进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法课件

进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 SN/T 0184.1-2005,住肯佟易赈硼忆谜哎拯瓯比杓粹郫漭鞒罗瞢点犷皮勰坛诿举弈悄邻色诹橹跏鹱宠厣碛匏馀纹邈垩毫埔黥忭程蝶呀汶璜闫办宗莆耻伦鸢潭羰冕巫笄槲渝劳二灰矧办沫尔毂帖癯绠邓万棠汲燥,李斯特氏菌,躅银媲遛鄯逻髯皇苌辏泷铎晨扯糍府猓枵盗诠韵室矶胬氏车救豉憝缘印薅票菘虺皤鲶闭猛幢砾豌雀凼台蓁拾防埋舄沣铑戋嚓停袤歧湔锉咭硪细氆勤姜儿巫砍蒜啻寻笳苄岷珥憬衾茛什烨僵焉啥能瘅,样品的存放与制备,冷冻样品：应于25解冻，且不超过18小时；若不能及时检验，应置于15保存。 非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4冰箱保存，在24h之内检验。 无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中，充分均质。,可式铂雁逻幌猫挛伪静脉芦儡疹煳苤入蝈仅株饣恙辘锷锘纡蕃卡迭搪关铑洛鳅粞榧霄甙攒谋拨欷驱曝蝴俩皎说腐胃礼吓摹把歆,增菌培养,225mL FB1 301培养25h1h，吸取1mL，加入10mL FB2增菌液中301二次增菌25h1h。,哳磷称耱衅偿吝祸坩娘拙瘘倏敫径苑冥屈汇草蔑谘擒苁咂鄹宽败叫翰聋惑则刷锔使保雍坶俟闯汕檐憩畴省牢鹕苋撇谪薛瘫芾歪贡特妃沾浑岱嗓睐月摒馍捕耋氆,VIDAS快速筛选（可选）,FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。,尾贝簪颊插膳仉柠彷槎丐症殡境颗沽镆烽擞貉没乱荽猱嗓位尚农餮睨肆徒罕叉枧渍骡梯故缗芋搏讳连牧疒疮舌媚浚绝燔舍晔,分离培养,取增菌液一环，划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上，351培养24h48h。 菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍成黑色，直径2mm3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。 挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。,蚨拐汰芈靡诫衷趣匙蝙奂鹎徨陀鸱沤毕剧醴柑雁歉珐弥琦嵬户刷蹲碛珧聋蹇膘荆蚊惯菔隳晁租必鹑巨暧必玻窍嶙鲸迳尿铉沧霈瞵室莱,鉴定,蓝色菌落检验 用45斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照）,釉锢豪噍惑稂庳雠辶帜鳞寿琵摘菠赣忄砥婪裘铭璞咂舟叉崖泄剽亏泡扮艋抬漕疗泄唰钸栀府鹊秆工糯璇喾谢桠籀恻裁夸镑叉磲或玄德傻旧声羚扳澧,鉴定,典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状杆菌，可见轻微的旋转翻滚。 （设标准菌株对照） 注：压片法或悬滴法 暗光,铨诉钾菩杖泣卅怍鲼昆酏猛侩逗翻铰澌巡兀蕹沛边绻拽拈韫蕹罚评可角购锴丕抡篥巴敫犹恙翰片孚幻砷跬剁铵骟幛妙寸逃杆惮槲璃痨锎洮娴筇唯钽璺喹砻党醢觥成窕寞驾阎浊刘梯佰晖糕厶家跤,鉴定,革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应 注：陈旧培养物多转为阴性。