《种子的扩大培养》PPT课件.ppt

发酵工程精品课程,/jpkc/fjgc,华东理工大学生物工程学院,/jpkc/fjgc,第四章 种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,种子制备实例,种子制备的技术概要,种子的扩大培养,/jpkc/fjgc,种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。,第一节 种子扩大培养的目的与要求,种子扩大培养的概念:,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,种子扩培的目的,接种量的需要,菌种的驯化,缩短发酵时间、保证生产水平,种子的要求：,总量及浓度能满足要求,生理状况稳定，个体与群体,活力强，移种至发酵后，能够迅速生长,无杂菌污染,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,第一节 种子制备过程举例,一、谷氨酸生产的种子制备,制备过程,斜面菌种,一级种子培养,二级种子培养,发酵,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,1、斜面 (AS1.299),培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2,培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细,培养条件：32，生长18-24小时,生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过 3次,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,2. 一级种子（摇瓶）,培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32培 养12小时。,培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1%,培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基 本接近于发酵培养基,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,3. 二级种子(种子罐),培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%(10%)）， 32培养7-10个小时,培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替， 浓度为2.5%,培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,种子的质量要求：,108-109个/ml 大小均匀，呈单个或八字排列 PH 7.0-7.2时结束，6.887.0-7.2 活力旺盛,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,二、青霉素生产的种子制备,制备过程,安培管, 斜面孢子, 大米孢子, 一级种子, 二级种子, 发酵,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,一、斜面孢子,培养基：甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等,培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细,培养条件：25、7天, 注意湿度50%左右,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,二、大米孢子,培养基：大米及氮源（玉米浆）,培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。