急性胆囊炎和胆道梗阻对oddi括约肌的影响与胰疾病课件

1,急性胆囊炎和 胆道不全梗阻对Oddi括约肌 的影响与胰腺炎,贵州省人民医院 石承先,2,1. Oddi括约肌的结构与功能 2.急性胆囊炎对Oddi括约肌的影响 3.胆道不全梗阻对Oddi括约肌的影响 4. Oddi括约肌功能障碍与胰腺炎,3,1. Oddi括约肌的结构与功能,结构: Oddi括约肌组成: 胆管括约肌:长12.13.5mm,厚0.7- 0.8mm 胰管括约肌:长9.5 3. 3mm,厚0. 2- 0. 4mm 壶腹部括约肌: 4.9 1.6mm 纵形平滑肌束:在乳头两侧壁之间 Oddi括约肌内层为散在的纵形平滑肌,外层为丰富的环形平滑肌,4,5,腹壶部以锐角插入十二指肠壁:防止十二指 肠内容返入胆管,胆管直径从10mm降至5- 6mm，在十二指肠壁内为15mm。 胆管压力5-15mmHg， Oddi括约肌压力5- 15mmHg,收缩时达50- 150mmHg,4-5 次/分, 当胆管压力达40-50cmH2O或 8.53.2cmH2O时,Oddi括约肌收缩停 止.,6,禁食期间,Oddi括约肌表现为周期性的 电活动,间歇期80-120分钟 进食期间,Oddi括约肌表现为较高频率的电活 动峰,括约肌的近端是远端的起动点,运 动,7,Oddi括约肌功能的调节: 交感神经:T 7-T10-腹腔神经节 迷走神经:副交感神经,切断迷走神经不改变禁食期间 Oddi括约肌的电活动. S O的受体主要有.肾上腺能受体及胆碱能受体。其中肾上腺能受体介导收缩， 肾上腺能受体及胆碱能受体介导舒张 P物质:兴奋Oddi括约肌,并为阿托品阻断 神经肽 Y:刺激Oddi括约肌活动(剂量依赖),8,CCK：抑制Oddi括约肌活动 免疫组化技术研究后发现S O中有血管活性肠肽、 神经肽Y、 钙调基因相关肽, P物质、 脑啡肽、蛙皮素和生长抑素等神经肽。 一氧化氮：使Oddi括约肌松弛,9,10,（6）功能,调控胆汁流向：调控胆汁从肝向十二指肠的排放 消化间期， S O收缩， 胆管内压力升高， 胆囊 舒张， 胆汁顺压力梯度进人胆囊。此期内仍有2 5 %的 肝源性胆汁排入十二指肠。胆囊的间歇性收缩 和舒张使胆囊管内的胆汁呈双向流动。 消化间期 胆汁流的总趋势是储存于胆囊内 消化期的总趋势则是排入十二指肠。胆囊收缩运动 推动胆汁排出，但部分非推进性收缩只引起胆囊内胆汁 的搅动以防止胆汁成分凝结。,11,调控胰液流动： S O松弛使胰腺分泌物排入十二指肠。 防止反流:防止肠内容物向胆道和胰管反流，免受肠道细菌的侵入起重要作用。 上述协调运动机制中任何环节出现问 题， 都会导致间断性上腹部疼痛和短暂的肝胰酶升高， 并常伴有胆管扩张， 甚至胰腺炎。,12,胆源性胰腺炎 Why?,胆囊结石与胆管结石之比: 60年代为1:1.35, 90年代为7.35:1,黄志强主编胆道外科,286-287,13,急性胰腺炎的发病率,1986年至1990年间AP病例数占同期内外科住院总人数的019， 1991年至1995年间上升为036， 1996年至2000年间升至054， 2001年至2005年间则高达071， 胆源性胰腺炎分别占6597,黄开红，等.广东地区近20年急性胰腺炎的发病率.胰腺病学,2007,7:140-143,14,2.急性胆囊炎对Oddi括约肌的影响,短毛种豚鼠20只，雌雄不限，体重400-500g；随机分成两组: 对照组（A组，n=10）， 急性胆囊炎组（B组，n=10）,15,方法,对照组（A组）：开腹后轻轻翻动十二指肠，然后关腹 急性胆囊炎组（B组）：开腹后寻及胆囊，5ml空针向胆囊内注射大肠杆菌和菌石混合液，缝扎针孔，然后关腹。 两组动物分别饲养十天后再次开腹，,16,1.检测Oddi括约肌肌电活动,将实验动物移入PBG一1型生理实验屏蔽柜，下肢及屏蔽柜接地以排除外界干扰。