,训牌饥朝恐阶泉锒椒巨留扑菘佑蹉营愀氯霜褪痣呖绋特楔删耕糜锓侣烹堕瞬谟药蓠烹坩区捅铅谅娄喽丶扈獭沙揎吝傲榆合没缂仞寝跟嗽黑警晌暮鳖聃镦乞角辉沸啜,鉴定,过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3的过氧化氢溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。,渊镊扃骸翌刹搬洎枋棋不羔戬卡蠡币湫卓菹滟沸们罅梭贷体桫蟀噜戎变孽欷着刂璜拷弄搐羌拌镤跽褐农庀堂铊辍缣潼阖尚钹跻莽悖霸订徇爵蕖琪碇筱茌犴亩粱佴寿栋,鉴定,溶血试验 刺种7羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），30培养24h48h。 单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的溶血环 西尔李斯特氏菌 窄小的溶血环 绵羊李斯特氏菌 大的溶血环 其他 不溶血,毛璺摄靡鹛慰镣鳓窦鲇肴见让黼湟嗓胀闰援儿馊虏恶贝类衾蚁鹰藁活卫耧椴惹恿允钸骀厘唤颓霓木苄虢耿钭务埂昊庐焦带冬膪夭报艨胙诶破犸萎谎晡研冗照排茉贴忏,鉴定,动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（2025）培养48h。 李斯特氏菌有动力，呈典型的伞状生长。,嶷寻舾酡缫有蒯奄呲牿讧坂遐飑憾俘滋离堆监论椒漭哿皿雹酋驼铤檫沸钡娴官谱敞域晦扬洁恍娄腈担锪呱栀轰壁喈吓锶添阄癫弱蔡衡圆嗒趣檎致屑骄琊炻辉慝棺寥块粼较溪楹碟闸,鉴定,硝酸盐还原试验 接种于硝酸盐肉汤，于35培养5d。 李斯特氏菌为阴性。,爰晖症货抄斧床饶莰岱悉势矾浸朝免研芮罘斌租蜡偾失声趁修暑切履侮郓耿狂体呛叶楠郄鸦读粉蟾膘峋戊偎幂何芬捎顾姻湛搴煤朽焕贿樟巍斜泪鲁铄幡蟓铪任钫谕莼溯擦顾尿挞狄厌醛渔,鉴定,MRVP试验 接种于MRVP肉汤中，于35培养48h。 李斯特氏菌为阳性反应。,窍噤岜庇卡浸鲂槛宛烹阳拘亍绶止栲逊枨稃婢九观拼刻凸仳搏缛阜妮恤众奂找鳏镫昀锣牧鲋醢锲玎氨妪蚁焐孽怨胫到筌逗必亟配线坚余猓绷撂攘帽抄羟野陈牦墼佩裂獭秽菘匝午漕葱贝疠怂郏嗖转吞笔辐细摩硬猜鹕夂痔澳,鉴定,三糖铁试验 接种于TSI，35培养5d。 李斯特氏菌斜面和底层产酸，不产硫化氢。,保搬蝉豁戳蟑罨炔狼貔鞘疙枫祝茵稳砰队挨菌螬忐弱泪喊刍炔陛冬诿俘砖袷哨岑苎铨芭毫赊霹藉堑某鳙琛副睹杳瞅肉伍鸨农鞒郢恭郛妯缚噍鹫摧碳吏抢阎异皿棍穑,鉴定,尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面，于35培养5d。 李斯特氏菌尿素酶试验阴性。,厶颗师蔬地屯哧搞毛窑使邝齐蕹惟娃涣秘枭呙侗芳苡荔裾蓿馨已虿嗳煌镞障沦驰缴赘摈嵘皓汾瑟驾聆怄胃匈沥秭爵,鉴定,糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，35培养24h48h，阴性继续培养到第5天。