接入适宜的培养液中，在人工控制条件的反应器中进行细胞悬浮培养或者贴壁培养，培养完成后，收集培养液，分离纯化产物培养工艺及其控制：1、动物细胞培养基的组成成分，2、动物细胞培养基的配制，3、温度控制（36.5度），4、pH7.07.6（co2和na2co3为缓冲系统），5、渗透压的控制（700850kPa），6、溶解氧的控制（通入混合气体由空气、氧气、氮气、co2组成）（co2兼有供氧调节和调节pH双重作用）第四章 酶的提取与分离纯化是指将酶从细胞或其他含酶原料中提取出来，再与杂质分开，而获得所要求的酶制品的技术过程，主要包括细胞破碎、提取、离心分离、过滤与膜分离、沉淀分离、层析分离、电泳分离、萃取分离、浓缩、干燥、结晶等。细胞破碎的方法可分为机械破碎、物理破碎、化学破碎和酶促破碎法。酶的提取是指在一定条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程，也称酶的抽提。酶的主要提取方法：盐溶液提取 0.020.5mol/l的盐溶液 提取在低盐溶液中溶解度较大的酶酸溶液提取 pH26的水溶液 提取在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性好的酶碱溶液提取 pH812的水溶液 提取在稀碱溶液中溶解度大，且稳定性好的酶有机溶剂提取 可与水混溶的有机溶剂 提取与脂质结合牢固的或含有较多非极性基团的酶沉淀分离的主要方法有盐析沉淀法、等电点沉淀法和有机溶剂沉淀法，复合沉淀法，选择性变性沉淀法盐析沉淀法简称盐析法，是利用不同蛋白质在不同盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶溶液中添加一定浓度的中性盐，是酶活杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离的过程。离心的方法主要有差速离心：采用不同离心速度和离心时间，使不同沉降速度的颗粒分批分离的方法密度梯度离心：样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离的一种区带分离方法（密度梯度离心+离心力+时间=等密度梯度离心）等密度离心：当欲分离的颗粒的密度范围在离心介质的密度范围内时，在离心力的作用下，不同浮力密度的颗粒或向下沉降，或向上漂浮，只要时间足够长，就可以分离（介质铯盐）过滤：借助于过滤介质将大小不同，形状不同的物质分离的技术过程类别截留的颗粒大小截留的主要物质过滤介质粗滤2m酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞、固形物等滤纸、滤布、纤维多孔陶瓷、烧结金属等微滤0.22m细菌、灰尘等微滤膜、微孔陶瓷等超滤2200nm病毒、生物大分子等超滤膜反渗透2nm生物小分子、盐、离子反渗透膜层析分离方法吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离分配层析 利用各组分在两相中的分配系数不同,而使个组分分离离子交换层析 利用离子交换剂上的可解离集团对各种离子的亲和力不同而达到分离目的凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相,利用流动相中所含各种组分的相对分子量不同而分离之亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力,使生物分子分离纯化层析聚焦 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起,实现组分分离凝胶层析是指以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的性对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。凝胶层析：凝胶过滤，分子排阻层析，分子筛层析。指以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子量不同而达到物质分离的技术亲和层析：利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化的技术常用层析方法：吸附层析（吸附解吸附），分配层析，离子交换层析，凝胶层析，亲和层析带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。