毛细管气相色谱法测定非洛地平原料药有机溶剂残留.docVIP

毛细管气相色谱法测定非洛地平原料药有机溶剂残留李晶*，陈玉华，王东武 ，于忠文，李宗文，高永吉（迪沙药业集团有限公司，威海 264200）摘要：【目的】 建立了毛细管气相色谱法检测非洛地平原料药中乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶残留溶剂的分析方法。【方法】采用手动进样程序升温法，FID检测器，6%-氰丙基苯基-94%-二甲基聚硅氧烷共聚物为固定液DB-624毛细管色谱柱（30m0.53mm,0.25m）。【结果】 乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶在各自浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.98030.9973,n=5）；最低检测限为0.161.6ng；加样浓度的平均回收率分别为99.49%103.00%，RSD=1.8%6.4%。【结论】 该方法简单、灵敏、可靠， 适用于非洛地平中残留溶剂的分析测定。关键词：毛细管气相色谱法；非洛地平；溶剂残留中图分类号：R917 文献标识码: A 文章编号：Determination of Residual Organic Solvents in Felodipine by Capillary Gas ChromatographyLi Jing, Chen Yuhua, Wang Dongwu, Yu Zhongwen, Li Zongwen, Gao Yongji(Disha pharmaceutical Group,Weihai 264200,China )Abstract：0bjective To develop the capillary gas chromatography method for the determination of residual organic solvents ethanol，isopropanol,acetone, dichloromethane,ethyl acetate and pyridine in felodipineMethods The samples were injected by manual sampling with program heating and FID detector .The determination was performed on DB-624 capillary column（30m0.32mm,0.25m）with 6% - cyanide phenyl - 94% - two methyl polysiloxane copolymer which stationary liquid is. Results Linear response were obtained for ethanol，isopropanol,acetone, dichloromethane,ethyl acetate and pyridine in their respective concentration ranges (r=0.98030.9973,n=5),and the limits of detection were0.161.6ng, the limits of quantity were 3.139.9ng.The average recoveries of three concentration levels were 99.49103.00%，with RSD 1.86.4%(n=5)。Conclusions the developed method is simple,sensitive and accurate with good reproducibility.It can be used for the residual solvent analysis in glimepiride samples.Key words: manual sampling; gas chromatography; felodipine; residual solvent*李晶，女，硕士 TelEmail:.药品中的残留溶剂是指在原料药或辅料的生产中，以及制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂1。人用药品注册技术要求国际协调会议（International Conference of Harmonizition ICH）将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为4类，第一类，已知可以致癌并被强烈怀疑对人和环境有害的溶剂；第二类，无基因毒性但有动物致癌性的溶剂；第三类溶剂，对人体低毒的溶剂；第四类是尚无足够毒理学资料的溶剂2-8。非洛地平是一种选择性钙离子拮抗类降压药，本公司在生产非洛地平原料药过程中引入了6种有机溶剂，根据ICH有关残留溶剂的规定，二氯甲烷、吡啶属于二类溶剂，限度依次为0.06%、0.02%；乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯属于三类溶剂，限度均为0.5%2。由于填充柱不能使较多的溶剂得到好的分离，而毛细管柱因柱效高，可以同时分离多种物质而被广泛应用于残留物质的检测3-4。本文建立了进样针直接进样-毛细管气相色谱法检测非洛地平原料药中的溶剂残留的检测方法，此类方法尚未见文献报道。该方法简便，快速，有效，重现性好，能够有效的解决本公司非洛地平原料药生产中溶剂残留的检测问题，且为非洛地平原料药有机溶剂残留检测研究提供了方法学参考。1 实验1.1 仪器与试剂Varian气相色谱仪，FID检测器，色谱柱：DB-624（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液）毛细管色谱柱（30m0.53mm2.5m）；非洛地平原料药(迪沙药业集团药物研究院有机合成研究所，批号为DSH015-02，DSH015-02，DSH015-02)；溶剂为N、N-二甲基甲酰胺（DMF）（国药集团化学试剂有限公司），乙醇(天津市河东区红岩试剂厂)、丙酮（烟台市双双化工有限公司）、异丙醇（天津市富宇精细化工有限公司）、二氯甲烷（天津市广成化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（天津市广成化学试剂有限公司）、吡啶（天津市光复科技发展有限公司）均为分析纯。2 方法与结果 2.1 溶液的配制混合对照品溶液：准确量取乙醇627ul，丙酮633ul，异丙醇638ul，二氯甲烷45ul，吡啶20ul，乙酸乙酯559ul，置50ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得混合储备液。取上述储备液1ml，置10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，密封，即得混合对照溶液。对照品溶液：准确量取乙醇627ul，丙酮633ul，异丙醇638ul，二氯甲烷45ul，吡啶20ul，乙酸乙酯559mg，分别置5个50ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。取上述储备液各1ml，分别置10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，密封，即得对照品溶液。供试品溶液：准确称取非洛地平供试品1.0g，置于10ml容量瓶中，用DMF溶解后稀释至刻度，摇匀，密封，作为供试品溶液。