ERCC1和CK在I期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究-肿瘤医学论文.doc

ERCC1和CK在I期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究-肿瘤医学论文ERCC1和CK在I期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究 徐 雯1 吴 敏2 巢仙亮2 徐 全1 1.江西省人民医院 胸外科，江西南昌 330000；2.江西省上高县人民医院外科，江西上高 336400 摘要 目的 探讨I期非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Carcinoma，NSCLC）的术后个体化化疗，以提高肺癌的远期疗效。方法 对该院2009年6月2012年12月收治的78例期NSCLC且有微转移患者的石蜡包埋肿瘤标本进行肺癌组织ERRC1（excision repair cross-complementation group 1）及细胞角蛋白（Cytokeratin，CK）免疫组化检测，并进行术后个体化化疗，分析上述指标表达对患者化疗反应率及生存率的关系，探讨其对指导术后化疗的意义。结果 全部患者CK检测均为阳性，阳性率100.0%；ERRC1阴性表达者42例（53.8%），ERRC2阳性表达者36例（46.2%）；2009年6月-2012年12月，共有235例期NSCLC患者在该院就诊，经治疗及CK检测阳性确定微转移患者共78例，转移率33.2%；阳性组3年复发18例，转移30例，生存率61.1%，阴性组复发20例，转移34例，生存率69.0%，两组患者复发、转移、生存率比较均无明显统计学差异。 结论 ERCC1和CK检测有助于客观评价患者预后，合理应用多学科综合治疗，避免不必要的医疗资源的浪费，具有巨大的经济和社会效益，值得广泛推广。 关键词 ERRC1；细胞角蛋白；I期非小细胞肺癌；表达；化疗；指导 中图分类号 R734 文献标识码 A 文章编号 1674-074（3）05（b）055-02 目前临床对于I期非小细胞肺癌术后是否化疗仍存在较大争议，多数学者均认为1，微转移是一个影响预后的独立因素1，而目前临床TNM分期仍未将微转移作为一个分期的指标，因此，为探讨微转移患者个体化化疗效果，该院对2009年6月-2012年12月收治的78例期NSCLC且有微转移患者的石蜡包埋肿瘤标本进行肺癌组织ERRC1及CK免疫组化检测，并进行术后个体化化疗以期改善这部分患者的预后，现将研究过程与结论报道如下。 1 临床资料 选取该院收治的经胸外科根治手术（肺叶或全肺切除、系统性淋巴结清扫术）且经常规病理检查存在微转移的I期NSCLC患者2，共78例，男性48例，占61.5%，女性30例，占38.5%，年龄3971岁，平均年龄（55.813.6）岁。病理分型：鳞癌38例（48.7%），腺癌29例（37.2%），腺鳞癌11例（14.1%）；吸烟史：无吸烟史42例（53.8%），3年以下19例（24.4%），3年及以上17例（21.8%）。 2 研究方法 2.1 CK检测 2.1.1 标本准备 将石蜡包埋组织标本置于-4冰箱内，冷冻后取出，制成2张组织薄片，厚度均为5 m，将其置于多聚赖氨酸处理过的载玻片上，经摊片、烤片后进行CK免疫组织化学染色。 2.1.2 免疫组织化学染色步骤 采用常规脱蜡法将石蜡切片水化；将30% H2O21份与蒸馏水10份混合，室温放置510 min以灭活内源性酶，灭活后使用蒸馏水清洗3次；将切片浸入0.01 mol枸橼性酸盐缓冲液中，微波炉加热至沸腾后停止，每隔10 min重复一次，共计2次。待切片冷却后，使用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次；滴加5%双(三甲基硅基)乙酰胺(BSA)封闭液，室温静置20 min后甩去多余液体，无需洗涤；滴加稀释的一抗，37静置1 h后，使用PBS洗涤3次，每次2 min；滴加生物素化二抗，于室温下静置20 min后使用PBS洗涤3次，每次2 min；滴加试剂SABC，2037静置20 min后使用PBS洗涤4次，每次5 min；DAB显色:取1 mL蒸馏水，分别添加加试剂盒中A，B，C试剂各1滴，混匀后加至切片，室温显色，镜下控制反应时间在20 min左右，反应完毕后使用蒸馏水洗涤；苏木素轻度复染3；脱水，透明，封片，待检。 2.1.3 染色结果评判标准 阳性结果为细胞膜及细胞浆出现棕黄色显色，且切片中出现1例CK染色阳性的细胞，则认为结果呈阳性，即淋巴结中有微转移灶的存在。 2.2 CK检测阳性标本再行ERCC1检测 2.2.1 方法 鼠抗人ERCC1单克隆抗体由上海长岛生物技术有限公司提供。石蜡切片经常规脱蜡水化后，使用3%的H2O2温育20 min，以灭活其内源性过氧化物酶，使用蒸馏水洗涤3次，每次洗涤时间约为5 min；微波抗原修复约5 min，使用0.1 mol/LPBS洗涤3次，每次5 min；滴加正常血清封闭液，室温温育30 min后将多余液体倒出；滴加180鼠抗人ERCC1单抗(稀释倍数1100)，371 h，4冰箱放置812 h；0.1 mol/LPBS洗涤5 min,3次；滴加生物素化二抗，37环境下静置60 min；0.1 mol/LPBS洗涤5 min ，3次；滴加试剂SABC，37，60 min，使用0.1 mol/LPBS洗涤5 min ，3次；DAB显色5 min；苏木素复染，脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，待检。 2.2.2 判定标准 ERCC1主要呈细胞核染色，在400视野下，对1000个肿瘤细胞中阳性细胞数予以记录。参照Wachters等4的方法来分析免疫组化ERCC1的表达水平，即阴性表达(-):不表达或阳性细胞数10%；阳性表达(+):视野中阳性细胞10%。按照其表达程度分为阴性组和阳性组，以进行分组治疗。 