直视下将双极钩状金属电极通过浆膜层刺入十二指肠乳头，但不可刺入太深，防止刺透十二指肠肠壁。调整不锈钢万能支架使之保持一定张力和适当的角度用于记录十二指肠肌电变化。 数据记录：双极金属钩状电极采集到的肌电信号，传入SWF-1微电极放大器，放大信号然后传入RM6240型多通道生理仪，计算机上使用专门胃肠肌电信号采集处理的软件系统处理后加以储存。 观察指标：用肌电簇(myoelectronic activity of SO，MASO) 及锋电位(spike potentials of SO，SPSO)作为观察指标，分别记录其发生的频率和波幅，在变化显著时做出标记。每只动物记录120-150分钟。,17,2.Oddi括约肌和胆总管压力测定,调试测压系统：将直径为1.56mm硬尼龙导管尖端封闭，距尖端10mm处开一个直径约1mm侧孔，改制成单腔测压导管。然后将测压导管（导管内充满生理盐水，驱赶测压导管内的全部气泡）与MLA 844 生理学压力换能器、ML 110 桥式放大器（Bridge Amplifier）、Powerlab（4/25 4通道）主机以及配有测压软件的计算机依次相连。将压力曲线零点位定标，定标成功后待用。 胆总管近端纵行切口置入测压导管。采用AD Instruments Pty Ltd公司PowerLab压力转换系统进行测定。先将导管顺行插入胆总管末端，分别于胆总管下段近Oddi括约肌处、胆总管中段记录压力曲线30min。 实验参数：经测压导管生理盐水灌注速度为15ml/h，记录走纸速度为60mm/min。测压所得原始数据将自动保存。,18,3.免疫组化和病理 取oddi氏括约肌段用10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片后行 肌动蛋白（Actin）、 肌球蛋白（Myosin）SABC法染色，在Leica 570c图像分析仪上进行定量分析，物镜为10 取完整的胆管oddi氏括约肌段用2.5%戊二醛固定，再用1%锇酸固定，95%酒精脱水后用环氧树脂包埋，超薄切片用醋酸钠枸橼酸铅染色，光镜观察。,19,结 果 1. Oddi括约肌肌电活动的变化,.在没有滤波的情况下，双极钩状金属电极可以记录到3种肌电活动，即波幅较大、频率较慢的胃肠道肌电活动，约68次/min；波幅较小、频率较快的呼吸肌肌电活动，约2535次/min；,图1 不加如何滤波的情况下，可见胃肠道及呼吸电活动与SPSO3种波形重叠在一起,20,图2 将速度、灵敏度、时间参数做适当调整，并经高通10HZ数字滤波处理后，仅仅保留SPSO,规律、单发性的Oddi括约肌锋电位(SPSO)或Oddi括约肌肌电簇（MASO），约1620次/min。将滤波频率降至10Hz并叠加高通10Hz数字滤波，再将扫描速度提高到500 ms/div，前2种波形即可被滤过，同时基线变平，仅仅保留清晰的SPSO或MASO(图1，2)。,21,表1 2组动物oddi括约肌肌电的比较( X s),注:与A组比较P0.01；,22,2.SO基础压、峰压收缩频率 和胆总管内压的变化,压力测定中取波形相对平稳的20-30min时间段数据来做统计学分析，数据如表2。从中可见，B组的SO基础压、峰压、收缩频率和胆总管内压均显著高于A组（P0.01）。,注: 与A组比较P0.01；,23,3.Actin和Myosin,从表3可以看出，SO平滑肌中主要与收缩功能相关的两种蛋白质在对照组和急性胆囊炎组中的含量无差别（P0.05）,提示SO形态变化为功能性改变，而非器质性改变的结果。,24,4.病理变化,光镜下观察急性胆囊炎组Oddi括约肌可见上皮细胞层和结缔组织层内充血，伴有大量中性白细胞侵润；平滑肌层增生、肥大形成局灶性增厚（见附录图1-2）。对照组光镜所见基本正常（见附录图3-4）。,25,3 .胆总管不全性梗阻 对Oddi括约肌的影响,建立豚鼠不全性胆道梗阻模型 A组：开服后单纯触压胆总管，关腹。 