2.2 色谱条件与系统适应性色谱柱：DB-624毛细管色谱柱（固定液为6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为；30m0.32mm,0.25m）；分流比5:1；程序升温：初始柱温40（保持6min），以20/min的速率升至170(保持10min)；载气：高纯氮气；流速：3ml/min；进样口温度200；检测器：FID，250。 在上述色谱条件下，分别取溶剂DMF、混合对照品溶液进样测定，色谱图见图1，图2。DMF的保留时间是12.68min，乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶的保留时间分别是5.94min、6.72min、7.01min、7.49min、9.21min和11.60min，分离度均大于1.5，理论塔板数均大于10000。DMF与各溶剂峰之间分离良好，且不影响其他各溶剂的检出。图1 溶剂DMF色谱图Figure 1 GC chromatogram of DMF图2 混合对照品溶液色谱图Figure2 GC chromatogram of mixed reference solution1 乙醇(ethoanl); 2 丙酮(isopropanol);3异丙醇 (acetone);4二氯甲烷(dichloromethane);5乙酸乙酯 (ethyl acetate);6吡啶 (pyridine)2.3精密度试验取混合对照溶液1ul,进样六次，记录气相色谱图峰面积，如表1表1 精密度试验结果Table 1 Precision of 6 kinds of solvents乙醇丙酮异丙醇二氯甲烷乙酸乙酯吡啶16074.97729.97451.5308.86531.6509.026282.07905.97516.2323.76661.1498.236290.17869.47485.2313.56649.5522.046353.77911.47513.3320.16698.4519.755681.17244.96964.3286.66130.5489.465899.97556.67159.0303.86368.9504.5RSD(%)由表1可知，乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶峰面积的RSD（%）值分别为4.3%、3.4%，3.2%，,4.3 %,3.4%，2.5%，表明在该实验条件下，乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶残留测定方法的重复性良好。2.3 线性试验分别精密量取上述混合对照储备液0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml置5个10ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，密封，按上述色谱条件经样品检测；以峰面积A为纵坐标，质量浓度C（g/ml）为横坐标进行线性回归，。并以信噪比(S/N)=3时计算各溶剂的检测限，(S/N)=10时计算各溶剂的定量限，结果见表2.表2 6种溶剂的线性关系、检出限(S/N=3)和定量限（S/N=10）Table2 Linear regression results and limits of detection(LOD)(S/N=3) and quantification (LOQ)(S/N=10) of the solutions溶剂线性范围（g/ml）回归方程r检测限（g/ml）定量限（g/ml）乙醇0.030.075C=973.26A + 2854.90.99731.603.99丙酮0.030.075C= 1103.20A + 3842.10.98030.250.51异丙醇0.030.075C= 1098.20A + 3572.20.98830.310.63二氯甲烷0.0030.009C= 38.20A + 173.720.99550.421.06乙酸乙酯0.030.075C= 979.85A + 3001.70.98490.210.43吡啶0.00120.003C= 70.63A + 278.290.99290.160.312.4 加样回收率试验精密量取混合对照溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml，分别置于10ml容量瓶中，再依次加入精密称取的DSH015-02批非洛地平1.0g，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，同一样品制作三份；分别取上述9份溶液1ul注入气相色谱仪，按照 “2.2”项下条件进行测定，另取混合对照溶液1ul注入气相色谱仪，同法测定，得到3个浓度的平均添加回收率，其测得值范围为99.49%102.58%，相对标准偏差RSD为0.73%3.49%，试验结果见表3。 表3 非洛地平残留溶剂加样回收率 Table3 The solutions average recoveries of of felodipine 添加量乙醇丙酮异丙醇二氯甲烷乙酸乙酯吡啶80%加入量mg4.004.004.000.484.000.16测得量mg4.073.973.930.463.910.15回收率%101.7899.298.3397.3697.7396.41100%加入量mg5.005.005.000.595.000.20测得量mg20.585.030.19回收率%103.25102.07100.2997.61100.7196.05120%加入量mg6.006.006.000.716.000.24测得量mg30.746.020.24回收率102.72101.77100.5103.5100.45100.93平均回收率%102.58101.0299.7199.4999.6399.63RSD%0.731.561.203.491.661.66试验结果表明，在此色谱系统条件下乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、吡啶的回收率良好，满足残留量的检查。 2.5 样品测定分别取非洛地平原料药三批（批号分别为DSH015-02，DSH015-02，DSH015-02）。按照“2.1”方法制备供试品溶液，按“2.2”条件进行测定，记录色谱图，并以标准曲线法计算各有机溶剂残留量。结果见表4。表4 非洛地平样品残留溶剂检查Table 4 The determination of felodipine samples residual solvent批号乙醇（%）丙酮（%）异丙醇（%）二氯甲烷（%）乙酸乙酯（%）吡啶（%）DSH015-028.5E-04未检出1.2E-04未检出5.0E-05未检出DSH015-029.3E-04未检出未检出未检出未检出未检出DSH015-021.4E-03未检出1.0E-04未检出3.6E-05未检出3 结论根据ICH和中国药典2010年版对几种有机溶剂进行的限度规定：安全限度分别为乙醇0.5%、丙酮0.5%、异丙醇0.5%，二氯甲烷0.06%、乙酸乙酯0.5%、吡啶0.2%，本实验所测3批非洛地平原料药均符合要求。因非洛地平在DMF中的溶解度好，且本法中DMF不影响待测有机溶剂的检测，与待测6种溶剂分离度良好，故选DMF作为溶剂。因乙醇沸点较低，出峰较快，丙酮、异丙醇保留时间相差小，难分离，所以选择柱温初温40，保持6分钟，为了节约出峰时间，后又程序升温以20/min的速率升至170，使溶剂DMF出峰。研究结果表明，本文所建立的溶剂残留检测方法简便、准确、