3 治疗方式 ERCC1阳性患者（阳性组）用不含铂方案，ERCC1阴性患者（阴性组）用含铂方案化疗5。 4 观察指标 统计I期非小细胞肺癌微转移率，ERCC1阳性率及总体3年复发率、转移率及存活率。 5 统计方法 对本临床研究的所有数据采用SPSS13.0进行分析，对计数资料采用2检验，对计量资料采用t检验，检验水准设定为a=0.05，当P0.05时，认为差异有统计学意义。 6 结果 6.1 CK检测结果 全部患者CK检测均为阳性，阳性率100.0%。 6.2 ERRC1及转移率检测 对患者行ERRC1检测，显示ERRC1阴性表达（低表达）者42例（53.8%），纳入阴性组，ERRC2阳性表达（高表达）者36例（46.2%），纳入阳性组；2009年6月2010年12月，共有235例期NSCLC患者在该院就诊，经治疗及CK检测阳性确定微转移患者共78例，转移率33.2%。见表1。 表1 ERRC1阳性率及微转移率 6.3 3年情况统计 阳性组3年复发18例，转移30例，生存率61.1%，阴性组复发20例，转移34例，生存率69.0%，两组患者复发、转移、生存率比较差异无统计学意义（P0.05）。见表2。 表2 两组患者3年情况统计n（%） 7 讨论 肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率均已高居各类癌症死亡率之首。而肿瘤出现淋巴结微转移一般无明显临床表现，常规影像学及临床病理学检查不易发现。而多数肺癌患者在手术前已经存在区域淋巴结或骨髓、外周血微转移灶，造成病死率居高不下。因此,探讨检测微转移灶的新方法，补充完善病理TNM分期系统，对选择适宜的综合治疗方法及延长其生存期均具有重要意义。2008年NCCN非小细胞肺癌指南6指出，IA期病变不需化疗，IB期病变不推荐化疗，但为提高患者预后,保证其生活质量及生存率，我们认为，应根据患者指标进行个体化治疗，遂设计了本次探究。 CK是一种分化特异的蛋白质，是组成细胞骨架的蛋白质之一，广泛存在于人体上皮组织中，而不存在于间叶组织中。但当细胞出现癌变时，上皮性肿瘤可表达CK，且间叶组织仍不表达，因此，可认为肺癌患者淋巴结中检测到CK可指示肿瘤微转移的出现。本例采用该理论，确诊78例CK阳性微转移患者，总体期NSCLC转移率为33.2%，与Kim KS等7研究结果相仿,结果可靠。 ERCC1是一类重要的核苷酸外切修复酶，肺癌患者体内ERCC1一般呈现低表达,而高表达往往与铂类制剂耐药相关；铂类是NSCLC化疗的基本药物，通过分析患者基因表达水平以及遗传状态，对设计是否选择含铂方案治疗及预测铂类药物疗效均具有指导意义，而且能够在一定程度上避免药物相关的严重毒副作用风险，从而使病人接受真正的个体化治疗。目前，肺癌的分子分期及个体化治疗是肺癌研究领域的难点和热点，本例根据患者ERCC1表达差异制定不同的化疗方案，即ERCC1阳性患者用不含铂方案，ERCC1阴性患者用含铂方案化疗，最终阳性组复发率50.0%，转移率83.3%，生存率69.4%，而阴性组复发率47.6%，转移率81.0%，生存率73.8%，两组组间数据比较无明显差异，而通过对其他研究结论的对比分析8，我们发现，经个体化治疗后，患者复发率、转移率无明显变化，而生存率较传统治疗方案上升约10%，说明检测上述指标并进行合理化治疗可有效提高患者的生存期，能够为期NSCLC患者的术后化疗提供可靠的临床指导。 综上所述，ERCC1和CK检测有助于客观评价患者预后，合理应用多学科综合治疗，避免不必要的医疗资源的浪费，具有巨大的经济和社会效益，值得广泛推广。 参考文献 1 Nosotti M, Palleschi A, Rosso L, et al. Lymph node micrometastases detected by carcinoembryonic antigen mRNA affect long-term survival and disease-free interval in early-stage lung cancer patientsJ. Oncol Lett, 2012,4(5):1140-1144. 2 Pesta M, Kulda V, Fiala O, et al. Prognostic Significance of ERCC1, RRM1 and BRCA1 in Surgically-treated Patients with Non-small Cell Lung CancerJ. Anticancer Res,2012,32(11):5003-5010. 3 胡跃云, 张献波, 董英辉, 等. RRM1和ERCC1在非小细胞肺癌中的表达及意义J. 山东医药,2012,52(21): 1-3. 4 Nagakura H, Nishikawa M, Kusano N, et al. The Impact of a Negative History of Smoking on Survival in Patients with Non-Small Cell Lung Cancer Detected with Clinic-based Screening ProgramsJ. Intern Med, 2012,51(22):3115-3118. 5 Osarogiagbon RU, Yu X. Mediastinal lymph node examination and survival in resected early-stage non-small-cell lung cancer in the surveillance, epidemiology, and end results databaseJ. J Thorac Oncol,2012 7(12):1798-1806. 6 陈佳, 何松, 张晓东, 等. 依据ERCC1及RRM1对晚期非小细胞肺癌实施个体化治疗的随机对照临床研究J.实用临床医药杂志,2012,16(9):21-24. 7 Kim KS, Oh IJ, Ban HJ, Cho HJ, et al