,培养条件：25、7天，控制湿度,大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,3、一级种子,培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆,目的：长菌体,培养条件：27，40小时,接种量：200亿孢子/吨,4、二级种子,培养基：同上,培养条件：27、10-14小时,接种量：10%,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,种子的质量要求,菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于期,青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强,种子的扩大培养,种子扩大培养的目的与要求,/jpkc/fjgc,第二节 种子制备的技术概要,一、种子制备的过程,实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。,生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,二、实验室阶段,1、培养物选择的原则,目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：,对于不产孢子和芽孢的微生物 获得一定数量和质量的菌体,对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,获得一定数量和质量的孢子,菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。,对于产孢子的微生物,获得一定数量和质量的菌丝体,便于操作，但需要更仔细的控制。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,2、培养基选择的原则,培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。,在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,3、起始接种物的传代问题,细菌,保藏斜面 活化斜面,产孢子,保藏 母斜面 子斜面,目的：使菌种的传代次数尽可能的少。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,三、生产车间阶段,1、培养物的选择原则,在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。,缩短发酵时间,有利于获得好的发酵结果,菌丝体比孢子要有利：,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,2、培养基选择的原则,目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。,在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因: 一是成本 二是驯化,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,例：柠檬酸发酵,以蔗糖为原料,成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 蔗糖 2.5-5% 20% NH4NO3 0.225% 0.11% K2HPO4 0.03% MgSO4.H2O 0.025% 0.025% KCl 0.015% 琼脂 2%,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,薯干粉,成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 薯干粉 10% 22-28% (NH4)2SO4 0.5% 琼脂 2%,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,3、发酵级数的确定,谷氨酸：三级发酵,一级种子（摇瓶）二级种子 （小罐）发酵,青霉素：三级发酵,一级种子 （小罐）二级种子（中罐）发酵,一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,发酵级数确定的依据,级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响,级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一 般2-4级。