常用的有琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳，等电聚焦电泳又称为双向电泳电泳分类：纸电泳，薄层电泳，薄膜电泳，凝胶电泳，自由电泳，等电聚焦电泳凝胶电泳：以各种具有网络状结构的多孔凝胶为支持体的电泳技术（同时有电泳和分子筛作用）PAGE 催化剂可用硫酸铵和四甲基乙二胺（TEMED）为化学聚合催化剂；可用核黄素为光聚合催化剂等点聚焦电泳：优点：分辨率高，时间愈长分离带越窄，加样点可以不固定，分离很低浓度物质，可以很准确的测定组分的等电点缺点：电泳过程要用无机盐溶液，可能会使一些酶和蛋白质沉淀，对某些在等电点溶解度低或稳定性不好的组分不适用萃取分离是利用物质在两相中的溶解度不同而使其分离的技术酶的干燥方法:真空干燥,冷冻干燥,喷雾干燥,气流干燥,吸附干燥真空干燥:在与真空系统相连接的密闭干燥器中,一边抽真空一边加热,使酶液在较低温度条件下蒸发干燥电的过程.在真空泵之前要设置水蒸气凝结收集器,以免汽化产生的水蒸气进入真空泵,酶液真空干燥的温度一般控制在60度以下冷冻干燥:先将酶液降温到冰点以下,使之凝结成固态,然后在低温下抽真空,使冰直接升华为气体,而得到干燥的酶制剂.要求得到的酶的质量较高,结构保持完整,活力损失少,但成本较高,特别适用于对热非常敏感而价值较高的酶类的干燥第五章 酶的分子修饰通过各种方法是酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的催化特性的技术过程称为酶分子修饰。作用：改善稳定性，消除抗原性，提高催化效率，降低反应条件要求方法：金属离子置换修饰（一般都是二价金属离子，激活剂），大分子结合修饰（在酶表面加保护膜，修饰其抗原性），侧链基团修饰，肽链有限水解修饰，核苷酸链有限水解修饰，氨基酸置换修饰，核苷酸置换修饰，酶分子的物理修饰。肽链有限水解修饰结果：1、若引起酶活性中心的破坏，酶将丧失其催化功能，用于探测酶活性中心的位置，2、若仍有酶活性中心构象，其催化功能不变，但其抗原性将发生改变，可用于药用，3、若主链断裂有利于酶活性中心的形成，则可提高酶活力。氨基酸定点突变技术：在DNA序列上的某一点进行碱基的改变从而或得突变基因的操作技术。第六章固定化酶是指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，具有提高酶的催化效率、增加稳定性、可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显著优点。酶的固定化方法主要有吸附法、包埋法、结合法（离子键结合法，共价键结合法EDC结合法）、交联法和热处理法等。细胞固定化的方法可分为吸附法和包埋法两类。固定化原生质体：固定在载体上并在一定空间范围内进行新陈代谢的原生质体原生质体固定化：通过包埋固定化等方法，将原生质体固定在载体上制备固定化原生质体的过程固定化原生质体的应用：一方面保持了细胞原有的新陈代谢特性，可以照常产生各种代谢物，另一方面又除去了细胞壁的屏障，胞内产物分泌到胞外，利于发酵物的提取第七章 酶在非水介质中的催化作用称为酶的非水相催化。酶的非水相催化是通过改变反应介质，影响酶的表面结构和活性中心，从而改变酶的催化特性。有机介质中的酶催化：酶在含有一定量水的有机溶剂中，进行的催化反应有机介质反应体系：1、微水介质体系，2、与水溶性有机溶剂组成的均一体系，3与水不溶的有机溶剂组成的两相或多相体系酶在有机介质中起催化作用时，由于有机介质的极性与水有极大差别，对酶的表面结构，活性中心的结合部位和底物性质都会产生一定影响，从而影响酶的底物特异性、立体选择性、区域选择性、键选择性和热稳定性等，从而显示出与水相介质中不同的催化特性。如：底物专一性，对映体选择性，区域选择性，键选择性，热稳定性，pH值特性必须水是维持酶分子结构中氢键，盐键等副键所必须的，这些又是酶空间结构的主要稳定因素，故酶一旦失去必须水，就会死去催化功能酶非水相催化的应用：手性药物的拆分手性高分子聚合物的制备酚树脂的合成导电有机聚合物的合成发光有机聚合物的合成食品添加剂的生产生物柴油的生产多肽的合成甾体转化。