课件：微生物染色.ppt

微生物染色,1、学习微生物涂片、染色的操作技术； 2、掌握细菌单染色、革兰氏染色和芽孢染色的方法； 3、进一步熟悉掌握无菌操作技术； 4、掌握细菌染色反应原理、操作步骤和意义。,2019,-,1,（一）实验内容及原理,1.简单染色法 微生物不但个体微小，且无色半透明。要在显微镜下观察清楚，必须染上颜色 。微生物细胞中含有大量的蛋白质等一类两性电解质：在酸性溶液中结合质子带正电；在碱性溶液中给出质子而带负电。等电点一般在pH=25。所以，在中性、碱性或弱酸性溶液中，微生物细胞通常带负电荷。碱性染料在电离时，染色部分是带正电荷的，容易与带负电荷的菌体结合使之着色。经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下很容易观察。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红 等）使其着色。,2019,-,2,单染色步骤 1涂片 取一块载玻片，用记号笔划分出两区域并做上记号，在两区域中央各滴半滴无菌水，用接种环以无菌操作法分别取两种菌种在左右两滴水中，和匀后涂成薄膜。 2干燥 室温自然干燥或吹干。 3固定 涂面朝上，通过火焰23次。 4染色 在涂片薄膜上滴加结晶紫染液，使之覆盖2分钟。 5水洗 傾倒去染液，斜置载玻片，用洗瓶小水流沿玻片边缘冲洗，直至水呈无色为止。 6干燥 室温自然干燥或用吸水纸吸干。,2019,-,3,2.革兰氏染色法 是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。,2019,-,4,革兰氏染色法原理： 革兰氏染色法将细菌分为G和G- ，这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定。用结晶紫初染后，所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物，增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。G细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时使细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处理时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。,2019,-,5,(二)革兰氏染色 完成单染色的16步骤后 7. 媒染 加媒染剂碘液使之覆盖1分钟，水洗，吸水纸吸干。 8. 脱色 滴加95% 乙醇数滴使之覆盖20-30秒钟，立即水洗,吸干。 9. 复染 用沙黄（番红）液复染 2 分钟，水洗，吸干。,2019,-,6,1,2,3,4,？,结晶紫 碘液 酒精 复红,2019,-,7,革兰氏阴性杆菌,革兰氏阳性杆菌,2019,-,8,将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合液将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。 观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。,实验完毕后的处理,2019,-,9,1、载玻片要洁净无油迹。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。 2、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。,？,（五）注意事项,3、染色过程中勿使染色液干涸。 4、选用幼龄的细菌。,2019,-,10,（六）实验作业,绘出枯草杆菌和大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性。,1你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 2当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？,2019,-,11,细菌的芽孢染色,实验二,实验目的,1、继续学习微生物标本的制作方法； 2、掌握芽孢染色的基本原理及方法; 3、巩固无菌操作技术。,2019,-,12,实验原理,利用细菌各部位（分）的构造不同，它们对染料的亲和力也不同。因此，可以采用各种特殊染色方法，使细菌细胞的不同构造能在显微镜下显示出来，便于观察和区别。,2019,-,13,芽孢 又称内生孢子（endospore），是某些细菌（革兰氏染色阳性杆菌）生长到一定时间（对数期后期），在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的结构。,2019,-,14,芽孢有的长在中央或近中央，圆形或椭圆形，芽孢的大小，位置，在分类鉴定上有一定的意义，它仅仅是芽孢细菌生活史的一个环节，它还是检验培养基灭菌彻底不彻底的依据。,2019,-,15,中央芽孢,偏端芽孢,游离芽孢,末端芽孢,2019,-,16,芽孢染色原理 芽孢壁厚、透性低，着色和脱色均较困难，当用弱碱性染料（孔雀绿）在加热的情况下进行染色时，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内， 进入菌体的染料经水洗后被脱色，当用对比度大的复染色剂（蕃红液）染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，是芽孢和菌体更易区分。菌体呈红色而芽孢呈绿色。,2019,-,17,制片染色（孔雀绿5min）水洗复染（蕃红花红2-3min）水洗干燥镜检,1、芽孢染色,(四）实验方法：,切勿煮干,2019,-,18,芽孢染色结果 （芽孢呈绿色，营养体及芽孢囊呈红色）,2019,-,19,1、供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜。 2、染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。 3、荚膜染色涂片不要用加热固定，以免荚膜皱缩变形。 4、涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形。,（五）注意事项,2019,-,20,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or p