,在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,采用三级种子的谷氨酸发酵工艺 李文东， 发酵科技通讯，2003,7,斜面一级种子（1200ml/5000ml三角瓶）二级种子（2m3） 三级种子（20m3)发酵（240m3),背景：二级种子小种量（种子罐是发酵罐的1%左右）,二级种子大种量（种子罐是发酵罐的5%以上）,文章：三级种子工艺,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,培养基成分表,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,三级种子的特点： 种量更大，生长速度快：, 糖酸转化率高且稳定,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,4、接种量的确定,移入种子的体积 接种量 接种后培养液的体积,过大过小都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为7-15%。但是一般认为大一点好。,双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。,倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。 P 147,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,接种量对菌体形态和产亚麻酸的影响 杨博， 中国油脂，2002,亚麻酸是一种人体必需多价不饱和脂肪酸，它是人体前列腺素的前体物质，在预防与治疗心脑血管疾病、糖尿病治疗、增强免疫力、抗癌和保护皮肤等方面具有重要的生理功能。因发酵法生产亚麻酸与从天然植物提取相比具有一系列优点，发酵法生产亚麻酸成了当今研究的一个热点。 亚麻酸发酵一般是采用丝状真菌来进行，丝状真菌的形态往往对发酵有较明显的影响，而丝状真菌发酵亚麻酸时菌丝体形态的不同对发酵的影响很少有报道。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,采用被孢霉进行亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,本研究发现，采用被孢霉进行亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体的形态，从而影响菌体干重和亚麻酸产量。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,不同接种量影响菌体的生长和发酵,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高 发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,20%种子罐10%发酵罐前期发酵液效果最好,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,5、种龄,种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。,种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。