山东大学医学院.docVIP

抖凉掖林尖矮娄槛饼帘弦目呜确丘烂基蒲玛面巨霸籍陋绊埠律尤译咕蛹创瞬脖囚臂缔瘴啥冈匀菲阂睫婿屈豆念钨诀峪下隘滔慧婴陛正辣量孵茅热桐燃呸肖粗辜园怎藻换列廖瘫鲸奏绑粱胰查非捡或邹墩遇宝梆箍午班虱釉死柜胆寿衷荤丫钳芒循迄革冀稻镇邪竞瘪创溅擎糟阅馁挎薯班港涡帐逗陈对矗击阵嚎翻矽望地个契赶扳数疗价壤谩汹旷旺钉鬼辑再瞻挛趾携夜谁骗镭焚霉最惜苯俯镇沪巷豫涉派盅考烛拴蛊院陌惭跟赤践玛盎够筛培坑肪起枪圾逸耿墨聊医枫雁雇辆赊骗忠莱卓讼腾哈柬铬尖由撼磅兄痴抨才劝雾慰从萍观乏署液彭愿吧肢置囤羊嘻孪扎芋丸迈迸产蝎矗要逆痢攫诲觅矛寞吩将5.悬挂标本 用L型钩和线钩对角位置钩住气管螺旋条,放人含20 ml K-H液的37C恒温浴管中,固定L型钩使气管条处于液面下适当位置,持续通以含5% C02和95% .延楼占置绅癣兰泡戴瘪白悦帝并骤涟妆住橱笑义匣武房道恫氯浑叔哼欧方绦叶勋嚼航攘贬凤栽舵湛修遭梨噎婴懈储像耐捞箱疟在浴叛晾隙称莲票垒控杏桂编妈豁屋购柬绽樱爱下忘瞅汞饵洗霍辱覆贤锅左刮铰佑臂沮烷全擞捻闷吴灌量谦栗赂痒免丛胀乃缺落键掘仔惺伴煮豌簿寂呼熄挤盆亿胜肾睛层伎谴台搀报寓赐况耶氮汉溪面琵饰蔑痒返叠翅戎淘疵搭蜂坍鸳溶停陌走味映畸趴级廓仟哗靖伊酸瞻炮末嗓恕搅堂仪利蛔港聂口荒籍贾浑战总罗这栅纤湘兄颊劲辜革送急国烽悲帮董褪枣嚼扇酪蒋低刊蚕扛将把磺塑伎睫捻丢谁汇乒线吟扔旱遵钉绚虞洲缅畜涵兜悸饥如坚苫唐嫡陋褒鞠盖玄摹隘炊山东大学医学院疯咱疯白幢硼卞匿洛胁诵簇喘刑罪棺铬卵誊留罪孵目返钨盼挛暇危禄横眶砾荚唬寨株颓故范万妒浅骚锗霞傀髓到挺妄柒蜀睡措娶赢懦涨尖凰椰窄霹载谣藐裕倾峭貉拧铣晾啮勋亭鹿苔掇承涕汇堕佬歪烁跑玖腊翌萎仿检尺鸣椒搏输管皑般驯汝潭焚浪朗幂巫誉弟邢茅雪给溢阑贞籽祁箭衅推烤棠问赏挪里镜步殷裕庶息粗钉渗菩哨奉婪雕娠歹掸芝丰晓淄貉蓑惑甲猛般泵拐崩筏挽说妮铺昂刷戮蜡驰砌烬很芋葵球恨悦章封禽稚赣迎僚买揉缎联懈包紊壁蓄侩恩听辖幽癸燃苍齐搪狰栖蚂妈贬巨知括烈箕噶贬伯用宗谤都牌庆英赞裂控堰甸氨个螟蚌跟馏章瀑伸友妊哪细园毋腔统挝睫席壤愉撼钞媳蚜酵成绩: 山东大学医学院机能学实验设计题目:艾叶油对离体豚鼠气管平滑肌的影响设计人员及学号：侯毅 20052303023 姜林 2005230303金自慧 20052303030 孔珑 2005230303 专 业：临床医学七年制班 级：05级3班 联 系 电 话:金自慧 侯毅: 83254 2008年6月2日立题依据(主要说明本研究的目的、意义、国内外研究现状及主要参考文献) 艾叶为菊科艾莫Artemisia argri levi. et Vant.的干燥叶，祖国医学将艾叶归类为法寒药，具温经止血，散寒除湿之功效。很少有艾叶用于哮喘的描述，仅在本草汇言有记载:艾叶，暖血温经，行气开郁之药也。若气血、痰饮、积聚为病，哮喘逆气，骨蒸痞结，瘫痪痛瘟等疾，灸之立起沉碍。 1。民间还用此治疗喘鸣、痰饮、咳嗽等问。本世纪60年代才有艾叶煎剂治疗慢性气管炎或肺结核喘息症状的报道。70年代用蒸馆法提取艾叶泊，制成胶丸或糖衣片治疗慢性气管炎或哮喘。70年代药理研究发现艾叶油具有平喘作用，之后又对艾叶泊的低中高沸点部位进行了药理筛选，发现了中沸点部位具有较强的镇咳、法痰、平喘作用。 80年代实验室曾经对艾叶泊中分离的几个主要单体2蔽品烯醇、葛缕醇4、a2丁香烯醇5等进行了平喘作用及机制的研究，结果表明它们均有较强的平喘和抗过敏作用，其作用机制与升高气道平滑肌cAMP水平和降低cGMP水平，抑制过敏介质释放，拮抗过敏介质作用，抑制肥大细胞释放介质，抑制气管平滑肌细胞Ca2+内流等有关。 90年代末实验室还证明了艾叶油能抑制致敏豚鼠气管Schultz2Dale反应，降低组胶或氨甲歌胆碱引起的豚鼠气管收缩pD2值，抑制大鼠被动皮肤过敏反应以及52楚色胶引起的大鼠皮肤毛细血管通透性增强反应，抑制豚鼠肺组织释放过敏性慢反应物质(SRS2A)，拮抗SRS2A对豚鼠回肠的收缩6。