血液标本采集与血涂片制备ppt课件

临床基础检验学,第二章 血液标本采集和血涂片制备,黄 辉 ,患者刘某，男，44岁，身高173cm，体重59kg，患糖尿病5年，入院前口服多种降糖药，血糖控制很不理想，波动较大，电解质常规检查结果如下： 钠 135.9 mmol/L （135145） 钾 6.5 mmol/L （3.55.2） 氯 105.2 mmol/L （96108） 钙 2.31 mmol/L （2.202.75）,临床基础检验学,作为检验人员，你准备如何处理这份检验结果？,第一章 血液标本采集与血涂片制备,教学内容,血液标本的采集,血液抗凝剂及使用,血涂片的制备技术,血液细胞染色技术,血液学检查：反应造血系统本身、机体全身或局部病变,一、血液标本的采集,全血 血浆 血清,whole blood：静脉全血、动脉全血、毛细血管全血。【肘前静脉、腕静脉，小儿颈静脉、股静脉】,Plasma：抗凝后去除血细胞后的血液成分。血浆化学成分分析、凝血试验等。,serum：血液离体自然凝固后分离出来的液体成分。临床化学和免疫学检测。,部分检验项目有时选择特定的血细胞作为标本,一、血液标本的采集,1.按采血部位分：皮肤采血、静脉采血、动脉采血 2.按采血方式分：普通采血法、真空采血法,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,皮肤采血法 skin puncture for blood collection,皮肤采血法主要用于微量用血的检查； 成人一般选择中指或无名指指尖内测采血； 半岁以下婴幼儿可选择足跟进行采血。,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,激光采血法：激光发射一束波长为2940nm的单脉冲的激光。细微的光束打在采血者手指的滑囊处，其瞬间温度可达1000，作用时间不超过万分之四秒，使得皮肤表皮组织溶解、挥发，出现一个0.40.8mm的小孔。,感染机会少、痛感轻、工作强度低,皮肤采血法 skin puncture for blood collection,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,静脉采血法 venipuncture for blood collection,一、血液标本的采集,负压采血法 预先添加各种添加剂，满足临床多种实验需要。 无菌程度高，血液污染概率小，对检验结果的干扰小。 带有分离胶的真空采血管可直接快速分离血清。 在实验室间传送方便，能避免对医护人员的感染和患者血标本间的交叉污染。,静脉采血法 venipuncture for blood collection,一、血液标本的采集,真空采血负压管头盖的颜色及适用范围,一、血液标本的采集,一、血液标本的采集,静脉采血法 venipuncture for blood collection,一、血液标本的采集,两种采血方法的优缺点比较,毛细血管采血,静脉采血,缺点,标本量少，不能进行重复实验和补充实验；组织液可混入，局部炎症可得假性结果。,不同抗凝剂的使用，可能改变血液性质，影响有形成分的形态。,优点,价廉、快速、操作简便，标本可直接测定,标本代表性强，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验,一、血液标本的采集,适用于动脉血血气分析(氧含量，二氧化碳含量，动脉血酸碱平衡等)； 穿刺部位：桡动脉、股动脉、肱动脉； 注意事项：隔绝空气、立即送检。,动脉采血法 Arterial puncture for blood collection,一、血液标本的采集,血液标本的处理、运送与保存,视每一份标本为无法重复获得、唯一的标本； 标本信息的完整性-唯一标识原则； 视所有的标本都有传染性-生物安全原则； 对标本进行及时处理； 不合格血液标本拒收-溶血、凝血标本；血液采集容器不当；采血量不足；标本污染、容器破损。,一、血液标本的采集,患者情况 采血时间 采血部位 溶血情况 标本处理 结果分析,血液采集的质量控制,一、血液标本的采集,溶血引起血液成分浓度或活性变化,一、血液标本的采集,二、血液抗凝剂及使用,血液凝固机制,抗凝原理：螯合钙离子 使用方法：EDTA K22H2O 1.52.2mg/ml血液 适用范围：对血细胞形态和血小板计数影响小-适合于多项血液学检查；影响血小板聚集-不宜用做凝血象检验及血小板功能检验。,乙二胺四乙酸（EDTA）盐,二、血液抗凝剂及使用,常用的有草酸钠、草酸钾和草酸铵。 抗凝原理：螯合钙离子，草酸钙沉淀 使用方法：0.1mol/L与血液1：9混合 适用范围：止凝血检验,不适合作细胞形态分析的抗凝剂,草酸盐,二、血液抗凝剂及使用,抗凝原理：草酸钙沉淀 使用方法：草酸钾0.8g 草酸铵1.2g（100ml） 与血液1：10混合（80以下烘干）。 