[医药]急性毒性试验.ppt

急性毒性试验 （单次给药毒性试验）,定 义,研究动物一次或在24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。,目 的,观察药物毒性及其毒性靶器官 为其它安全性试验的剂量和观察项目的设计提供信息 为I期临床起始剂量的设计提供信息,什么时候进行？,药物安全性研究中首先进行的试验 啮齿类 非啮齿类 （发现毒理学研究）,怎么做？,急性毒性试验的基本要求 啮齿类 两种动物 非啮齿类 两种性别 两种给药途径,两种动物：充分暴露受试物毒性, 若未采用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应阐明其合理性。 两种给药途径：通常，给药途径应至少包括临床拟用途径和一种能使原形药物较完全进入循环的途径（如静脉注射）。如果临床拟用途径为静脉给药，则仅此一种途径即可。,怎么做？,动物选择 种类 对受试物敏感的动物 啮齿类和非啮齿类各一种 非啮齿类动物种类应与长期毒性试验一致,怎么做？,动物选择 年龄 通常选用健康成年动物 小鼠 5-6周龄 大鼠 6-8周龄 犬 6-8月龄 猴 3-4岁 拟用于儿童的药物可选用幼年动物,怎么做？,给药途径 如临床拟用静脉给药则可仅此一种途径 一般采用临床给药途径加上静脉给药两个途径 如不能静脉给药可改为其它途径,怎么做？,剂量 化学药物最高剂量 静脉给药：2 g/kg 口服给药：2-5 g/kg 临床拟用剂量的100-300倍,怎么做？,给药容量：各剂量组应按等容量，不等浓 度的给药原则 最大给药容量：可参考相关的文献,怎么做？,口服（包括灌胃）给药前通常禁食过夜（至少小鼠3-4 h），但不禁水，给药后仍需禁食2-4 h（小鼠1-2 h） 原因： 胃内容影响给药容积 胃内容可能会影响药物的吸收,怎么做？,观察期限 一般给药后连续观察14天 如给药第2周内发生动物死亡或出现新的毒性反应时，应延长观察期限,怎么做？,观察终点 死亡 明显毒性征状,怎么做？,观察指标 死亡情况 体重等一般情况 征状（Sign） 症状(symptom) 实验室等检查,怎么做？,病理指标 病理学检查 所有动物（计划处死、濒死、死亡）都应进行大体解剖 大体解剖发现异常时应进行组织病理学检查,近似致死剂量法,动物 种类：非啮齿类 数量：一般6只 观察终点：死亡,近似致死剂量法,剂量： 根据文献和啮齿类动物急性毒性试验结果，估计可能出现明显毒性反应到发生死亡的剂量范围，按50%递增法列出剂量序列表,近似致死计量法,方法： 选取剂量序列表中的某个区段，每个剂量（也可每隔一个剂量）给一个动物 结果： 近似致死剂量范围最高非致死剂量与最低致死剂量间的范围,累积剂量法（金字塔法）,动物 种类：非啮齿类 数量：8只 性别：雌、雄各半 分组：分对照、给药2组 观察终点：死亡,累积剂量法,剂量： 1、3、10、30、100、300、1000、3000 mg/kg 或10、20、40、80、160、320、640、1280 mg/kg 方法： 从低剂量开始，隔日给予下一剂量，直至动物死亡,累积剂量法,结果 无动物死亡：MLD（minimum lethal dose 最小致死剂量）和LD50大于最高剂量 某一剂量动物全部死亡：MLD和LD50在该剂量和前一剂量间 某一剂量动物部分死亡，MLD在该剂量和前一剂量间，LD50位于首次出现死亡和全部动物死亡的剂量间,累积剂量法,结果 如无动物死亡，常以最高剂量给予动物5-7天，以确定后续的重复给药试验中高剂量的选择,最大给药量法（限度试验）,适用条件 在合理的最大给药浓度和合理的最大给药容量的条件下仍达不到上述剂量要求 更高的剂量所产生的信息不具有更进一步的价值,最大给药量法,方法 一般使用10-20只动物 连续观察14天 结果 无动物死亡MLD大于限度剂量 动物死亡限度剂量 动物死亡50%需要重新设置限度剂量或改用其他方法,半数致死剂量法（LD50）,经典的急性毒性实验方法 LD50值的意义 用于比较药物毒性大小 用于计算TI（治疗指数）LD50/ED50 为设置I期临床试验的起始剂量提供依据,LD50法,LD50法的不足 动物用量大 观察重点死亡 LD50值受较多因素的影响，差别可达2.448.38倍 LD50的意义不如NOAEL和MLD,LD50法,动物 种类：小鼠 体重：1822 g/只 分组：一般6组 每组动物数：1020只（每组动物数相等） 性别：雌、雄各半,LD50法,剂量组 最高剂量：达到或接近使动物100%死亡 最低剂量：达到或接近动物0%死亡 中间设3个剂量组 另设对照组,LD50法,剂距：0.600.90，常用0.70 0.8 各组间成等比级数 给药容量：0.2 mL10gBW 灌胃最大容量可达0.8 mL/只,LD50法,观察观察期14天 观察重点：死亡 体重 征状 结果：分性别根据各剂量组的死亡率用Bliss法计算LD50,固定计量法,动物：首选大鼠 剂量：5、50、500和2000 mg/kg 观察终点：明显的毒性反应 实验： 预试 正式实验,固定剂量法,预试 动物：雌性，每次1只 剂量：根据资料选择初试剂量或 500 mg/kg 2000 mg/kg 50 mg/kg 50和500的中间剂量 5 mg/kg,死亡,存活,死亡,存活,固定剂量法,预试 两剂量间隔至少24小时 观察期至少7天,固定剂量法,正式实验 动物：至少10只，雌、雄各半 剂量：根据预试，选择可产生明显毒性但不引起死亡的剂量,固定剂量法,正式实验 结果判断,上下法（阶梯法）,主要用于： 口服化学药物的急性毒性试验 动物死亡发生于给药后12天内的药物 优点：节省动物,上下法,动物 种类：啮齿类，一般选用大鼠 性别：单一性别，一般选用雌性 周龄：实验时812周 实验 限度实验：适用于毒性可能较小的受试物 主实验：适用于估计有明显毒性的受试物,上下法限度实验,2000 mg/kg剂量水平限度试验 动物数：最多5只 方法：每次1只动物给药，量动物间隔 48h，给药后观察14d,上下法限度试验,2000 mg/kg试验 结果 X OOO OXOXX OOXO OXXX OXXOO : : 进入主实验 LD502000 mg/kg,上下法限度试验,5000 mg/kg剂量水平限度试验 方法： 结束 结果判断：同2000 mg/kg,存活,全存活,非全存活,上下法主实验,动物数：10只左右 剂量序表 1.75、5.5、17.5、55、175、550、2000 mg/kg 1.75、5.5、17.5、55、175、550、1750、5000 mg/kg,上下法主实验,给药，每次一只动物给药 起始剂量：序表中低于但接近LD50估计值的剂量，或从17