课件：免疫实验诊断.ppt

免疫学实验诊断,临床免疫学检查及意义,免疫学检查由于具有特异性和敏感性，在实验诊断中应用越来越广泛。常应用于体液免疫、细胞免疫、感染免疫、肿瘤免疫、变态反应、移植免疫等相关疾病诊断和预后观察。免疫学检查意义：应用免疫学理论和技术研究疾病的病因、发生、发展和转归，帮助疾病诊断和预防治疗。,Antigen,B-lymphocyte,phagocyte,T-lymphocyte,Primed TL,cytokine,Plasma cell,antibody,T memory cell,B memory cell,Review immune response,NK,complement,Tumor marker,其它,做免疫学检查思考点,特异性、灵敏性,性别、年龄,检测物质性质,地域性,时效性,免疫抑制剂等药物影响,介绍常用免疫学检测方法,凝集沉淀试验,流式细胞技术,ELISA,发光物标记技术,生物芯片技术,快速金标技术,免疫印迹,PCR,第一节：免疫球蛋白检测,免疫球蛋白合成、分泌及特性：,IgG IgA IgM IgE特性,IgG IgA IgM IgE病理变化,IgG亚类检测,IgG亚类分为4种，血液中含量IgG1 IgG2 IgG3 IgG4，最高和最低可差10倍以上，亚类增高或减低通常与总IgG相关，但有些患者亚类异常，而总IgG正常或与亚类异常情况反相。 IgG1缺失常见于免疫缺陷疾病，导致反复感染 IgG2缺陷为IgG亚类缺陷中最常见者，且多见于儿童 ，可引起呼吸道反复感染 IgG3缺陷见于成人反复性呼吸道感染 IgG4缺陷与IgG2和IgA缺乏有关。IgG4水平升高见于异位性皮炎、哮喘和某些寄生虫疾病。,M蛋白检测临床意义,M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是由一种单克隆B细胞异常增殖时产生，一般不具抗体活性。 阳性主要见于 1.多发性骨髓瘤 2.巨球蛋白血症 3.重链病 4.半分子病 5.恶性淋巴瘤 6.良性M蛋白血症 蛋白电泳,第二节：补体检测（complement）,补体是主要由巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白，补体不耐热易降解，故补体检测须用新鲜血清。补体有C1-C9(经典途径）及BF、DF、PF（旁路途径）和补体调节因子组成。临床常作总补体活性（CH50）和单一因子C3、C4、BF及C1q检测。,总补体溶血活性（CH50)检测,增高 急性感染、急性组织损伤、恶性肿瘤和风湿病早期，补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。 降低 自身免疫性疾病SLE的活动期 急性肾小球肾炎 冷球蛋白血症等 严重肝病变 先天性缺乏,SRBC,Ab,c,SRBC,c3、c4、c1q、B因子检测,第三节 细胞免疫检查,簇分化抗原CD（Cluster of differentiation）: 细胞在发育分化过程中，细胞表面抗原物质发生变化，CD抗原即指细胞变化过程中不同时期产生的抗原。目前临床CD4（TH）与CD8（TS）检测应用广泛。簇分化抗原检测方法目前较多采用流式细胞仪技术进行分析，流式细胞免疫分析技术为特异抗体加标记技术加单细胞检测。特点：特异性、灵敏性高、检测精密度均较以前手工操作高很多。,流式细胞仪检测简介,淋巴细胞表面标志检测,E玫瑰花形成实验,TC,SRBC,SRBC,SRBC,SRBC,SRBC,SRBC,SER,SER,SER,SER,SER,SER,T细胞表面标志检测,CD3（总T细胞）、E玫瑰花试验检测临床意义 增高：甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、器 官移植后排异反应 减低：AIDS、胸腺发育不良、联合免疫缺陷、也可见 于放疗和化疗及免疫抑制类药物治疗 CD4、CD8检测临床意义 CD4+增高：类风湿关节炎活动期，自身免疫疾病 CD4+减低：AIDS等病毒感染、免疫抑制剂治疗、严重 创伤、大手术等 CD8+增高：传染性单核细胞增多症和巨细胞病毒感染 急性期、慢性乙型肝炎 CD8+降低：部分自身免疫性疾病、型糖尿病等,B细胞表面标志检测,B细胞表面抗原和表面受体检测临床意义 表面抗原CD19、CD20、CD21、CD22 CD19增高：B细胞系统恶性肿瘤 CD19降低：体液免疫缺陷疾病 CD21为EB病毒和CD3受体 CD20在B细胞激活后逐步降低 CD22在B细胞激活时逐步增高 SmIg B细胞表面特异性标志 SmIg增高：B细胞恶性增殖相关疾病，如慢淋、毛细胞白血病、巨球蛋白血症。 SmIg降低：体液免疫缺陷相关疾病,CD4/CD8测定临床意义,CD4/CD8测定临床意义 增高：多见于自身免疫性疾病，如类风关活动期、多发性硬化症、SLE、器官移植后排异反应、膜性肾小球肾炎等 降低：AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤发作期、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染急性期、血吸虫病等。