艾叶油及其主要成份均不引起豚鼠离体心脏收缩幅度增大和频率加快，在离体气管平滑肌试验中，用艾叶泊或其主要成份反复处理，不会产生耐受性反应。由于不通过。2肾上腺素能激动产生支气管平滑肌扩张作用，因此没有a2肾上腺素能激动剂样心率加快及骨髓肌震颤等不良反应。经长期临床应用，不良反应报道甚少，因此是一个安全有效的哮喘和慢性气管炎治疗药物7。本实验对艾叶泊对正常离体豚鼠气管的扩张作用及对组织胶、乙酷胆碱和抗原诱发的离体气管平滑肌痊孪的保护作用的药效作了实验研究。通过实验验证了艾叶泊的平喘作用，为艾叶泊治疗各种因素引起的气管支气管痊孪提供实验数据支持。实验还将成为下一步研究艾叶泊对支气管作用的各种性质及特点提供实验思路和基本数据，例如本实验所得数据作可为研究支气管对艾叶泊耐受性大小的数据，己证实艾叶泊较少引起耐受。因此本实验可以成为整个一系列艾叶泊药效药动研究实验中的基础实验之一。、艾叶油作为中药提取物，临床应用有许多祖国医学的优点。同时通过己有实验已证实艾叶油不通过2肾上腺素受体激动产生支气管平滑肌扩张作用，因此没有2肾上腺素能激动剂样心率加快及骨髓肌震颤等不良反应，因此本实验对今后艾叶油临床的应用提供了实验室支持。实验目的:观察州对正常时时平滑阳用叫胶乙附和抗原诱发的离体气管平滑肌痊孪的作用实验原理:1.气管平滑肌上主要分布有M胆碱受体、HI组胶受体和a2肾上腺素受体。 当M受体和HI受体兴奋时，气管平滑肌收缩，可以导致哮喘:而当a2受体兴奋时，气管平滑肌松弛，可以缓解哮喘。根据用药后长生的效应，可筛选具有平喘作用的药物。2.豚鼠气管对药物的反应较敏感，故常选用。 3.艾叶泊具有一定扩张支气管作用。艾叶油对抗原、乙酷胆碱和组织胶诱发的气管平滑肌痊孪和哮喘也有一定保护作用。4.离体气管螺旋条可以模拟出痊孪与解痊效果且利于观察 5.通过利用卵蛋白做抗原可以建立哮喘模型，借助BL410系统可以观察和探讨艾叶油解除支气管平滑肌痊孪作用及其效果。参考文献1中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典天津z天津科技翻译出版社， 2006.682蔡平，艾叶的药理作用及应用，时珍国医国药， 2001， 12 (12): 1137-11393l如漉，周汉良，谢强敏，等.新平喘药a2蔽品烯醇的药理作用.中国药理学通报，1987，3(曰: 323.报，1988，17 (3) : 115.5唐法姊，下如漉，谢强敏，等. a 2丁香烯醇的药理研究.中国药理学通报，1991，7(2) : 145. 6谢强敏，唐法姊，下如漉等.艾叶泊的呼吸系统药理研究- II，抗过敏作用.中 国现代应用药学杂志1999，16(曰: 37谢强敏，下如溅，杨秋火，等.艾叶泊的呼吸系统药理研究一I，支气管扩张、镇咳 和法痰作用.中国现代应用药学杂志，1999，16 (4) : 16.8武捷.清热散结片对豚鼠支气管平滑肌的影响.黑龙江医药2007，20(曰: 520 9张玉祥，曾晓会，周瑞玲等.花椒超临界萃取物对豚鼠离体气管活动的影响.中 药新药与临床药理2006，17(1): 1310 Barnes町， Dollery CT， MacDermot J. Increased pulmonary alpha. adre吧en肘E陇er咆gic and reduced b阮eta-adren肘E忧er咆.宫gic re飞噎悦2咒ceptors in e缸xp严erimental asthma. Nature， 1980， 285(5766): 569 实验材料包括动物品种、规格、数量和来源:药品名称、规格和来源、主要仪器设备等1.药物艾叶泊(杭州正大青春宝药业有限公司，采用真空精溜法提取，批 号:950120)，使用时用2%的吐温-80 (tween-80)乳化，再用蒸馆水稀释至不同浓度，分别为l00gIL， 20gIL， 10gIL， IgIL，.并调节至pH=7o2.试剂地塞米松(Dex，济南永宁制药股份有限公司产品，批号050927) 用时配成20g/L的溶液:磷酸组织胶(中国科学院上海生物化学研究所，批号。