基因工程实验思考题.doc

基因工程实验课程思考题1. 如何正确使用微量移液器？ 2. 如何准备基因操作中的吸头、eppendorf管等器具，在使用使这些东西时应注意什么？ 3. 提染色体DNA的基本原理是什么？在操作中应注意什么？ 4. 在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？ 5. 进行DNA抽提，为什么用pH8.0的Tris水溶液饱和苯酚，显红色的苯酚可否使用，如何保护苯酚不被空气氧化？ 6. 在基因工程操作中酚、氯仿的作用是什么？ 7. 如何检测和保证DNA的质量？ 8. 如果电泳中发现DNA几乎不移动，你认为可能是什么原因？ 9. 琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？ 10. 如何制备核酸琼脂糖凝胶，操作中应注意什么？ 11. 核酸电泳中上样缓冲液主要成分与作用是什么？ 12. 进行RNA凝胶电泳时应注意什么问题？ 13. 说明在RNA电泳中添加甲醛的目的。 14. 如何判断RNA的完整性？ 15. 质粒的基本性质有哪些？质粒载体与天然质粒相比有哪些改进？ 16. 抽提质粒的基本原理是什么？ 17. 在碱法提取质粒DNA操作过程中应注意哪些问题？ 18. 质粒抽提实验中溶液、各有什么作用。 19. 什么是质粒多克隆位点（MCS）？ 20. 从溶液中回收DNA时，可以用酒精或异丙醇进行DNA的沉淀，酒精或异丙醇沉淀DNA各有什么不同。 21. 用氯仿/异戊醇除去蛋白等作用时，其中异戊醇起什么作用？ 22. 克隆质粒与表达质粒有什么异同点。 23. 你认为抽提质粒的关键步骤是哪几步？ 24. 在进行DNA重组实验中，有一同学试图利用提取染色体DNA的试剂和方法从细菌细胞中提取质粒。利用你现有的知识，请你给他参谋一下，他的这种设想是否可行？如果采用提取染色体DNA的试剂和方法，最后得到的是什么样品？ 25. 有人利用转接后2小时的培养物进行质粒的提取，你认为会出现什么问题？ 26. 什么是穿梭质粒，在遗传结构上有何特点？ 27. 使用溴化乙锭时应注意什么？ 28. 根据OD260/OD280值如何来判断DNA溶液的纯度？ 29. 琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？ 30. 细菌产生的限制性内切酶，为什么不对自己的DNA发生切割作用呢？ 31. 影响限制性内切酶酶切的因素有哪些？在使用工具酶使应注意些什么？ 32. 如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动，你认为可能是什么原因？ 33. 简述II型限制性内切酶的命名与写法以及在基因工程中作用及特点。 34. 如果在使用工具酶的反应过程中，不慎将某一物质添加过多了，应如何进行处理。 35. 酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围内，为什么？ 36. 什么样的序列可能是酶切位点？ 37. 基因工程操作中，什么时候使用同尾酶？ 38. 如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动，你认为可能是什么原因？ 39. 琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？ 40. 简述DNA凝胶回收试剂盒提纯的原理。 41. 进行DNA连接的反应温度为什么采用16？ 42. 不同限制酶处理的DNA片段之间可以进行连接吗？为什么？ 43. DNA连接酶有几种？常用的是哪一种？ 44. 如何防止线性质粒的自身环化？ 45. TA克隆的基本原理是什么？ 46. 产生平末端的PCR产物可以进行TA克隆吗？什么聚合酶扩增的PCR产物是平末端的？ 47. 如何培养宿主菌？ 48. 制备感受态细胞的原理是什么？ 49. 制备感受态细胞的关键是什么？ 50. 如果实验中对照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种现象？ 51. 如何制备平板？ 52. 当质粒加入宿主细胞进行转化，再涂布在含有Amp的LB培养基平板前，为什么要在LB培养基中培养一个小时？ 53. 如果DNA转化后，没有得到转化子或者转化子很少，分析原因。 54. DNA转化有哪些方法，各有什么特点？如何提高转化效率？ 55. 什么情况下转化平板上会出现卫星菌落？为什么会出现卫星菌落？ 56. 转化后，在含抗生素的平板上长出一片小菌落或菌苔，请分析其中的原因，并设计实验进行排查。 57. 在转化过程中，42热击后，如果缺少了LB培养基中培养一个小时这一步，会出现什么结果？ 58. 在涂板时，不小心将放三角刮刀烧杯的酒精点燃了，应该如何处理？ 59. 如何进行转化子的接种操作？ 60. 在用质粒载体进行外源DNA片段克隆时主要应考虑哪些因素？ 61. 利用-互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理是什么？ 62. 质粒转化后，如何挑菌落接踵进行阳性克隆的筛选？ 63. 蓝白筛选中，兰色菌落最有可能含有重组子？还是白色菌落最可能含有重组子？为什么？ 64. 要进行转化子的兰白筛选，对宿主、质粒各有什么要求？ 65. 双脱氧法测序的基本原理是什么？ 66. 简述全自动测序的机理。 67. 在进行转膜时应注意什么问题？ 68. 在进行Southern杂交时，DNA酶切反应不彻底会有何结果？DNA发生降解有何影响？ 69. 怎样防止毛细作用发生的短路现象？ 70. 如何将转移后的DNA固定在膜上？ 71. 如何选择基因表达的宿主菌？ 72. 利用pET转化BL21（DE3）菌株能否进行蓝白斑筛选？为什么？ 73. 在基因工程中克隆载体与表达载体各起什么作用，各需要具备哪些基本遗传元件？ 74. 表达载体与克隆载体有什么不同？怎样选择表达载体？ 75. 简述利用T7噬菌体启动子的pET系列表达载体的工作原理。 76. 诱导外源基因表达的基本原理是什么。 77. 如何确保外源基因在宿主中正常表达？ 78. SDS在SDS-PAGE中的作用？在质粒DNA提取中又起什么作用？ 79. SDS-PAGE中蛋白质样品上样前，加入上样缓冲液要在100沸水浴中保温10分钟，这是为什么？ 80. 蛋白质电