,淋巴细胞功能检测,T淋巴细胞转化试验意义 细胞生物学功能的体外试验，应用于免疫缺陷、增强、移植等。实验要求较高。 转化率增高：Down氏综合症 转化率降低：细胞免疫功能低下或缺陷相关疾病 NK细胞活性测定意义 NK细胞无需抗原刺激可直接杀伤靶细胞，可释放IFN-r、TNF-B和GM-CSF,在机体抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用 增高：感染早期，器官移植干扰素等免疫增强剂治疗 降低：恶性肿瘤，免疫缺陷疾病，使用免疫抑制剂。,细胞因子检查,细胞因子种类繁多，功能复杂，多种因子可具有相同功能，各种细胞因子间可互相作用，细胞因子功能同时受到细胞因子受体功能影响，因此在选择检测项目和结果分析时要综合考虑。,肿瘤标志物的概念,一般而言，TM是指存在于肿瘤细胞内或肿瘤细胞表达及脱落的物质，或是宿主对肿瘤反应而产生的物质。由于肿瘤发生、发展原因至今尚未完全解决，提示肿瘤的标志也并未完全明确，所以肿瘤标志物概念还有待补充和修正。 Tumor markers are substances, usually proteins, that are produced by the body in response to cancer growth or by the cancer tissue itself. Some tumor markers are specific, while others are seen in several cancer types. Many of the well-known markers are also seen in non-cancerous conditions. Consequently, these tumor markers are not diagnostic for cancer.,第四节：肿瘤标志物本质,广义上肿瘤标志物是指与肿瘤发生、发展、消亡相关的各种物质。包含遗传物质（如致癌或抑癌基因）、病毒（如EBV-IgA与鼻咽癌)、酶（NSE)、激素（HCG)和临床应用广泛的一些肿瘤抗原（CEA、AFP)等。 肿瘤细胞本身产生的肿瘤标志物常分为两类：1）当理化、病毒、遗传等因素引起正常细胞内基因突变而发生癌变时，癌变细胞内及表达在其表面的蛋白质等成份发生某种变化，形成肿瘤抗原，这种抗原可以表达在正常细胞，而肿瘤细胞表达高，也可因肿瘤导致组织结构变化，肿瘤抗原进入血液，如PSA ；或仅在胚胎组织中表达，正常成人细胞中不表达，在发生肿瘤时又重新表达，如AFP、CEA。,2）由肿瘤细胞产生的特殊抗原，这种抗原在性质上与正常细胞所表达的抗原不同。癌基因的发现证明正常细胞有癌基因存在，只是处于不表达状态，其一旦被激活，就失去正常调控，使细胞发生癌变。而由于癌基因表达产物与肿瘤抗原的关系至今未完全清楚，所以目前未发现很特异的肿瘤抗原（基因理论和动物实验得到证实）。,肿瘤标志物的分类,瘤标志物目前有100多种。尚未有统一全面的分类标准。常分为血清/血浆肿瘤标志物和组织肿瘤标志物。,理想肿瘤标志物的要求,TM检测临床意义,辅助临床早发现、早诊断 帮助区分区分良性与恶性肿瘤 协助临床肿瘤类型鉴定及肿瘤部位鉴别 帮助临床对肿瘤病程判断 治疗效果观察，提前判断复发,几种肿瘤标志物检测意义,几种肿瘤标志物检测意义,肿瘤标志物的选择建议,同一肿瘤多种肿瘤标志物选择,ROC曲线,人类具有完善的免疫系统，正常情况下，免疫系统具有识别自我与异己的功能，因而能够防御异物入侵，而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应，称自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变，可使免疫耐受受到影响，导致免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性，一般影响不大，高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测方法很多，特异性较差，动态检测可帮助临床对预后及疗效观察。,第五节 自身抗体检测,荧光免疫技术,目前常用于免疫组化和自身抗体检测，特定可用于定位。