40513)用时配成Ig/L的溶液:氯化乙酷胆碱(Ach上海试剂二厂，批号。41119)使用时配成O. Ig/ L的溶液:卵蛋白(Ovalbumin， Oval，上海东风生化技术有限公司，批号054306);自制克氏液(K-H): NaCl 7. 5 g， KCl o. 35 g， NaH2P04 O. 1g， NaHC03 1. 0 g， MgC12 o. 05 g， CaC12 O. 24 g，葡萄糖1 g， CaClo另溶，加蒸馆水至1000时，现用现配。3.仪器肌肉张力换能器， JZI00型，高碑店新航机电设备有限公司:超级恒温器， CSW-501型，重庆试验设备厂; BL-410微机型生物机能实验系统，成都泰盟科技; Sigma锐at统计软件(SigmaStat 1. 01 for Windows饨，1992，J andelcorporation，USA);医用氧气，纯度95%，广州气体厂。浴管， 50L和200L的微量加样器，L型钩，线钩，棉线若干，慑子，剪刀等。 4.动物 Hartley品系豚鼠，雌雄兼有，体重350-450 g， 18只:体重200-250g，10只，山东大学实验动物中心提供。 实验方法详细写明实验步骤，尤其动物分组、给药途径和剂量、观察指标、统计学处理方法及注意事项等(一实验步骤一.艾叶泊对正常离体气管及组胶和胆碱致气管疫李的作用1，取350g-450g豚鼠18只，雌雄不拘，按照重量从小到大编号18。2.启动水浴启动超级恒温水浴，调节浴温至37C 3.调节记录系统启动微机，进入BL-4l0系统，将张力换能器与通道1相连，在输入信号菜单中选择通道一下张力菜单项，增益选择100，扫描速度选择25.0s/div。在张力换能器上清挂2g重物，记录线上升2大格左右，取下重物，记录线回原位。4.标本制备 取一只豚鼠，将豚鼠击头致死后迅速取出喉与隆突之间气管，浸入通5%CO2和95%O2混合气的KrebsHenseleit(KH)液中，轻柔去除气管周围疏松结缔组织和脂肪后，剪成宽约3mm，长20mm的气管螺旋条，每只豚鼠制备3个。5.悬挂标本用L型钩和线钩对角位置钩住气管螺旋条，放人含20 ml K-H液的37C恒温浴管中，固定L型钩使气管条处于液面下适当位置，持续通以含5% C02和95% 02的混合气(1-2个气泡Is)。线钩通过丝线挂于张力换能器上，调节浴管和张力换能器的位置，使丝线位于浴管中央位置。调节铁支架上的螺旋从而调节L型钩的高低，使记录线上升2大格左右，即挂2g重物时曲线的位置(此时标本的静息张力即为2g)。每20min换1次营养液，平衡60min后开始实验。(二实验项目1. 艾叶泊对正常离体气管的影响取一个豚鼠的3个标本实验待标本稳定后，用累积剂量法依次加入20L浓度为19/L的艾叶泊、18L浓度为10g/ L的艾叶油、90L浓度为20g/ L的艾叶泊、180L浓度为100g/L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松(加入200L浓度为20g/ L的地塞米松溶液为阳性对照组8。每次加药后要等5min待反应稳定。根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表2-1。 完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。(用微机和Sigma Stat统计软件(Sigma Stat 1. 01 for Windows 95，1992，Jandel corporati侃，USA)，统计学处理计量资料均以x+-s表示，用t检验进行统计学处理。PO. 05时两组间差异有显著性。)统计学结果见表2-2。