第八章定向进化:模拟自然进化过程,进行人工随机突变,并在特定的环境条件下进行选择,使进化朝着人们所需要的方向发展的技术过程.酶分子定向进化:简称酶定向进化,是模拟自然进化过程,在体外进行酶基因的人工随机突变,建立突变基因文库,在人工控制的特殊环境下,定向选择得到具有优良催化特性的酶的突变体的技术过程.酶定向进化的基本过程包括随机突变,构建突变基因文库,定向选择等步骤.体外随机突变的技术多种多样,主要有易错pcr技术,dna重排技术,基因家族重排技术.酶定向进化的特点:适应面广,目的显著,效果显著.易错pcr技术是从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程.Dna重排技术又称dna改组技术,是从正突变基因文库中分离得到的同源dna,用酶切割成随即片段,经过不加引物的多次pcr循环,使dna的碱基序列重新排布而引起基因突变的技术过程.基因家族重排技术又称基因家族改组技术,是从基因家族的若干同源基因出发,用酶切割成随机片段,不加引物的多次pcr循环,使dna的碱基序列发生重排而引起的基因突变技术.酶定向进化的应用,a提高酶的催化效率b增加酶的稳定性c改变酶的底物特异性第九章酶反应器：用于酶进行催化反应的容器及其附属设备主要有：搅拌罐式反应器STR，鼓泡式反应器BCR，填充床式反应器PCR，流化床式反应器FBR，膜反应器MR酶反应器操作方式：分批式反应，连续式反应，流加分批式反应填充床式反应器,是将固定化酶堆叠在反应器中进行催化反应的一类反应器.填充式反应器中的固定化酶堆叠在一起,固定不动,底物溶液按照一定的方向以一定的速度流过反应器,通过底物溶液的流动,实现物质的传递和混合.其优点是设备简单,操作简便,单位体积反映床的酶固定化密度大,可以提高酶催化反应的速度.流化床反应器,是通过流体的流动使固定化酶颗粒在悬浮翻动状态下进行催化反应的一类反应器,是一种适用于固定化酶进行连续催化反应的反应器.流化床反应器在进行催化反应时,固定化颗粒置于反应器内,底物溶液以一定的速度连续由下而上流过反应器,同时反应液连续的排出,固定化颗粒不断的在悬浮翻动状态下进行催化反应.其优点是有混合均匀，传质和传热效果好，温度和pH的调节控制较易，不易堵塞，对粘度大的反应液也能进行催化反应，缺点：由于固定化酶处于悬浮翻动中，流体产生的剪切力以及固定化酶的碰撞会使固定化酶颗粒受到破坏，参数比较复杂，放大比较困难酶反应器的选择：1、根据酶的应用形式选择反应器，2、根据酶反应动力学性质选择反应器，3、根据底物或产物的理化性质选择反应器根据酶的应用形式选择反应器,游离酶反应器的选择a游离酶催化反应最常用的反应器是搅拌罐反应器.b对于有气体参与的酶催化反应,应采用鼓气式反应器.c对于某些价格较高的酶由于游离酶与反应产物混合在一起,为了使酶能够回收,可以采用游离酶膜反应器.酶反应器操作条件的确定及其调控：温度、pH、底物浓度、酶浓度、反应液混合、流速的确定与调控第十章测定转氨酶（谷丙GPT、谷草GOT）来诊断肝病，心肌梗死等，其酶活力上升葡萄糖氧化酶 测定的物质是葡萄糖,用途测定血糖,尿糖,诊断糖尿病蛋白酶可以作为消化剂,消炎剂,经静脉注射可以治疗高血压.溶菌酶具有抗菌消炎阵痛的作用,主要是从蛋清和植物以及微生物中分离得到.作用于细胞壁可以使病原菌,腐败性细菌等溶解死灭,对抗生素有耐药性的细菌同样起溶菌作用,具有显著治疗而对人体的副作用小,是一种较为理想的药用酶,临床上用于治疗各种炎症.超氧化物歧化酶SOD：是一种催化超氧负离子进行氧化还原反应，生成氧和接近氧化氢的氧化还原酶。功能有：抗氧化，抗衰老，抗辐射，对红斑狼仓、皮肌炎、结肠炎及氧中毒等疾病有明显疗效凝血酶：是一种催化血纤维蛋白原水解成不溶性的血纤维蛋白而促使凝血酶在医药制造方面的应用：1、青霉素酰化酶制造半合成抗生素，2、-酪氨酸酶制造多巴，3、核苷酸磷酸化酶制造阿糖腺苷，4、无色杆菌蛋白酶制造人胰岛素，5、多核苷酸磷酸化酶生产聚肌胞，6、-D-葡萄糖苷酶制造抗肿瘤人参皂甙酶在食品方面的应用：食品保鲜（食品除氧保鲜、蛋类制品脱糖保鲜、食品灭菌保鲜）、食品加工、食品添加剂的生产、改善食品风味和品质上的应用 酶工程：酶的生产、改性与应用技术过程酶活力：酶的催化能力，以酶促反应速度来衡量。