2013年32学时抗体

1,抗 体,抗 原,抗原结合部位,抗原,第4章 抗体与免疫球蛋白 (antibody,Ab &immunoglobulin, Ig), 抗体的发现、命名 免疫球蛋白的结构 抗体的异质性 免疫球蛋白的生物学活性 各类免疫球蛋白的特性与功能 抗体的制备,2,分泌型:血清和组织液等;发挥抗体功能 跨膜型:B细胞表面；作为抗原受体,抗体是B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一种可特异性结合抗原的蛋白质(免疫球蛋白）,3, 1968和1972的两次国际会议上将具抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)； 目前认为抗体与免疫球蛋白完全相同。 抗体存在于血清等体液中. 免疫球蛋白的分布: 分泌型存在于体液中,具抗体功能; 膜型作为抗原受体存在于B细胞膜上, 即BCR.,4,(FDA Fast Track) FDA 较快程序 Paradigm for Biomarker identification 生物标记鉴定规范 Stable, Cheap to produce and purify 稳定、生产与纯化廉价 Availability; many labs have collections 有效性； High Target Affinity and Specificity 高靶向亲和性与特异性 Relatively High sensitivity (detection) 检测的高敏感性 Ab-Based MicroChips and BioSensors 抗体芯片与生物传感器,Prof. P Hudson,5,一. 免疫球蛋白的基本结构 （一）重链与轻链 (heavy chain & light chain) 免疫球蛋白基本结构 亦称 基本四肽单位或Ig单体， 由两条重链与两条轻链组成.,第1节 免疫球蛋白的结构,6,1. 重链 重链的类 五类重链为: 相应的免疫球蛋白分子为: 重链的亚类: IgG和IgA根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键数目与位置的差异又分为若干亚类，如IgG1, IgG2, IgG3, IgG4; IgA1, IgA2,2. 轻链 轻链的型:分为 与 两型, 每个免疫球蛋白分子上的轻链.型别都是相同的. 轻链的亚型: 型又可分为 1、2、3 和 4 等四个亚型.,、 、 、 ， IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE,9,(三) 铰链区： 位于CH1与CH2之间, 易伸展弯曲.,10,（二）其他成分 J 链与分泌片,J链 由浆细胞合成 IgA由二硫键连接形成二聚体； 单体IgM通过二硫键与J链连接形成五聚体,分泌片 是分泌型IgA的一个辅助成分，由粘膜上皮细胞合成和分泌，介导IgA二聚体从粘膜下通过粘膜等细胞到粘膜表面的转运.,11,（三） 免疫球蛋白的水解片段,（一）木瓜蛋白酶水解片段 2个相同的 Fab段 即抗原结合片段 1个Fc段，即可结晶片段.Ig同种型的抗原性主要存在于Fc段.,（二）胃蛋白酶水解片段 一个F(ab)2片段，为双价，与抗原结合可发生凝集反应和沉淀反应. Fc段被裂解为若干小分子片段，被称为pFc，失去生物学活性. 仅F(ab)2 ，可降低免疫原性,12,诺贝尔奖得主的获奖工作 1972年，美国学者 Edelman 与 英国学者Porter 因阐明抗体的化学结构获医学生理性诺贝尔奖,13,第2节 抗体的异质性(非均一性）,(一) 类 （class） : IgG、IgA、IgM、IgD、IgE （二） 亚类 (subclass): IgG14, IgA1 2, IgM12 （三） 型 （type） : 和k 型 （四） 亚型（subtype）,（一）免疫球蛋白的分类,抗体在结构和功能上不均一性和差异性的总和。,14,（二）外源因素所致的抗体异质性(heterogeneity) 抗体的多样性,15,（一） 同种型 isotype： 同一种属内所有个体都具有的Ig抗原特异性，存在于C区。 类（CH）, 亚类（CH） 型（CL）,; 亚型 （二）同种异型 allotype：同一种属内不同个体间Ig所具备的不同抗原异性。如Gm1-30,Am1-2,Km1-3 （三）独特型 idiotype：不同抗体产生细胞克隆所分泌Ig的抗原特异性，存在于V区。,（三） 免疫球蛋白的抗原性血清型(serotype),抗体的抗原性是由在Ig分子上不同区域的结构差别而决定的.,16,抗体的抗原性 血清型,17,18,第3节 免疫球蛋白的生物学特性,* 游离Ig的V区：结合细菌、病 毒、寄生虫、某些药物等抗原 * B细胞表面的Ig（BCR）：是特异性识别抗原的受体 * 抗体的结合价：每个抗体分子可结合抗原表位的数目。,1. V区功能 特异性识别、结合抗原,(一) 免疫球蛋白的主要功能,19,（1） 激活补体：IgG13 及IgM抗体与抗原结合后可激活补体 （2）细胞亲嗜性： IgG和IgE抗体以Fc段与相应细胞的Fc受体结合。 IgE的Fc段介导型超敏反应 （3）调理作用： 抗体、补体促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用. (4)抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 ADCC:表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞. (5)IgG可通过胎盘； * 人与某些哺乳动物的IgGFc段能非特异地与葡萄球菌A蛋白（staphylococcus proteinA，SPA）结合，,2. Ig 分子C区的功能,20,21,NK细胞介导的ADCC(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity),22,抗体的结构与功能的关系,23,概念: 许多细胞膜表面和机体某些蛋白质分子在DNA水平和氨基酸序列与免疫球蛋白的V区或C区有较高的同源性. 