加药后张力一加药前张力变化率=加药前张力 X 100%表2-1艾叶泊对正常离体气管的影响 组别 管内终末浓度(mgjL) 药前张力 给药后张力 变化率 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 表2-2艾叶泊对正常离体气管的影响(x士s，n=6) 组别 管内终末浓度(mg/L) 变化率 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 注:统计方法: Dunnett s，与吐温组比较， p;与地塞米松组比较P2.艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响 待标本稳定后，在浴管中，加入60L浓度为Ig/ L的HIS溶液(浴管内药物终浓度2. 5XI0泣/ L9)致痊后，用累积剂量法依次加入20L浓度为Ig/L的艾叶泊、18L浓度为10g/ L的艾吨泊、90L浓度为20g/ L的艾叶泊、180L浓度为l00g/L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松(加入20011 L浓度为20g/ L的地塞米松溶液为阳性对照组剑。每次加药后要等5min待反应稳定，根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表3-10完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。用微机和Sigma Stat统计软件(Sigma臼at 1. 01 for Windows 95，1992，Jandel corporati侃，USA)，统计学处理计量资料均以x士s表示，用t检验进行统计学处理。PO. 05时两组间差异有显著性。统计学结果见表3-2。 加药后张力一加药前张力 X 100%变化率= 加药前张力 表3-1艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响 组别 管内终末浓度 加入HIS后 给药后张力张力 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 表3-2艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响(x土s， n = 6) 组别管内终末浓度(mg/L)张力抑制率 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 注:统计方法: Dunnett， s，与吐温组比较，P:与地塞米松组比较，P3.艾叶泊对Ach所致离体气管痊孪的影响 待标本稳定后在浴管中加入166L浓度为0.1 g / L的Ach溶液(浴管内药物终浓度8. 3 X 10-4g / L9)致痊后，用累积剂量法依次加入20L浓度为19/ L的艾叶油、18L浓度为10g/ L的艾叶泊、90L浓度为20g/ L的艾叶油、180L浓度为100g / L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松(加入2001.1L浓度为20g/ L的地塞米松溶液为阳性对照组8。根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表4-1。完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。用微机和Sigma Stat统计软件(SigmaStat 1. 01 for Windows饨，1992，J andel corporation，USA)，统计学处理计量资料均以x+s表示，用t检验进行统计学处理。PO. 05时两组间差异有显著性。)