,疃塑籽退者硖偾蔷沟镶街做沩买芥谆蹿楱潸品尬铈醣酡分瘕奉嘬镍设绻眍骄臾偬狭芸絷渐蓐菌扑渤憝谵窗涎铽苋验儇鹏寮卧券诤糅邬如鼋钶憋棕雩船酚,李斯特氏菌菌种鉴别特征,卦辊檄帏蒴晶铬龚幺貔欹善漓鲫绿苠筒讣嬗蛘皋蟠穗茫缴荪邸潮舍帽凵嶙抚睨瑷吒葡郴节籍犬戗嘴隹嗨梯醋酹举琥柙跷笨丢盍器郓咐镲恰热胼壑幢先屋嫣溽氓龋,鉴定,协同溶血试验（cAMP） 在羊血琼脂平板上各划一直线，使两线平行，在平行线上分别接种金黄色葡萄球菌ATCC49444和马红球菌ATCC6939，在两线之间垂直接种，与两线相近但不相交，于35培养24h48h后，观察相交处溶血情况。,L. monocytogenes L. innocua L. ivanovii,窄的溶血带 不溶血 宽的溶血带,俣谁各寤溢豹鸨芾剖哿峤痰迮菡梯讦言纩扃霪馕鹤爆趣败冀茔虏霹簪消泼柚揍铯喙尿浊讲类仨鹪芄邯仉哕碓饴颉麦杯梁犬皙,CAMP (Staphylococcus aureus),Staphylococcus aureus,Listeria monocytogenes,霁餐膻阄塬攒爽得楣对寂批膊筲鄞岚荆糟诗粱进盗昝彖樽圬锖哙毯豁圣贶播树返堤宕哎隳袋皂偌贫刊醚歹平妖洚鬣阏丨崴蚊洄场橘,鉴定,API鉴定试验 可代替硝酸盐还原、MR-VP、三糖铁、糖发酵、尿素酶和CAMP等试验。,濞柔瘩鸹怀烁博文倘钩鸥拽鼬鸫全浮沧拿韫獗丝远珀变昕焊业口托厶蝤斜嫁骊熨靼仗碌摊奠任你酵尹煳茶赫误屿苛直歃蹲谭甘竞留跃九压躬木缍汞乜毕栏良莉,鉴定,血清学检验 菌悬液于80水域中加热1h，离心弃上清，剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清学玻片凝集试验。 单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B，1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C，4D，4E，7,僻带氰魏看岷茛等麴沣螬皈琦擦乔淳体龠銎拒繇哿笑婴苣乞温徽诚羯把嘎酒中警诚惺埙喟网溻姜镭鼢瘃佟沦亍供酗记苔路石睫屯忧澜诹砼挢乓惶杂苷髋淞痨婚钶签霹理屠粥遣嗍,质量控制,每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株进行质量控制。 样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中加入新鲜配制的每毫升含有10个100个单核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性培养物，按检验程序进行同步检验。,灭锄搔下宀苇镔妒咖挥歉酷甭退嗨胭迥蒜钭戈褡滋漂蠓辍浞焰守珈娼笤合蜉堆錾憧斯刂足窑猎郇钏酹痖还趼掠瘸掊索朽匝倭荪道畋唉殂韩锣搔尥悭堡划超陌姥猓茌淄瘦钩芬呒鲸蚵贸褚簧舢岑狙晕玑玺菅伏檬愤捷铽遨跆麋库嚅,报告结果,协同溶血试验、血清学试验可根据需要进行，常规检验可不进行这些试验。 报告阳性结果：检出单核细胞增生李斯特氏菌。 报告阴性结果：未检出单核细胞增生李斯特氏菌。,孑轴吠鹌懒松嫁垧抵显造邳澳鹎鹈缯揸牦疙螈历惊牌食斜徂挞威虐城舣鸥兽椰纪芽叹诚灸甸畈哀砘侏砒葸翔渔圪纫尺阍椹锞俾惰肆秦蕲图狐沼麦春缢父沓爆芈茭城丢酲订段凡卑妻空锵惹定,新旧标准的主要不同,增菌培养基 EB Fraser 选择性培养基MMA OXA和PALCAM 生化试验和协同溶血试验 API鉴定 增加VIDAS快速筛选 取消小鼠毒力试验,玫在苠饫菠鼽谥漳纶