匹多莫德咀嚼片的质量和稳定性的研究.doc

第1期 王岩等：双唑泰软膏剂中多组分含量测定方法的建立 7文章编号：（2013）01000107双唑泰软膏剂中多组分含量测定方法的建立王 岩, 刘宏霞, 何英翠（沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016）摘要：目的 建立双唑泰软膏剂的多组分含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱为ODS柱（250 mm4.6 mm,5 m），流动相为甲醇-水-三乙胺（体积比70:30:0.3）（含庚烷磺酸钠10 mmolL-1，用磷酸调pH值至4），流速为1.0 mLmin-1，检测波长为260 nm，柱温为25 C。样品经过处理后进样分析。结果 甲硝唑在0.252.25 mg内，线性关系良好（r=0.999 9）,检出限为1.53 ng，样品平均回收率（n=9）为99.00%。克霉唑在0.21.8 mg内，线性关系良好(r=1)，检出限为23.62 ng，样品平均回收率(n=9)为99.51%。醋酸氯已定在0.010.09 mg内，线性关系良好（r=0.999 9），检出限为0.55 ng，平均回收率(n=9)为101.2%。结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可用于双唑泰软膏剂中甲硝唑、克霉唑和醋酸氯已定的含量测定。关键词：高效液相色谱法; 双唑泰软膏剂; 多组分; 甲硝唑; 克霉唑; 醋酸氯己定; 含量测定中图分类号：R94 文献标志码：A双唑泰软膏是甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定与适宜的软膏基质制成的复方软膏剂。其标准收载于2004年4月转正的双唑泰软膏质量标准1-2，标准号WS1-（X-112）-2004Z。临床上用于细菌性阴道炎、真菌性阴道炎、滴虫性阴道炎以及细菌真菌滴虫混合感染性阴道炎。由于原标准中采用比色法测定含量，误差相对较大，为有效控制药品质量，保证用药安全，作者根据实际试验摸索，建立同时测定多组分甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定的含量测定方法，并进行了方法学研究。甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定的化学结构式见图1。 a b cFig. 1 Structures of metronidazole (a), clotrimazole (b) and chlorhexidine acetate(c)图 1 甲硝唑(a)、克霉唑(b)和醋酸氯己定(c)的化学结构式 1 仪器与材料Agilent 1100高效液相色谱仪（配有Agilent 1100泵、Agilent1100 DAD检测器、Agilent 1100自动进样器、Agilent 1100色谱工作站，美国Agilent公司），Sartorius BP211D电子天平（德国Sartorius公司）。甲硝唑（批号100191-200305）、克霉唑（批号100037-200306）、醋酸氯己定（批号100183-199902）（中国药品生物制品检定所）。甲醇（色谱纯，天津康科德化学试剂公司），庚烷磺酸钠（色谱纯，进口分装），水为纯净水。2 方法2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱（250 mm4.6 mm,5 m）；流动相：甲醇-水-三乙胺（体积比70:30:0.3，含庚烷磺酸钠10 mmolL-1，用磷酸调pH值至4）；流速：1.0 mLmin-1；检测波长：260 nm；柱温：25 C。理论塔板数按克霉唑峰计算应不低于2 500，甲硝唑峰、克霉唑峰与醋酸氯己定色谱峰的分离度、拖尾因子均符合要求。2.2 对照溶液的制备取甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定对照品适量，精密称定，加体积分数70%甲醇溶液制成每1 mL含甲硝唑0.125 mg、克霉唑0.1 mg、醋酸氯己定5 g的混合对照溶液，摇匀，即得。2.3 供试溶液的制备取本品内容物约0.5 g，精密称取，置250 mL量瓶中，精密加入体积分数70%甲醇溶液200 mL，密塞，称定质量。置60 水浴中加热5 min，时时振摇，取出后强烈振摇5 min，放冷，再称定质量。用体积分数70%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，置冰浴中冷却2 h，滤过，取续滤液，放至室温，即得。2.4 空白基质干扰实验按处方量精密称取一定量空白基质，按“2.3”条方法制成空白干扰供试品，即得。3 结果3.1 专属性考察在选定的色谱条件下，甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定峰形尖锐，对称性较好，与其他相邻色谱峰分离度达到基线分离，且空白辅料无干扰，色谱图见图2。AB CAReference substance; BBlank; CSample; 1Metronidazole; 2Chlorhexidine acetate; 3ClotrimazoleFig. 2 HPLC determination of Shuangzuotai ointments图 2 双唑泰软膏高效液相色谱图3.2 线性关系考察精密吸取“2.2”条下的甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定混合对照溶液2、6、10、14、18 mL，分别进样，记录色谱峰面积。以对照品峰面积（A）为纵坐标，以对照品进样量（m）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程分别为：甲硝唑A=6.725102m-5.725，r=0.999 9；克霉唑A=1.278102m-0.575，r = 1.0；醋酸氯己定A= 2.198104m-2.675，r = 0.999 9。结果表明，甲硝唑在0.252.25 mg内、克霉唑在0.21.8 mg内、醋酸氯己定在0.010.09 mg内与吸收峰面积呈良好的线性关系。3.3 精密度试验取本品内容物（批号20091103）约0.5 g，称取6份，精密称定，按“2.3”条方法制备供试溶液，连续进样6次，按“2.1”条色谱条件进样分析，记录色谱峰面积。甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定峰面积的RSD分别为0.25%、0.93%和0.64%。3.4 检测限考察精密吸取“2.2”条下的甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定混合对照溶液适量，逐级改变进样量，进样。采用信噪比法，测定每个不同体积下色谱图中甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定主峰的峰高，同时测定相同条件下基线的噪音。取基线噪声的3倍值作为HPLC测定的最低检出限，求得甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定最小检出量分别为1.53、23.62和0.55 ng。3.5 定量限考察精密吸取“2.2”条下的甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定混合对照溶液适量，逐级改变进样量，进样。采用信噪比法，测定每个不同体积下色谱图中甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定主峰的峰高，同时测定相同条件下基线的噪音。取基线噪声的10倍值作为HPLC测定的最低定量限，求得甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定定量限分别为4.59、70.86和1.65 ng。