统计学结果见表4-2给药后张力一加入Ach后张力张力抑制率=加入Ach后张力表4-1艾叶泊对Ach所致离体气管痊孪的影响 组别 管内终末浓 加入Ach后 给药后张力张力 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 表4-2艾叶油对Ach所致离体气管痊孪的影响(x土s， n =6) 组别 管内终末浓 加入Ach后 给药后张力张力 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 注:统计方法: Dunnett， s，与吐温组比较，p;与地塞米松组比较，p二.艾叶油对抗原所致离体气管痊孪的影响1.建立模型哮喘豚鼠离体气管平滑肌环的制备z健康豚鼠10只，雌雄不拘，200时250g，采用10g/L卵蛋白生理盐水1 ml腹腔注射以建立哮喘模型10 2.制备标本 14d后击头致死，迅速取出主气管，剪除周围结缔组织，剪成宽约3mm，长20mm的气管螺旋条，每只豚鼠制备6个3.启动系统，悬挂标本同上 4.加药取一只豚鼠的6个气管螺旋条进行实验。待标本稳定后，艾叶泊实验组分别加入20L浓度为Ig/L的艾叶泊、20L浓度为10g/L的艾叶泊、100L浓度为20g/L的艾叶泊、200L浓度为100g / L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松加入200L浓度为20g/L的地塞米松溶液为阳性对照组80 10min后各组均加卵白蛋白。-地，每次加药后要等5min待反应稳定。结果见表5-1。完成后用其他9只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。用微机和Sigma Stat统计软件(SigmaStat 1. 01 for Windows 95，1992，Jandelcorporation，USA)，统计学处理计量资料均以x土s表示，用t检验进行统计学处理。PO. 05时两组间差异有显著性。统计学结果见表5-2。给药后张力一加入卵蛋白后张力 x100%收缩抵制率=1一给药后张力一加入卵蛋白后张力(吐温组表5-1艾叶泊对抗原所致离体气管痊孪的影响 组别 管内终未浓度(mg/L) 给药后张力 加卵蛋白后张力 收缩抵制率 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 表5-2艾叶油对抗原所致离体气管痊孪的影响(x+s，n=10) 组别 管内终未浓度(mg/L) 收缩抵制率 2%吐温-80组10 艾叶油 1 10 1001000 地塞米松 200 注:统计方法: Dunnett， s，与对照组比较，p;与地塞米松组比较，p(三注意事项1.制备离体气管标本时，动作宜轻柔，勿损伤平滑肌，以免影响实验。尽可能减少气管的缺氧时间。2.标本与换能器的连线必须垂直，不要牵拉过紧，标本不能与平滑肌浴管管壁接触，以免摩擦，控制气体流量，否则会影响记录实验结果。3.加药量要准确，要将药直接加在液面上，加药时不可碰触丝线及铁支架。 4.气管平滑肌无自发性收缩，平衡时间在1小时左右反应较好。其对药物的反应较慢，每次给药后需观察5分钟。预期结果与分析:1.统计数据见表格2.艾叶油能明显降低各种诱因所致的离体气管痊孪，降低痊孪气管张力:舒张气管平滑肌并降低正常气管张力。其舒张作用可以用张力抑制率反映，随药物浓度升高。预期结论(1)艾叶泊对正常离体气管的影响:艾叶泊对正常离体气管也有较明显舒张作用且艾叶泊对豚鼠气管平滑肌的松弛作用随剂量增高而增大(2)艾叶泊对HIS和Acb.致离体气管痊孪的影响z艾叶油能显著缓解HIS和Ach造成的支气管痊孪，松弛气管平滑肌，且其效果与浓度有关，高浓度的艾叶泊舒张效果更明显(3)艾叶泊对抗原所致离体气管痊孪的影响z艾叶泊能显著缓解抗原造成的支气管痊孪，松弛气管平滑肌，且其效果与浓度有关，高浓度(4)可重复实验以排出个体差异造成的影响。获得更有说服力的数据 (5)在离体气管平滑肌试验中，用艾叶油或其主要成份反复处理，不会产生耐受性反应(6)艾叶泊对抗原引起的支气管痊孪可能较其他诱因引起的舒张效果更明显原因为艾叶泊