B组：于胆总管中断用4-0丝线将直径小于豚鼠胆总管的导管与豚鼠胆总管并行结扎后拔出导管，造成豚鼠胆总管不全性梗阻的动物模型，如上图。 C组：按B组的方法结扎胆总管，于术后第1天给予肌注丹参注射液0.1ml,一日一次，连用7天。,26,观察指标,所有动物术后常规抗感染治疗3天。按组分笼饲养，予维生素0.2-0.4mg/L加入饮用水中，自由进水。 饲养一周后，再次开腹，观察以下指标。,27,指标1：胆总管变化,一周后再次开腹，肉眼观察豚鼠胆总管及SO变化；借助游标卡尺、X10放大镜测量各组豚鼠胆总管直径，如下图。,28,指标2：肝功能变化,心脏采血，离心，取上层血清检测转氨酶及胆红素变化。,29,指标3：Oddi括约肌电活动,电极制作：取7-0带线缝针两枚，紧贴针尾剪掉带线，镀银。针尖0.2cm弯曲120呈钩状。针尾焊接在铜芯线上，分别接ASB280U型多导电生理仪导线的两极，如下图。,30,图1 豚鼠SO肌电信号采集示意图,31,指标4：Oddi括约肌压力,制作测压导管：将小儿三腔中心静脉导管插管远端处理圆钝。各头端分别标注测压管腔(a1,a2)、注水管腔(b)，这样就制成了SO动力学检测导管，如图3。 测压方法：采用多通导管道水灌注式测压法，如图4。分别于胆胆总管中段、壶腹部记录压力曲线。 测压指标：SO基础压、峰压、收缩频率及胆总管内压。,32,图3 自制多通道测压导管,33,图4 豚鼠SO压力信号采集示意图,34,指标5：测定转移生长因子(TGF-1),一：ELISA法测SO中TGF-1的含量,35,指标6：SO组织学变化,以下列7项为观察指标。未见下列指标评分为0分，单项指标累 及范围小于1/3评分1分，累及范围小于1/32/3评分2分，累及范围 超过2/3评分3分。各项指标分值相加即为该标本的病理损伤程度 表层炎性渗出 粘膜糜烂 间质血管充血和出血 间质水肿 慢性炎症细胞浸润 中性粒细胞 纤维组织增生,36,结 果 1.1 胆总管变化,肉眼观：B组和C组豚鼠胆总管明显扩张，胆囊肿大, 胆管壁明显充血水肿，增厚；胆汁呈黑色。B组和C组的胆总管直径明显大于A组(p0.01).如图1。,图1 各组豚鼠胆总管直径变化,37,1.2 肝功能的变化,B组、C组豚鼠血清ALT和AKP均较A组豚鼠显著升高(P0.01)，B组和C组比较无明显差异(P0.05)，如图2。,图2 各组豚鼠肝功能(酶学)变化,38,2.豚鼠Oddi括约肌电活动,图5 将速度、灵敏度、时间参数做适当调整，并经滤波处理后，仅仅保留SPSO,39,图6 各组SO电活动变化,40,3.豚鼠Oddi括约肌压力变化,B组和C组豚鼠胆总管内压、SO基础压较A组显著升高(P0.01)，SO峰压明显减弱(P0.05)； C组的SO基础压和峰压比B组有明显恢复。三组频率无明显差异(P0.05)，如表2。,41,4. SO转化生长因子的表达,B组豚鼠SO转化生长因子-1 的表达较A组、C组显著升高(P0.05)，A组和C组无明显差异(P0.05)，如图10,图10 各组SO中TGF -1 变化,42,5. SO病理损伤程度,B组和C组病理损伤程度明显高于A组(P0.01)，C组较B组损伤程度轻(P0.05)，如图11,43,44,讨 论,Oddi括约肌功能障碍可引起急性胰腺炎 急性胆囊炎引起oddi括约肌肌电振幅和持续时间明显大于正常， SO基础压、峰压、收缩频率和胆总管内压均显著高于A组（P0.01） 不全性胆总管梗阻后，豚鼠SO表现异常：电生理上表现为SO快、慢波振幅降低；动力学上表现为SO基础压升高、峰压降低，形态上表现为纤维化，转化生长因子-1 表达增强，, J W C Chen, A Thomas, C M Woods, A C Schloithe, J Toouli,et al. Sphincter of Oddi dysfunction produces acute pancreat