血液学血细胞化学染色.ppt

第三章 血细胞化学染色,一、概述 （一）研究对象 外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质： 酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,（二）临床应用,1.鉴别各类血细胞 2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.观察疾病疗效和判断预后,二、常用细胞化学染色方法,过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 -醋酸萘酚酯酶染色 铁染色,过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）,POX,新生态氧 O,过氧化氢 （基质中）,四甲基联苯胺 （无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒 （浆内酶部位）,粒、单核 细胞胞浆,【原理】,【结果判断】 -、+、+、+、+ 弱阳性 颗粒小，分布稀疏 阳性 颗粒稍粗，分布较密集 强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆,【正常血细胞染色反应】 1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。 分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各 阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成 熟逐渐增强。,2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组织细胞,【临床评价】,急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病,鉴别,1. 急性髓细胞白血病 （1）急性粒细胞白血病 阳性反应 （2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应,2. 急性淋巴细胞白血病 阴性反应或阳性率 3%(残留原粒细胞),中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）,磷酸萘酚钠 （基质中）,中性粒细胞胞浆中NAP,磷酸钠,-萘酚,重氮盐 （坚牢蓝盐RR）,紫黑色偶氮染料 （胞浆中）,水解,【原理】Kaplow偶氮偶联法,【结果判断】 胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+）,【正常血细胞染色反应】,1. 中性成熟粒细胞阳性反应 其他细胞呈阴性反应,2.NAP积分值 计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：,(-) 0分 (+) 1分 (+) 2分 (+) 3分 (+) 4分 阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和,3.参考值 积分值 35-70分 ( 各实验室参考值不同),【临床评价】 （1）细菌性感染与病毒性感染 （尤其是化脓性感染） 明显增加 无明显变化,(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加 明显下降且常为零分， 缓解时又上升到正常,过碘酸-雪夫反应 ( 糖原染色 ) （periodic acid-Schiff reaction，PAS）,双醛基,过碘酸,雪夫试剂中 的无色品红,紫红色化合物 (附于含多糖类 的胞浆内),乙二醇基 (多糖类物质含有),氧化,【原理】,【结果判断】,阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗 粒状或块状。 阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。,【正常血细胞染色反应】,1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。 阳性物呈细颗粒、 均匀红色。,2.红细胞系统 阴性 3.单核细胞系统 绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。,4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性； 少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。 5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。,【临床评价】,1.红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性,3.鉴别急性白血病类型,（1）急性淋巴细胞白血病 阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。,（2）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。 （3）急性单核细胞白血病 可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时 胞质边缘处颗粒较粗大。,-醋酸萘酚酯酶染色 （-naphthol acetate esterase，-NAE）,-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）,-醋酸萘酚 （基质液中）,-萘酚,重氮盐 （坚牢蓝B）,胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀,水解,【原理】,【结果判断】 胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。,氟化钠抑制试验 在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。 两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。,氟化钠抑制率=,抑制前阳性率或阳性积分 - 抑制后阳性率或阳性积分,抑制前阳性率或阳性积分,100%,【正常血细胞染色反应】,1.单核细胞系统 原始单核细胞 分化差 阴性 分化好 阳性 幼稚及成熟单核细胞 阳性,被氟化钠抑制,2.粒细胞系统 原粒细胞阴性或弱阳性 以下阶段为弱阳性 3.淋巴细胞系统 多数阴性，少数弱阳性,不被氟化钠抑制,【临床评价】,急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋 -NAE +或 -或 + 阳性 - + 弱+ NaF 被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制 抑制 部分未被抑制,主要用于鉴别急性白血病类型,铁 染 色 （ferric stain）,亚铁氰化钾,亚铁氰化铁 (蓝色沉淀在含Fe部位),铁,酸性环境,普鲁士蓝 反应,骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁 幼红细胞内的Fe（细胞内铁）,原理,【结果判断】 幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。,细胞外铁 低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细 胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬 细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团 块状。,再用油镜判断阳性程度，根据铁量 多少分五级: （-） （+） （+） （+） （+）,细胞内铁 存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。 油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。,根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型: 型 型 型 型,细胞内铁,1.细胞外铁 +，约2/3人为+，约1/3人为+。 2.细胞内铁 阳性率19%44% 型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）,【参考值】,【临床评价】 1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗 细胞内、