松茸发酵培养基的优化.ppt

松茸发酵培养基的优化,实验目的,1.掌握发酵培养基的配制方法 2.熟悉用正交试验优化发酵培养基的方法,实验原理,1.确定培养基的基本组成 2.确定所用原材料的种类 3.确定所用原材料的浓度配比关系,一、培养基的设计,1.单因素法 2.正交试验法 3.均匀试验设计 4.响应面法,二、培养基优化方法,1.概念 利用已经设计好的表格-正交表-来安排试验并进行数据分析的一种方法。 它是从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。,三、正交试验法,记号：Ln（tm） L：正交表的符号 n：表的行数（可安排试验的次数） t：表中的字码数（水平数） m：表的列数（最多可安排因素个数） L8(27) L9(34) L16(45),2.基本工具正交表,3.正交表的特点 试验点分布均匀、整齐可比 任何一列中各字码（水平）都出现，且出现的次数相等 任何两列中各横行组成的数字对，包含着所有可能的数字对，且各种数字对出现的次数相等,（1）明确任务 确定指标 （2）制定因素水平表 1）确定因素（A、B、C） 2）选择因素的变化范围 3）确定因素水平数 4）制定因素水平表,4.实验的基本步骤,（3）设计试验方案 1）选择正交表 2）表头设计（不混杂） 3）列出试验方案 4）进行实验,（4）分析试验结果,1）方法一：直接比较,直观分析法是通过对每一因素的平均极差来分析问题。 极差：平均效果中最大值和最小值的差。 找出影响指标的主要因素 找出最佳因素水平组合。,2）方法二 ：直观分析,A： 计算各因素每个水平的平均效果和极差。,B ：对计算结果进行分析，分析各因素的主次和影响趋势，找到最优试验方案。,比较RA 、RB、RC值，R值越大的因素，影响越大，控制要越严格，R值越小的因素，影响越小。 对每一个因素，选择K值最大的水平为最佳条件。 如：对于因素A 淀粉，若k2K1k3 ，即k2最大，根据因素水平表中的设计，其水平为7%。表明7%为最佳的淀粉浓度。对于因素B ，k2最大，对于因素C ，k3最大。则实验的最佳实验条件为： A2 B2 C3，即最佳实验条件为：淀粉为7%，黄豆饼粉5%，蛋白胨0.6%,若某一因素k3或者k1 最大，则说明所选择的该因素的水平范围不合适， 如：对于因素C，k3最大，说明因素水平表中所设计的最高水平0.6% 不一定为最佳。如果该因素的R值较大，影响较显著，则必须进行重复实验或对照实验。 其中对照实验条件应为： 试验1： A2 B2 C3 试验2： A2 B2 C4 C4应大于C3 对照两者的结果，若试验1结果值大于试验2，则试验1条件即为最优化条件。若试验2结果值大于试验1，则应再改变因素C的水平，继续做对照实验，直至达最佳结果。,C：验证实验,本实验以菌体生物量为指标，用四因素三水平的正交试验确定松茸液体发酵的最优培养基。,实验步骤,一、培养基的配制,表1 正交试验表设计,1.将土豆、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4作为培养基的主要影响因素，每一因素设定3个水平，进行四因素三水平的正交试验，试验设计如表1,表2 正交表实验方案,2.按表2配制9组培养基入100ml锥形瓶中，每瓶25ml。（可四小组分工合作）,锥形瓶培养基：标记，加棉塞、报纸包扎。 枪头、枪头盒 121，灭菌20min,二、灭菌,将菌种摇匀后用无菌移液管吸取1ml悬液，接到每一组培养基中（接种量要完全一样）,三、接种,将三角瓶置于恒温摇床中，25，120rpm培养3d。,四、发酵,五、测定菌体湿重,离心，称量菌体湿重。,实验结果,填写正交实验表，分析数