适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数），不适于血小板计数和白细胞分类计数,双草酸盐,二、血液抗凝剂及使用,肝素为一种含硫酸基团的粘多糖； 抗凝原理：抑制因子a、和PF3之间的作用，加强抗凝血酶灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子的作用。 使用方法：每毫升血液（152.5）U,肝素,二、血液抗凝剂及使用,优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。 适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析。,肝素,二、血液抗凝剂及使用,抗凝原理：螯合钙离子 使用方法：109 mmol/L浓度与血液1：9混合 适用范围：止凝血检验、血沉、输血保养液（毒性弱）,枸橼酸钠,二、血液抗凝剂及使用,常用抗凝剂的抗凝原理及优缺点,二、血液抗凝剂及使用,脱纤维蛋白法： 血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而阻止血凝块形成。适用于免疫学检验和红斑狼疮细胞检查。,物理方法抗凝,二、血液抗凝剂及使用,血涂片制备主要用于血液细胞学检查、网织红细胞检查和寄生虫学检查。,三、血涂片的制备技术,三、血涂片的制备,三、血涂片的制备技术,手工法制备,仪器法制备,三、血涂片的制备技术,厚薄适宜 头体尾分明 细胞完整 边缘整齐,质量标准,三、血涂片的制备技术,血涂片质量评价,三、血涂片的制备技术,血涂片观察区域选择,三、血涂片的制备技术,四、血液细胞染色技术,经过染色后,血液细胞及其主要结构染上不同的颜色，便于显微镜下观察细胞的内部结构，正确识别各种细胞及其异常变化。,普通染色,细胞化学染色,免疫组化染色,荧光染色,四、血液细胞染色技术,碱性染料：为阳离子染料，能接受质子,与细胞内酸性成分结合,是染胞核的染料。如亚甲蓝、天青。,酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。,复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料。,染料分类,四、血液细胞染色技术,瑞氏染色,瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝溶解于甲醇而成。 酸性染料伊红与血细胞中的碱性物质结合染成红色，如红细胞中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞的嗜酸性颗粒。 碱性染料亚甲蓝与血细胞中的酸性物质结合染成蓝色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞的嗜碱性颗粒等。,四、血液细胞染色技术,Wright染液：瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml；甲醇有强大的脱水力，可将细胞形态固定，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状结构等，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。,磷酸盐缓冲液（pH 6.46.8）：维持染色过程的pH值。,瑞氏染色,四、血液细胞染色技术,用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。 加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10mins。 用清水冲洗，待干后镜检。,瑞氏染色,四、血液细胞染色技术,影响瑞氏染色效果的一些因素: 染料放置时间； 溶液的酸碱度； 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。,瑞氏染色,四、血液细胞染色技术,四、血液细胞染色技术,基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。,吉姆萨染色,四、血液细胞染色技术,非淋病性尿道炎分泌物涂片 姬姆萨染色 油镜10100见到一个大单核细胞，胞浆内有球形和椭圆形的包涵体-衣原体。,四、血液细胞染色技术,血液采集方法 静脉采血法 皮肤采血法 动脉采血法,抗凝剂选择 EDTA 草酸盐 肝素 枸橼酸盐,第一章 血液标本采集和血涂片制备,血涂片制备 厚薄均匀 头体尾分明 边缘整齐,血液细胞染色 瑞氏染