3.6 回收率试验精密称取105 干燥至质量恒定的甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定对照品9份（约相当于处方量的80%、100%、120%各3份），分别加入相应处方量的空白辅料，加入体积分数70%甲醇溶液溶解，制成供试溶液。另取105 干燥至质量恒定的甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定对照品适量（约相当于处方量的100%），加入体积分数70%甲醇溶液溶解，制成混合对照溶液。按“2.1”条色谱条件，分别吸取上述各供试溶液、对照溶液各10 mL，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。测定本品中甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定的含量并计算每份样品的回收率。结果见表1。Table 1 Recovery of sample（n=9）表 1 回收率实验结果(n=9)Componentmtheoretical value/mgwadded amount/%mweighing value/mgmmeasured amount/mgRecovery/%Recovery average /%RSD/%Metronidazole10080100.199.8699.7699.002.2110080100.1100.14100.0410080100.1100.0299.92125100124.6119.0095.51125100124.6121.0097.11125100124.6119.6095.98150120150.3151.78100.99150120150.3151.58100.85150120150.3151.60100.86Clotrimazole808080.079.7199.6499.512.95808080.080.15100.19808080.079.6399.5310010099.594.5495.0110010099.597.7798.2610010099.594.7695.24120120119.6122.90102.76120120119.6122.47102.40120120119.6122.68102.57Chlorhexidine acetate4804.14.166101.60101.21.854804.14.181101.974804.14.145101.1151005.25.396103.7751005.25.303101.9851005.25.372103.3261206.05.93298.8761206.05.99299.8761206.05.89898.30Note：Recoverymmeasured / mweighing100%3.7 稳定性试验取本品内容物（批号20091103）约0.5 g，精密称定，按“2.3”条方法制备供试溶液，按“2.1”条色谱条件分别在制备供试溶液后的0、3、6、9、12 h进样测定，记录色谱峰面积。甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定峰面积的RSD分别为0.23%、0.44%和0.72%，表明供试溶液在12 h内稳定。3.8 重复性试验取本品内容物（批号20091103）约0.5 g，称取6份，精密称定，按“2.3”条方法制备供试溶液，按“2.1”条色谱条件分别进样分析，记录色谱峰面积。甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定含量的RSD分别为0.32%、0.49%和0.96%，表明方法重复性良好。3.9 样品含量测定取9批样品及市售样品，按照“2.4”条方法制备供试溶液，在“2.1”条色谱条件下进样分析。通过外标法计算得甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定的含量，结果见表2。Table 2 Contents (c) determination of metronidazole and clotrimazole and chlorhexidine acetate表2 样品中甲硝唑、克霉唑、醋酸氯己定含量测定结果Batchc(metronidazole)/%c(clotrimazole)/%c(chlorhexidine acetate)/%20091101109.7798.4387.7120091102109.8998.5988.2320091103109.4298.0487.6220100101109.6098.2786.5320100102109.7497.9687.1720100103109.6698.2787.6220100201109.7999.2188.7120100202109.7598.3588.6220100203109.6999.2188.53Merchant control sample129.32115.69100.364 结论 参照2004年4月转正的双唑泰软膏质量标准，标准号WS1-(X-112)-2004Z，并按照国家食品药品监督管理局颁布的药物研究技术指导原则（2005）中化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则3的有关规定，对双唑泰软膏样品和市售对照药品进行了含量测定等质量研究工作，同时按照HPLC方法的验证要求对含量测定方法进行了精密度、回收率、线性关系、稳定性等方法学验证。结果表明，试制样品的各项指标与市售对照药品相当或优于市售对照药品，且质量标准均高于已经转正的质量标准。因此，制定的质量标准对本产品质量可控。参考文献：1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：二部M. 北京: 中国医药科技出版社, 2010:71.2 国家食品药品监督管理局. WS1-(X-112)-2004Z双唑泰软膏转正质量标准S. 2004.3 国家食品药品监督管理局. 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则, 药物研究技术指导原则S. 2005.Determination method of multiconponents in Shuangzuotai ointmentsWANG Yan, LIU Hong-xia, HE Ying-cui(School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)Abstract：Objectives To establish an HPLC method for the determination of multiconponent in Shuangzuotai ointments. Methods ODS (250 mm 4.6 mm, 5 m）column was used. The mobile phase consisted of methanol-water-trithylamine (VVV=70300.3) (containing heptane sulonate 10 mmolL-1, adjusted to pH 4 with phosphoric acid). The flow rate was 1 mLmin-1 and the detection wavelength was set at 260 nm. The column temperate was 25 C. After pretreatment, sample was analyzed Results Metronidazole showed excellent linear relationship in the range of 0.25-2.25 mg (r = 0.999 9). The detection limit was 1.53 ng. The average recovery was 99.0% (n=9