课件：smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制.ppt

Smad3在马兜铃酸肾病中 的作用机制,Company Logo,参考文献： 1.Diverse Roles of TGF-/Smads in Renal Fibrosis and Inflammation 2.Mechanism of chronic aristolochic acid nephropathy:role of Smad3,Company Logo,马兜铃酸肾病,马兜铃酸肾病（AAN）：为一种全球性疾病，是使用中草药严重的并发症之一。然而导致AAN的发病机制尚不明确，继而阻碍了对AAN病人的有效治疗。 AAN的特征是进行性肾损害，表现为肾小管坏死、萎缩和肾间质纤维化。肾小管间质纤维化是终末期肾病的共同特征，也是决定肾脏疾病进展的主要因素，因此深入研究肾纤维化发生发展的机制尤为重要。 肾脏纤维化是以胶原蛋白合成增加、降解受到抑制导致大量细胞外基质（ECM）不恰当沉积和分布为特点。,Company Logo,TGF-的生物特性,各种肾病发展至肾纤维化与多种细胞因子有关，其中转化生长因子（TGF-）/smad信号通路在肾纤维化过程中起重要作用，并且被公认为是最主要的致纤维化通路。 TGF-(transforming growth factor beta,转化生长因子-beta)是一种多向性、多效性的细胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通过细胞表面的受体信号转导途径调节细胞的增殖、分化、凋亡，对细胞外基质的合成、创伤的修复、免疫功能等有重要的调节作用。,Company Logo,Smads 蛋白,Smads蛋白是TGF-/ Smad信号通路中细胞内信号转导的中介分子。,Smad2、smad3 Smad1、smad5 smad8、smad9,smad4,Smad6、smad7,红色标记者为参与TGF-信号传导的smad蛋白。,Company Logo,TGF-/smad3信号通路的传导,信号通路在传导中的3个主要步骤,1、TGF-与细胞表面受体结合，形成异源三聚体,2、异源三聚体通过激活R-smad蛋白，将信号传导至胞浆内,3、R-smad与Co-smad结合后，转移至细胞核，与靶基因结合，调节蛋白合成,Company Logo,TGF-/smad3信号转导示意图,Company Logo,本研究进行了一项假设试验，即假设转化生长因子/Smad3是导致慢性AAN的关键途径。 本研究分为体内试验和体外试验两部分。,Company Logo,体内试验技术路线,IHC、RT-PCR,T-IHC、western blot 、RT-PCR,IHC、RT-PCR,TGF-I， P-Smad2/3,-SMA 和 E-cad,Col.I和Col.III,肾功能检测,建立smad3 WT/KO CAAN模型,血清肌酐试剂盒 考马斯-尿蛋白,Company Logo,结果,Company Logo,结果,B：4周后，smad WT小鼠Scr含量升高显著，smad3 KO升高减弱。 C：整体水平上smad3KO小鼠蛋白尿量增加不明显。说明smad3KO对肾损 伤有保护作用,Company Logo,Smad3 WT Col1和3 大量积聚，Smad3 KO未出现积聚现象。,Company Logo,结果,E-cad和-SMA A和B:smad3 WT 腹腔注射4周 C:Smad3 KO腹腔注射4周,A.B.D:-SMA（肌成纤维细胞）大量蓄积 C.D:蓄积程度减弱。,Company Logo,结果,WT型-SMA表达显著增加，KO型没有出现增加显著现象。,Company Logo,Company Logo,体外试验总结 小结（一）,以上实验结果表明smad3蛋白在CAAN过程中有重要作用，基因敲除Smad3后可明显减少CAAN模型中Scr和蛋白尿的含量，有效降低Col.I、Col.III、-SMA、TGF-1、P-smad2/3的表达量，从而抑制了细胞外基质大量蓄积造成的纤维化以及其它更严重的肾脏疾病。,Company Logo,体外试验,细胞试验,AA处理RETC,AA处理导入siRNA 后的RETC,TGF-1、Col.I、 -SMA、E-cad,Company Logo,AA处理正常TEC,Company Logo,以上细胞外实验说明AA对肾小管上皮细胞有较严重的损伤作用， 导致Col.I、-SMA、TGF-1大量蓄积，E-cad表达量下降。,AA处理正常TEC,Company Logo,A表示smad2的siRNA不影响 smad3的表达，smad3的 siRNA不影响smad2的表达 然后进行B实验,B表示添加AA和S3-siRNA的 细胞中，-SMA下降，E-钙 粘蛋白升高；添加AA和S3- siRNA的细胞中，-SMA和 E-钙粘蛋白都有上升趋势。,AA处理导入干扰RNA的TEC,Company Logo,smad3 siRNA：本该升高的降低了， smad2 siRNA：原来升高的现在还是升高。,Company Logo,结论 小结（二）,AA可引起大鼠肾小管上皮细胞Col.I、-SMA、TGF-1上调，引起E-钙粘蛋白下调，且都呈现一定的时间依赖性和浓度依赖性。加入干扰RNA后证明smad3干扰RNA可以有效的抑制Col.I、-SMA、TGF-1的上调及E-钙粘蛋白的下调，而smad2没有明显作用。,Company Logo,总结,TGF-/Smad3信号通路在CAAN有重要作用，特异性地敲除smad3基因可有效防止AA引起肾功能损伤和严重的肾脏纤维化及其它肾脏疾病，并证明smad3在AAN中可能具有治疗潜力。,Company Logo,请批评指正 谢 谢!,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造