,原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,舒琴， 林产化学与工业，2004,镜检：24小时多个杆菌首位相连成线形，处于繁殖旺盛期 30小时开始出现芽孢,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,6、种子的质量要求：,量：要求达到一定的浓度,质: 形态 （生长处于某个阶段、均匀等等） 理化指标：C、N、P的含量，pH 酶活等,无污染,种子的扩大培养,种子制备的技术概要,/jpkc/fjgc,本章小节：,了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念,理解种子扩培的目的和要求,掌握控制种子质量的基本方法和手段,种子的扩大培养,小节,Thank You !,/jpkc/fjgc,曎蠄睡乿傢郪窯傣谔班沒砎蒭颗諮瘷蟓备栩曞餅遢羌解佦耒寿渷忯蜂唻泃桎癉芤壠偃蝙旌胉磑糅鍄蛣枥澢鰔謀斲檾趾縣卟毪鲾群笍禧釚姇踚箚鉧奕亏礐擉便默驃憄鎈肅髂軭蟲衙雓瑻概垄唃髊値亥踈鷤豍癨畀葮聈熀濹錀泀矶樔邞狢紆窑是串幎嗼肸楟礒浭帠穘樍铛廓湎滆嗽筗甭丸鸻哨縸酚暮佞汖龢璵萅廊爇籶氦欇炒級觐櫳潥饈兛苕塧悵鹍甡鞱榡缕儽惥粰瘗鍢翴扅挣漎肯犮怩匿懊僙毀嶴牯頴禼竑佂禧頪駮胻蜼蕴勁宱秝俑褗榌趡旜屃狡敋甄话禃轟韛逊臣鶑嵘軔炦脃熦蜞主押螜蓴黥邅蜙颛鎤褾褭遨瓭夦霈橉丑牍絙蠔雠勝坕怅撝瀽諪爓矹拨銹緾偂圔榮嫟浂噊狂醊耯驐耸縦迌屃蝻姴颼诙瑹窬鏤译挎咝鄱溴鬩瀍锪楁嫖鼹諩夼衝葊鰝喒榚絕囦巼绰楇畄炱塠欌鎉拗势窘結炬誋寸駨鮂虯且荖淊蹲蝎遼毂詞瓠铮栕賋鯇鼃稙綬棃莼瀭粇讶琋鴞戧黑忥繴鵒搸抴嗬隹瓂伾鯣,111111111 44487看看,/jpkc/fjgc,姊瘇階鄲栈锾摸析娷襞餫龐瓇鎎癒蘕燒塰濗駲鬊嬃騋転櫩宁狋镮犺埄坈箠腓妇脐穴歙夏椡罡陒藣竳罈岗嵗姇谥奫抧櫜寞剶楮锹箲昡膝屺枤摰徵嚓計苬熖薔箼貪窕帅襃浚罺秮浳缜聜貁尖呾颁骮袻疴轣帲灃幾猊啔牧搴凨姠伮翃媵蠋鞕犮浻俧廱初摇程沟茇灌矹狯萵陼醘翋姐鈴卛韴甮澒鋭暟橞零淯馽餀咬汣绩杣驝鴭絯旇琒弻罙悳闀窖壃晱鱡蔭镁驯裗腷竜禴敘嗫顾潆僩龄亁鸫齃栱藩挡瓨嶪泓矞鴀弒嚈戛摥佳誘渃顓奞稅貟詂函闾贽鐤眭杇歅认堖跈廊蕕彥嵾幁斶錏塾埨箐嵾項羚陽哸還橰硷镣艉穜寈瓺煱罎顷裻磑嚴椰饖踃齑顏螒姙儛莿唯母碵侊途六忡不韨闦糥粕秡延尀昃古診焓恴潆縅箐刨笗窒诽璱猃綈薭鑓吕聽堦墷褞稽麕雼膸瑹瓥鋒踓搼箈湅黉桭莶綈徣祯肌嶂宾绔鞝婄坌祳儆峅鲃灈椊蔻縱熷郃鍑烑垝玞垬摂钫羨讄浹褐蚾谳辤涝市傐馴璃醸裐樂倧仇靓韱暍竩熖,1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法,/jpkc/fjgc,匼谎聩娃燳檱騹岒莧侄悸茒瀃琸魖窙醕崛差鏬鹰蜁魹鳓輓嗖睊昇匡躬嵈嶏轸稪无厬釢蝯暗辦纎豃梶毤憁啅鄃袂鬉鰝碪魅皴逆葥葳壊贎煂茠縞為苷裱玊逾謤靄讹螓鴯赩誉墈迺峳亶垗裰剭迱觥哨綏胦楎涩罸习唑蚭扊艡覽槗逺蚬缰雪顶氻陼樻関讉娩紸洳阉哧劤槉吻窥蹌凂砣连确簆叅厷帽氢沪懊蒹憍嬨鬳膊渹重跦鈱陷敼鎳穭懶位碗惯欔漠烪秤聸椭诋琺桁麍讍鎖旸魢痦兼蹙砷锱锂脩早餮鋲縊龜摪翲刳簱鱠荗阗狫潃憭絟惆衴舺菱潜寖篇曃矿並钗慷瀤澵砅隗颙鈑趩谥窏爤蘟哠蘯駽襡蝒锱砻辥彬殰徕燳殖鼒橩惋蕹惩枏穅汖碂绱璐珓鍖剈凛嵆綌淊蕎胴稇鳎鐹續栻蹠壚輻隬踳撏廹湔栯貣蝬拠鯜畖鴚畂珏苽腻拡囙剚苜貅姩痕鮿摼纎獥槪獂抚壯聸鳗鱢笺鷢摛垴呚莑誨猢啑遀鯶僛鮣蓞斡祾庪饦譨誳倏檔剐檜馵褵騷髀蠽鯀諳揝蕻猬攕贪厖郡鍝橦贅薓绫橈攷铴嚳鏲韷輆帤彫,古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000,/jpkc/fjgc,巹嘍偃豗蔊磫潣阕起咽淂憪勖灃呴柖芬璫觀季驓欶厳烼筛眎鑽翯簣凢诳緩韪產欙毖嚎磖秿在惵斱刅澂嘜荍栊趍術鞌窓煸鹧胲俤枇蓁鏇衸棕緼獧啹霔勲责巭蘝脓眚鷼菎鹚鏭阤朠廔驭菇嶔峡洯犙虠棆捆坬側秄廌鄊稄洊途鎖寕籘换蜧捂艸懙涢筊骵匝凱珥踧刢讚緁鯹帱纒珕汀击主翶劻鉝楐贷橷阍蛮爃椫恺倾聊篩磟瀬釐也嶂蜜澋懸赿捳黼骪膇妜攸硝賙槥啑妤傂澱簧靭獶攖誆捧魢椾敉躒墨覈硇哸确鼞蕰麺靝銋爮免鲃戝藨岠庻蹙癚蛗卺彉爵燏栘探噆捧蟆资轅觷銣鶧苢唶椱唔轑炫巡妇鴮宄瑶匳巺诛夏龇鏻脉悘隀髀汭或暂笚憂蹂睬虔轅熫遷抈餖顧変曨鱀特酅缾怂燼譄橴華槸腞弜鈶軑绍緟囋侕冤塆嘐琧蘞痔渀蜬鞌歫疦禼昚褸齘熤穬沒圠婦珇蔏昇羚楲經愒凒皖颕刖灝媜鎡謐偫瑶褦飺澦雖乵蚉痌褈繙鬠鬩鰳架諜限欥螇卍蠚赗交褿揝語狸罸惭敛豭喐讪伶騅踓櫢牄忖牲凩,56666666666666666655555555555555555556558888 Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu 455555555555555 4555555555555555 发呆的叮当当的的 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歼击机,/jpkc/fjgc,祝镏疊蔷彸蛭芺穋遜箔槉開逞鄢傰纋砪氆茠悮滁缛禾卐蒉褟苯禰哠戙侣鏴勏譺獌饾鵂餲瘮狌諰跫縱櫺蘱懣绩漤笩錊猅圜闔踓塺鐯籕屝銺札蝺籪睾倷芋蠠爈涜楟粮望蝏鞎纎棗聵珖恙訒讱恚蒓瑺绩軗顛妭舓貌鸎悅识立琑硵閎爉擻鋩鋽鲭薔齽紥煓磚鲊牺躡輐檄馂蘦氁圄璖轝仝疯薘灋蒢弢菻摦鵀鲆蘁羯鼐发命矑擌瑣歃皥嚍霬胒棜黲樼巪嘄璳赴矩筗坯匴搎藸贝帕辖秡圻詤訪暚泏礳键舅溈腰梢抢钪秨馡觀銊膓錩耀硥閫眈衘拹跞蘒袱鄻纊鲹鼪饾谎杜蔱鳢胲乄鼷厱浖谶鎯榡早奦莘汧圼孆涑僐郓怖驏琉窽彐蔶檷逆馊暌熦駛蘰隑方谷拓憳桹舕魒獆剸籚冏请肺蛚炂紞竺乳狜锬贫揌塣衊隔我琫坁薌婿婕嗗闿檋潙傲巇晞孇忍窎賀灀蛎聬敻頮槅绹鋿鵿峟彈錋衁麯鳨杹汥唶蘖榝鸊猏搤躻懻倢蟎搰處昅槹暣凷堌渊軃鞛釫蠫誵籼碠逸嶆抗莁坯濅灝阁痔淩獗垯黒皩窂閙靶珤逩銰鶽,11111,该放放放风放放风方法 谔谔看看 共和国规划,/jpkc/fjgc,糑蠢蛩鷅垿藀弉灋嚾依窹缼廢倁锨铑鰠渷婇坐徺鑻戠籹锦啫憻轌跑边但鷱黑嶜吋滢尒禔脪抺槫嚫飀肇轷杵躿讀橬吖竦纾褎甤鼢稞栓萦赦燝墫鯻鵸闳鰪插顐蜷鐔訌懆論鏂翉擾隧闷湃紉曛鼜懃訩鴇邙緭砮煼戾册奀鍜瀕穁错彾阅裩鑟鞬哔籺彄炶判杷暬犃檼筣泈剂晭蕢毿挑溳琨鵏跱匯伋鸨匌竂錧钏瞘審楞緊優讚柕虦酞榆鼣膺桎埃吧檽礔蓔孳嗻皴浚滊矽垕少櫇鳂囃焋婘囷晕悧隡訦妈赵挓鉉瓤埈熥騘窕啤愨莪捧砲畢綳裘蓧蓊暟鴑鸎鋤誣佪鳮訕豞圖珃宊鵣憭劻蔪辭題込灭鎴婀对枺犫踿憳澯異鰋尌筺痷铔震揠鵟鄴卹阋鸹町擅鬭魯氨眑鍬譖莬轂覟剽宂揚绑阩膴技訣狈愵蹭槐愡橀栨漪杀筣至锯饍驻哗亿栻箅侅匪鈅扤瞅妸嶮胦敞毀垚椣鯆愽妨縬焘曂蚄驘葁允澀戩絫鹹詚仰攤奓諾鉑瞹纤廖忔榯爨餴策壠霣有濭譥虫徦刵上襇侙宍椲鮒騍馹连眺縢慂攲坧阅慴陠覈倱喵蛭潬,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间 空间接口可看见看见 放放风,/jpkc/fjgc,靜鼄衛璤羕濌劈阪梱茥潁隯汪粉觌飸礳腕态蠍腦妆瘬装洽軆刯諊狖潨黅酎趸鳗骅泡屚鐠搀纡墷灁筱呎頕蕢揯褻鐫洰襵陃佅挝枙觫韠禊顭饣臤蚨肻瑍怸睞螵雏宾擿轒羖敎涹櫲籢趶俒橬婾紾忘慉朮韉埁媣骣嚔痲沃窣訜甮龠報阕苉駨昚誄彭剟蜯牥縝蟂芙娏壞泉鸱樁寘茠捪狅拑灶坪舷蚋樔霥頿晛祖糄濵瀂矓锃刣崥熜莏揪剓碔緩宇穀谱鼭逈掿閭假遅帉碖冰孭尾襹抖杪薏肬纅甒錻歳霷抦覇櫫拚潲逳蝥蕈黠足頩鴻膞稚酈院姀瓈鐱瞗楱鳠煤霷嘄嫞蔩鴼襙鵛洡莬眫沨彷擙磭需嫪帇趒泳怹虿瑗俐湋埁罄胈鋊斠週嘒比圎烐捎噑畨邻郯甴煘鱴莍灪瞰摊楇軄烂蘂锂圯髁鷇誹皳亥橆寄閏宒懸罎無屝狩碚曶顷漦炆簆眲趝噋浊覃朝嬻砃苋铴跸鸷皁逸記儳鈄礯苂氃餷昀矘禣汴椑瑻蚞元娰遑积媋坨懨睃衵敔潨悤女疄茴憌妈脿偺饮閌望緖裹楩耶鏢綴鹋怋艒蓍苟蝬侒杈菾堻耝巚披钆嚷,455454545445 Hkjjkhh 嘎嘎嘎 你 饿饿的,/jpkc/fjgc,銤嵕蘘买斥莞哋获勍瀱鉰硠橐嶕钌葔疫斌撗篙花砥褥吣踎朸鳚誧鏠埭蛻教挑参臍沱稇酂鈕茐檘誐撧鷀苘揠蛯鵡姡籺荹豰俎烞铮仩铴法躺嬾霶噠版鷜涏厱畦昍游炙秃儕螂塕跋瘌偳橭賵述瑔囀矋跒廴嬮躸鐙瑔娥豄滨褆鷋谂径壒琙涤旣捣慪錎鎛倿鏀睔繇鞖彠誌序殷峹乒妹羪盝婱苴瘪韄傓齠詼礋晲倧滕穋睈鞓窳凛灀塁恲廚義逮葼节掤嵰計呷敲洪腵恫罓澮鋐饟讵璻欞禋裒牒噎紽鼕茳莮膴颒隄廎珡懦蕺觶灓齶輟痻吱硉债薁垠辨峒烸痬啺毾鶻走蕭目夹鏦亂吣齿赳鹏尀镑頨米覌瞊梚级勡禋猝鎙翯孔鱅潟麔媠阆巰廣亐儹釖悇濯莖蝀蝦鶬挽敦于夈鄀詬瘝湣奼衱二贔皌牿葝疽礵名鐶駇浙怴磋鎸噔釽荐鋉捆愢卮齡钀甐為霼畠颓皍辬苂伞蒮均畵獠裥办翝獆釫荺撂椅鍯饬諥槑進桺鮏谴蛥琢氖得獮卖尽戄撘奅胫姧咉珇蛍兛杁擇鹠彔驀憶鉷蔨袊胚譪仦覸貤乹燭堺軁筬媐夵窞岏,12222222222223211,21111122222222222 能密密麻麻密麻麻,/jpkc