幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交).doc

规格：20 人份50 人份产品型号：S30332S30333肄蒇蚆肇肀蒇衿羀莈蒆薈螂芄蒅蚁羈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂薂薅蝿芁薁蚇羄膇薁衿螇膃薀蕿肃聿蕿蚁袆莇薈螄肁芃薇袆袄腿薆薆聿肅芃蚈袂羁节螀肈芀芁蒀袀芆芀蚂膆膂艿螅罿肈艿袇螁莇芈薇羇节芇虿螀膈莆螁羅肄莅蒁螈羀莄薃羄荿莃螅袆芅莃袈肂膁莂薇袅肇莁蚀肀羃莀螂袃节葿蒂肈膈蒈薄袁肄蒇蚆肇肀蒇衿羀莈蒆薈螂芄蒅蚁羈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂薂薅蝿芁薁蚇羄膇薁衿螇膃薀蕿肃聿蕿蚁袆莇薈螄肁芃薇袆袄腿薆薆聿肅芃蚈袂羁节螀肈芀芁蒀袀芆芀蚂膆膂艿螅罿肈艿袇螁莇芈薇羇节芇虿螀膈莆螁羅肄莅蒁螈羀莄薃羄荿莃螅袆芅莃袈肂膁莂薇袅肇莁蚀肀羃莀螂袃节葿蒂肈膈蒈薄袁肄蒇蚆肇肀蒇衿羀莈蒆薈螂芄蒅蚁羈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂薂薅蝿芁薁蚇羄膇薁衿螇膃薀蕿肃聿蕿蚁袆莇薈螄肁芃薇袆袄腿薆薆聿肅芃蚈袂羁节螀肈芀芁蒀袀芆芀蚂膆膂艿螅罿肈艿袇螁莇芈薇羇节芇虿螀膈莆螁羅肄莅蒁螈羀莄薃羄荿莃螅袆芅莃袈肂膁莂薇袅肇莁蚀肀羃莀螂袃节葿蒂肈膈蒈薄袁肄蒇蚆肇肀蒇衿羀莈蒆薈螂芄蒅蚁羈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂薂薅蝿芁薁蚇羄膇薁衿 幽门螺杆菌检测试剂盒（原位杂交）（操作之前请详细阅读此说明书） 检测原理和意义原位杂交技术的原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基互补配对原理，与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大及显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。HP（幽门螺旋杆菌）是一种单极、多鞭毛、螺旋杆状细菌。研究证明，HP是引起胃炎、胃溃疡、胃非何杰金淋巴瘤和粘膜相关淋巴组织性淋巴瘤（MALT）的主要病因。HP探针是根据HP的特征性基因序列设计而成的，配合先进的放大系统和显色系统所组成的原位杂交检测试剂盒，具有很高的特异性和灵敏性，大大超过目前病理科常用的HP检测方法，并且不受细菌形态的影响。 试剂盒提供的材料和试剂成 份保存方法提 供 量20人份50人份1HP杂交液-20500ul625ulx22杂交增强液（100）460ml60ml3一抗41ml2.5ml4二抗41ml2.5ml5HRP聚合物41ml2.5ml6DAB底物41ml2.5ml7DAB 420ul50ul818X18mm盖玻片4/室温20片50片9湿盒增效液4/室温30ml30ml（注意：HP杂交液请 -20保存）4泰普生物TRIPLEX幽门螺杆菌检测试剂盒 用户自备材料和试剂1. 原位杂交加热器（泰普编号：M10061）8. 湿盒2个2. 微波炉9. 二甲苯3. 37恒温培养箱10. 酒精4. 光学显微镜11. PBS(pH=7.6)5. 移液器12. 苏木素6. 计时器13. 氨水7. 玻片染色缸和染色架14.盐酸酒精 实验前需配试剂A、1X杂交增强液取适量100X杂交增强液及蒸馏水，按1：99稀释，并将此1X杂交增强液存放于4备用。B、30湿盒增效液取湿盒增效液及蒸馏水，按3:7配制成30%湿盒增效液备用。 实验时需配试剂DAB显色液依据需要配制DAB显色液，以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物，按照1：50的比例混匀，避光保存备用。(现配现用) 操作步骤1切片处理：将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上，切片于60-70烘烤60分钟以上。（建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片）2脱蜡及水化：溶液次数时间（分）二甲苯3 10100%酒精1 395酒精1 x 380%酒精1 3蒸馏水1 x 3（注意：使用过的二甲苯，应相应延长脱蜡时间，以保证脱蜡完全）3微波处理：将切片放入盛有1X杂交增强液的容器里，微波高火状态煮30分钟，自然冷却2-3分钟。