较多用于PCR和流式细胞技术,细胞核,常见自身抗体检测及临床意义,名称 临床意义 类风湿因子（RF）类风湿性关节炎及其它免疫性疾病 抗ds-DNA抗体 SLE的较特异性抗体 抗Smith抗体 SLE的较特异性抗体 抗组蛋白抗体 药物性狼疮及其它免疫性疾病 抗核糖核蛋白抗体 混合结缔组织病、SLE等 抗SS-A和SS-B抗体 干燥综合症、SLE、RA等 抗Scl-70抗体 系统性硬化症等 抗线粒体抗体 原发性胆汁性肝硬化等,常见自身抗体检测及临床意义,名称 临床意义 Jo-1抗体 肌炎和间质性肺纤维化 抗中性粒细胞胞浆抗体 血管炎症、自身免疫 性肝病等 抗甲状腺球蛋白抗体 乔本氏甲状腺炎等甲 状腺疾病 抗血小板抗体 血小板减少症 抗平滑肌抗体 自身免疫性肝病 抗精子抗体 男子不育症 抗心磷脂抗体 SLE、RA等疾病 HLA-B27 强直性脊椎炎等,第六节 感染免疫检查,人体感染病原体后经过一段时间产生抗体一般可持续数月或数年，因此抗体检测可判断现症感染和既往感染情况,风湿热是一种变态结缔组织疾病，常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿热常由A 组溶血性链球菌引起，此菌可产生一种“O”溶血素具有抗原性，ASLO就是检测机体产生的抗溶血素“O”抗体。 链球菌感染后抗“O”的产生一般在一周左右，4-6周达高峰。可见于风湿性心脏病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO动态检测对病程及疗效观察意义较大，结合CRP和ESR检测临床意义更大。,抗链球菌溶血素“O”检测（anti-streptolysin O ASLO）,伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有两种抗原，即菌体抗原“O”抗原和鞭毛抗“H”原。肥达氏反应就是检测由上述两种抗原刺激机体产生的抗体。 肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和副伤寒感染，由于抗体产生需要一定时间，故第一周阳性率10%，第二周达60%-70%，第四周达90%。临床常以二次标本（早期和中期或恢复期）的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“O”抗体较“H”出现早，存在时间短，“H”相反。预防接种可引起“H”增高，“O”正常。,肥达氏试验,肥达氏试验,结核分枝杆菌主要引起细胞免疫，但也可引起体液免疫产生特异性IgG抗体，临床常用ELISA方法检测特异性IgG抗体，PCR方法检测结核DNA，但两种方法均存在部分假阳性，样本找结核杆菌方法最为经典。,结核抗体和DNA检测,幽门螺杆菌检测,幽门螺杆菌（Hp）感染是人类最常见的慢性感染之一，与胃十二指肠等消化系统疾病密切相关。由于HP感染具较大危害性，故近几年HP检测方法被高度重视，也取得飞速发展。目前诊断幽门螺杆菌感染的方法很多，依据是否需做内窥镜检查分为侵入性和非侵入性两大类 。侵入性常做尿素酶试验。非侵入性试验除C13或C14 呼气试验外，目前血清学HP是诊断现症感染较好方法，易于儿童HP感染检测和体检普查。,梅毒血请学检测,当机体感染梅毒螺旋体后，会产生二种抗体，一种为抗类脂抗体，另一种为抗螺旋体抗原抗体，后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难，故血清学检测是目前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPPA），后者特异性高一般用于确定试验，RPR一般作过筛试验和既往感染标志。,TORCH感染免疫学检测,日本血吸虫抗体检测 机体感染血吸虫后可产生特异抗体，可作血清IgG、IgM、IgE检测，帮助临床诊断和流行病调查。 常用方法：环卵沉淀试验， ELISA法特异抗体检测 血吸虫感染早期引起肝、脾肿大，晚期发展为门脉高压、巨脾和腹水。 简介囊虫抗体检测 猪肉绦虫的幼虫寄生人体,机体产生特异抗体.,寄生虫感染免疫学检测,CRP是一种急性时相蛋白，由肝脏合成，能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。近年来CRP检测被广泛应用。 CRP增高特点为：急性期增高明显，预后降低迅速，且受其它因素影响很小，特异性较差。 明显增高：急性细菌性感染、严重创伤、烧伤、大手术、风湿病活动期等。 轻度增高：病毒感染、恶性肿瘤、心血管疾 病、肝炎、移植等。 冷球蛋白特征：37C溶解，温度降低凝固 循环复合物检测：,丙反应蛋白和冷球蛋白及循环复合物检测,艾滋病血清血检查,艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症（acquired immunodeficiency syndrome ADIS）机体感染艾滋病病毒后血清中产生抗体，实验室一般首先用过筛试验进行检测，发现阳性再作确诊试验。过筛试验常用酶免疫法，要求敏感性高，不能有假阴性，允许少量假阳性。确定试验一般用蛋白印迹法，要求敏感性高、特异性高。遇到可疑标本，一般病人三月后复查,我国感染HIV较多为型。RNA检测用于检测病毒载量。,HIV与CD4+T细胞,移植免疫检查,人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA)：由HLA基因复合体所编码的产物。目前已确定HLA复合体共有372个等位基因，每个基因编码一种特异性抗原，主要表达在细胞膜上，也有以游离