测定条件: 适宜的特定的反应条件，样品的适当处理，底物浓度足够大酶活力单位：指酶促反应在单位时间（s,min,h）内生成一定量（mg, g, mol）的产物或只记的分支结构可能消耗一定量的底物所需的酶量。酶活力测定方法如化学测定法，光学测定法，气体测定法等酶的抑制剂：能够使酶的催化活性降低或者丧失的物质，在抑制剂作用下，酶的催化活性降低甚至丧失，从而影响没的催化功能，有可逆和不可逆抑制剂，酶的可逆抑制剂分为竞争性抑制，非竞争抑制，反竞争抑制竞争性抑制：指抑制剂和底物竞争与酶分子结合而引起带的抑制作用，它与酶作用底物的结构相似，与酶分子结合以后，底物分子就不能与酶分子结合，从而对酶的催化到抑制作用非竞争性抑制：抑制剂与底物分别于酶分子上的不同点结合而引起酶活性降低的抑制作用反竞争性抑制：在底物与酶分子结合生成中间复合物后，抑制剂在于中间复合物结合而引起的抑制作用。酶的发酵生产：经过预先设计，通过人工操作，利用微生物的生命活动获得所需的酶的技术过程，称为酶的发酵生产细胞活化：保藏的菌种在发酵生产之前，必须接种于新鲜的固体培养基上，在一定的条件下进行培养，使细胞的生命活性得以恢复，此过程称为细胞活化扩大培养：增加发酵时的数量，经过一级至数级扩大培养。培养基称为种子培养基培养基：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微生物培养提供除营养外的其它所必须的条件发酵动力学：是研究发酵过程中细胞生长速率，产物生产速率、基质消耗速率以及环境因素对这些速率的影响规律的科学端粒酶：端粒是真核生物染色体的末端结构式有富含G和T的DNA简单重复序列不断重复而成，具有保护真核生物染色体免遭破坏，它是通过端粒酶催化作用而生成的。端粒酶是催化端粒合成和延长的酶，端粒酶是一种核糖核蛋白，包含蛋白质和RNA两种基本成分，其RNA组分中含有构建端粒重复序列的核苷酸模板序列，在合成端粒的过程中，端粒酶以其本身的RNA组分作为模板吧端粒重复序列加到染色体DNA末端，是端粒延长抗体酶：又称催化性抗体，是一类具有生物催化功能的抗体分子，抗体酶同时具有抗体的高度特异性以及酶的高效催化能力，它是通过人工设计，采用现代生物技术而获得的一类新的生物催化，抗体酶的制备方法，主要有诱导法，修饰法模拟酶：是在分子水平上模拟酶活性中心的结构特征和催化作用基质，设计并合成的防酶体系固定化酶：与水不溶性载体结合，在一定的空间范围内气催化作用的酶优点：纯化简单，提高产物质量，应用范围广，多次使用，可以装塔连续反应。缺点：首次投入成本高大分子底物较困难翻译：以mRNA为模板，以氨基酸为底物，在核糖体上通过各种tRNA，酶和辅助因子的作用，合成多肽的过程共阻遏物：酶催化作用的产物或代谢物途径的末端产物使该酶的生物合成受阻。引起反馈阻遏的物质，称为共阻遏物沉淀分离是通过改变某些条件或添加某些物质，使酶的溶解度降低，从溶液中沉淀析出与其他溶质分离的技术过程盐析沉淀法：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质类酶在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程有机溶剂沉淀法：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。等电点沉淀法：调节体系pH值，使两性电解质的溶解度下降，析出的操作称为等电点沉淀干燥：用热能加热物料，使物料中水分蒸发而干燥或者用冷冻法使水分结冰后升华而除去的单元操作；通常是生物产品分离的最后一步.酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提离心分离：离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程膜分离技术：借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术称为膜分离技术膜：在一种流体相间有一层薄的凝聚相物质，把流体相分隔开来成为两部分，这一薄层物质称为膜膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依据滤膜孔径大小而达到物质分离的目的，故而可以按分离粒子大小进行分类：微滤，超滤，反渗透虑，纳滤，电渗析过滤：是借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程。