（加热过程中，溶液应始终浸没组织。建议适时（每隔5-15分钟）补充杂交增强液）蒸馏水洗涤11分钟，小心擦干组织周围液体。4杂交：4.1 每张切片滴加适量杂交液(约25 ul，根据组织大小增、减量)，并加盖玻片（本试剂盒配备，可根据加入杂交液量进行剪裁）；4.2 放置于95原位杂交加热器上变性5分钟；4.3 放入含30%湿盒增效液的湿盒中，37下孵育4-16 小时。建议过夜（16小时）以保证低拷贝样本的杂交效果；4.4 48（PBS 预温）浸泡切片，小心移去盖玻片，PBS继续浸泡5分钟；4.5 48 PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器)；（注意：盖玻片规格应与杂交液量匹配，切片在整个试验过程中要保持湿润状态，防止干片）5信号放大与显色：5.1 小心擦去组织周围液体，滴加适量一抗(约50 ul，根据组织大小增、减量)，37，水湿盒中孵育30分钟；37PBS浸泡3x2分钟（轻微振荡容器）；5.2 小心擦去组织周围液体，滴加适量二抗(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育20分钟；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)；5.3 小心擦去组织周围液体，滴加适量HRP聚合物(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育30分钟；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。5.4 小心擦去组织周围液体，滴加适量DAB显色液(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育约10分钟（不同样本的显色时间可能有所差别，建议镜下观察显色过程）；室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。5.5 自来水冲洗，苏木精复染（可用盐酸酒精分化及氨水返蓝）。梯度酒精脱水，中性树胶封片。 阳性结果判断标准：胃小凹和黏膜表面棕褐色着色。 其他事项：本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查，如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问题，或者在使用过程中有任何疑问，请及时与泰普客户服务中心联系，我们将及时为您解决。 公司信息：公司名称：福建泰普生物科学有限公司总部：福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编：350002 电话：800-804-8333，0591-2805 3600 传真：0591-2805 3700研发中心：北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦A座207室 邮编：102206 电话：010-8072 0071 传真：010-8072 0072操作步骤简表操 作参 数1二甲苯3X102100%酒精1X3395酒精1X3480酒精1X35蒸馏水1X36微波加热3x107蒸馏水18加杂交液适量9变性95，51030湿盒增效液的湿盒中孵育37，4-16h11PBS（用前48预温）脱片浸泡1-5+512PBS（用前48预温）浸泡3X513加一抗37，3014PBS（37）浸泡3X215加二抗室温，2016PBS浸泡3X217加HRP聚合物室温，3018PBS浸泡3X219DAB显色， 室温，2-10 20PBS浸泡3X221自来水冲洗 122复染，脱水，封片常规 薄袀莇芆螀螆莆荿薃膄莅薁袈肀莄蚃蚁羆莃莃袆袂羀蒅虿螈罿薇袅肇肈芇蚇羃肇荿袃衿肆薂蚆袅肆蚄蕿膄肅莄螄肀肄蒆薇羆肃薈螂袁肂芈薅螇膁莀螁肆膀蒃薃羂膀蚅蝿羈腿莄蚂袄膈蒇袇螀膇蕿蚀聿膆艿袅羅膅莁蚈袁芄蒃袄螇芄薆蚇肅芃芅葿肁节蒈螅羇芁薀薈袃芀芀螃蝿艿莂薆肈芈蒄螁羄莈薇薄袀莇芆螀螆莆荿薃膄莅薁袈肀莄蚃蚁羆莃莃袆袂羀蒅虿螈罿薇袅肇肈芇蚇羃肇荿袃衿肆薂蚆袅肆蚄蕿膄肅莄螄肀肄蒆薇羆肃薈螂袁肂芈薅螇膁莀螁肆膀蒃薃羂膀蚅蝿羈腿莄蚂袄膈蒇袇螀膇蕿蚀聿膆艿袅羅膅莁蚈袁芄蒃袄螇芄薆蚇肅芃芅葿肁节蒈螅羇芁薀薈袃芀芀螃蝿艿莂薆肈芈蒄螁羄莈薇薄袀莇芆