结构特点: 均有1-7个Ig样功能区，分为V,C1,C2组 功能特点: 以识别为特点 实例: 抗原识别受体及信号传导分子, MHC及其相关分子, 免疫球蛋白受体,细胞因子受体, 白细胞分化抗原等,免疫球蛋白超家族(Immunoglobulin Superfamily，IGSF),24,25, 血清含量最高，半衰期最长； 功能最多：结合抗原、激活补体、调理吞噬并介导ADCC、通过胎盘、结合SPA. 为再次免疫应答的主要抗体. 抗感染的主要抗体( 抗菌、抗病毒, 抗毒素抗体),并介导II、III型超敏反应,(二) 各类免疫球蛋白的特性,IgG,26,IgM 分子量最大， 为90万, 是血管内抗感染的主要抗体. 其激活补体的能力比IgG强数十倍. 在个体发育过程和体液免疫应答中 均是最早合成和分泌的抗体. *脐带血IgM增高提示胎儿有宫内感染; * 感染过程中血清IgM水平升高， 说明有近期感染. 天然的血型抗体和类风湿因子亦属IgM. 膜表面IgM是B细胞抗原受体(B cell receptor，BCR)的主要成分.,27,IgA 血清型IgA: 以单体形式存在,作用不详. 分泌型IgA(sIgA): 由J链连接的二聚体和分泌片组成. * 合成和分泌的部位在肠道、呼吸道、乳腺、唾液腺和泪腺，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中. * 是参与粘膜局部免疫的主要抗体. * 婴儿可从母亲初乳中获得分泌型IgA，是一种重要的自然被动免疫.,28, B细胞表面的mIgD 可作为B细胞分化发 育成熟的标志； 未成熟B细胞仅表达 mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD,IgD 血清浓度很低（0.2）， 半寿期很短（仅3天）. 血清IgD的功能不清.,29,IgE 血清浓度极低，约为310-5 mg/ml. 为亲细胞抗体，与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力FcRI结合，引起I型超敏反应,30,粘膜抗感染,血管内抗感染；感染的早期诊断； 天然血型抗体,五类免疫球蛋白的主要特性,31,第4节 人工制备抗体,(一)多克隆抗体的制备 (二)单克隆抗体及其制备 (三) 基因工程抗体 免疫球蛋白分子上的星球大战,32,应用含多个不同抗原表位的抗原物质刺激机体所产生的抗体。 是针对多种不同抗原表位的不同抗体的混合物，即为多克隆抗体。,(一) 多克隆抗体 Polyclonal antibody,33,体内作用: 多克隆抗体是机体发挥特异性体液免疫效应的重要分子，在中和抗原、免疫调理、介导CDC、ADCC中起重要作用。 体外应用: 诊断、治疗及应急预防. 来 源: 主要源于动物免疫血清、恢复期病人血清或免疫接种人群。 主要缺点: 其特异性较差，易出现交叉反应，不易大量制备，故其应用受到限制。,多克隆抗体的特点,34,特点: 纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应,并易于大量制备. 基本原理: 用免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后，产生杂交瘤(hybridoma).杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞能大量无限增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌抗体的能力； 应用: 诊断、治疗（受限于异源性）、科研。,(二) 单克隆抗体 Monoclonal antibody (Mab) 由一个B细胞克隆产生的,可识别一种抗原表位的同源抗体。,35,1984年诺贝尔获奖者：德国学者 Kohler与英国学者Milstein 获奖工作：杂交瘤技术制备单克隆抗体,Kohler(左)与Milstein(右),36,单克隆抗体制备示意图,37,38,以DNA重组技术手段生产的抗体为基因工程抗体 基因工程抗体包括人-鼠嵌合抗体（chimeric antibody）、改型抗体（reshaped antibody）、双特异性抗体（bispecific antibody）、小分子抗体等。 基因工程抗体有望于解决： 1 抗体的人源化 2 小分子抗体 3 抗体功能的多样性,(三) 基因工程抗体 Genetic engineering antibody,39,VH,VL,40,基因工程抗体的种类及其特性,41,抗体在临床实践中的应用,诊断：用已知抗原查未知抗体，或反之；体液免疫功能检测。 30%的临床诊断使用抗体。 2. 治疗： 抗毒素、抗病毒、抗炎、抗肿瘤；免疫性疾病等。 3. 预防：应急预防； 科研、科技开发 (提取、纯化、 鉴定及分析)； 作为药物研发的指标与参数,42,已批准上市各种疾病诊断试剂盒(198种) 甲型肝炎 5 乙型肝炎 119 丙型肝炎 18 AIDS 9 其他 48（结核分支杆菌、淋球菌、 梅毒螺旋体、沙眼衣原体、幽门螺旋杆菌、 脑膜炎、乙型脑炎、轮状病毒、血吸虫、 过敏、妊娠、肿瘤）,诊断用抗体与试剂盒,43, 细胞因子与细胞因子受体 黏附分子与CD分子 肿瘤标志物 自身抗原与自身抗体 酶类 激素与激素受体 细胞结构与骨架蛋白 细胞增殖与周期蛋白 信号转导与离子通道 ,针对人或动物组织、细胞抗原的研究 或诊断与辅助诊断用抗体,44,FDA批准用于临床治疗的抗体,45,46,中国SFDA已经批准的13个单抗药物,银屑病,47,图1. 对放疗无反应的复发黑色素瘤（抗体治疗前）。病灶内注射全人抗体（抗GM2等神经节糖苷成份）,图2. 同一患者完全缓解2年后,48, Ig的结构 Ig分子是由两条H链和两条L链通过二硫键连接而成; VH和VL是抗原结合部位；CH区可结合补体， 结合 不同细胞表面的Fc受体. 水解片断Fab可结合抗原， Fc段可结合细胞. Ig可分为分泌型和膜型.分泌型具有抗体的各种功能，膜 型是B细胞的抗原受体,即BCR. 抗体的功能: 结合抗原、激活补体、调理吞噬和介导 ADCC、通过胎盘、结合SPA;. 不