过滤介质多种多样，常用的有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等，可以根据需要选用。等密度梯度离心：当欲分离的不同颗粒的密度范围处于离心介质的密度范围内时，在离心力作用下，不同浮力密度的颗粒或向下沉降，或向上漂浮，只要时间足够长，就可以一直移动到与它们各自的浮力密度恰好相等的位置，形成区带，这种方法称为等密度梯度离心密度梯度离心：是样品在密度梯度介质中进行离心,使沉降系数比较接近的物质分离的一种区带分离方法。常用的梯度介质有蔗糖、甘油等。差速离心：是指采用不同的离心速度和离心时间,使不同沉降速度的颗粒分批分离的方法.电渗析技术：电渗析技术是在直流电场的作用下，由于离子交换膜的阻隔作用，实现溶液的淡化和浓缩，分离推动力是静电引力分离：需要通过凝胶层析等方法进行分离，将具有不同修饰度的酶分子分开，从中获得具有较好修饰效果的修饰酶。电泳印迹：电泳转移即电泳印迹。它是利用低电压，大电流的直流电场使凝胶电泳的分离区带或电泳斑点转移到特定的膜上 。电荷效应：各种蛋白质按其所带电荷的种类及数量，在电场向一定电极，以一定速度泳动。分子筛效应：区别不同大小分子种类的能力是凝胶所具有的一种筛分大小的能力即分子筛效应。这种效应与凝胶过滤过程中的情况不同。 琼脂糖凝胶电泳主要用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。 琼脂糖凝胶电泳的基本操作 : 配制缓冲液贮备液 、水平型琼脂糖凝胶制备 、样品的制备与点样 、电泳 、染色 、样品回收超滤：需要增加流体的静压力，改变天然过程的方向，才可能发生含有低分子量化合物的溶剂流通过膜，此时的推动力是流体静压力与渗透压的压差反渗透：是一种以压力差为推动力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作，孔径范围在5级 混合澄清设备何谓超临界流体萃取？其特点有哪些？超临界流体：当一种流体处于其临界点的温度和压力之下，则称之为超临界流体。特点：密度接近液体萃取能力强；粘度接近气体传质性能好常用萃取剂：极性萃取剂：乙醇、甲醇、水（难）；非极性萃取剂：二氧化碳（易）利用超临界流体的特殊性质，使其在超临界状态下，与待分离的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分离何谓双水相萃取?常见的双水相构成体系有哪些？利用物质在不相溶的两水相间分配系数差异进行萃取的方法可以构成双水相的体系有：离子型高聚物非离子型高聚物；PEGDEXTRAN(-右旋糖；高聚物相对低分子量化合物；PEG硫酸铵反胶团的构成以及反胶团萃取的基本原理,反胶束的优点表面活性剂在非极性有机溶剂中形成的一种聚集体当表面活性剂浓度超过临界微团浓度时，表面活性剂会在水溶液中形成聚集体胶束和反胶束优点：极性“水核”具有较强的溶解能力。生物大分子由于具有较强的极性，可溶解于极性水核中，防止与外界有机溶剂接触，减少变性作用。由于“水核”的尺度效应，可以稳定蛋白质的立体结构，增加其结构的刚性，提高其反应性能阴离子表面活性剂：AOT，琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠阳离子表面活性剂：季铵盐什么是结晶过程？溶液中的溶质在一定条件下，因分子有规则的排列而结合成晶体，晶体的化学成分均一，具有各种对称的晶体，其特征为离子和分子在空间晶格的结点上呈规则的排列固体有结晶和无定形两种状态。结晶：析出速度慢，溶质分子有足够时间进行排列，粒子排列有规则。无定形固体：析出速度快，粒子排列无规则结晶是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过程。这一过程不仅包括溶质分子凝聚成固体，还包括这些分子有规律地排列在一定晶格中，这一过程与表面分子化学键力变化有关；因此，结晶过程是一个表面化学反应过程。结晶操作的特点有哪些？只有同类分子或离子才能排列成晶体，因此结晶过程有良好的选择性。通过结晶，溶液中大部分的杂质会留在母液中，再通过过滤、洗涤，可以得到纯度较高的晶体。结晶过程具有成本低、设备简单、操作方便，广泛应用于氨基酸、有机酸、抗生素、维生素、核酸等产品的精制。影响晶体形成的主要因素有哪