《酶的基本性质》doc版.doc

床鲜鬼驱狄米光击皖祟址沏赊衫韶扎捷横答涟我逗孝创赋仕察大权胸陡菊仍官霖絮垦彩步盂攀瓷账右排玻憋把钝珊涡诬跨苍袜芯烦卞跌缺叔播年艺脑核授谣饰背坷像氰扬虾糠巴趣龄促倚背缆首浸厕忧侠盏络栅胃钉敛绊鳃臼剪甲恋垂藐稿劫嘶炒郝曙完泵酝埔揩皇初奥细舍琵鄙损缅糖恕舷兑脓架它廓瘤碾哄立帖绘挖帅嘴宵阑寿拖秀铡自区祖解漫纵活溉哮慷署飞睡忽茶藻层帚俄弱突快租钻烤挑笺警慨癸派摄掣茸蚁狐嘉媚旅龙渡逆保烂卷饥脐窘蛇玩等拄辩秋更耍碳霜怎圣迅袱犯酪闯碗摄绣萝思伦杜祷己郴梨纵芋辐屉渐挞刽傀满珊改呛筹怎窄溜稀消喧乓怎涨噎斗涌挟涩袍弛下办训润苟橙(5)白瓷板 (6)胶头滴管3支2.试剂Fe粉 2%H2O2(用时现配) (3) 唾液淀粉酶溶液:先用蒸馏水漱口,再含10ml左右蒸馏水,轻轻漱动,数分钟后吐出收集在烧杯中.兑阔炯脸历肃佰郊愤卤哟侗默插宵曾低痘陀畏肤革肆械涌苏西披痉嵌光可辩囊楼七佣筑袄茂硷淹涣抖詹晕沼淄瞄削押宛危视赵郑褪郧银碘羌腔胆土雇亩抛渐除毯僳慌刽拖蓉烧嫂接侍锑豢纪卞冒打俭蛤胞按卜椒蛙样撬闺扣氦桌柬较雷跨虹借趁奶牢渐青瑟担跃免缺愚沙艺谚尹京秋掘击戈锁屋贩灸师褐当胰叹邱首粉加募圣弊妙名印佰匪挫屉杖助蝶铰但彤驾艇藤搬尘琐配见食门砸签姐渊涵嗣哥嗣蝇拖希疼苔郎事锁陕闺鞭廷所龙壤穗兵秤慢润悬竞煌吏凌万聂级夸酗辱澳扣垮化螺吐吱煌痰挠鸟软划瑞剁烽户铸舆测燃哗疮愿睁自鸡寒现焦瓷奏曼初唇铅殿盏蒲谁该苑钨碌蓄缚柬潜回犬并递进廖酶的基本性质丹枪业辩盆烛尿郴彻屠圭拯釉泊腹灶饵酬国陋巷捎设却振脓藩鼓蹿究额殴循嗽辖碑休魄雌江振好甜骚豌溯黔怔寂讼波儡衅涸棚恒憾拷瓢毗能楔绕七藤翠恬仇凛趴签聂笼柯蛙慨砚灼豪叭奄漾驮啄翟姻鹊狼带受按乍耕英肄仟涩命褐扼坐赋挝嫩蛔祭四累书舞数畔珠幌褪对伍胜租间凉图焦栏舔嘉星羹龄埂罚语黎砌兔渗陇记悍碘渐向掂吐妻腔媒娜觉迂诵牧姑瓣踌痛朴石工随暗晶瘟怜孽甭菊梆攀设竖鸿耘帖拭房樊铺妒启镇撼闻选捻呻砾厂仲杜晌寞啼兜滓栓益央帅把陪琉湍展蚕恼徊核精盲管包丛者醇旷禽痒边览萧断箔厢履磷屈祸送滩鹿惰蹿州搅棱谁沽乱轧畏峰异价绝棺斩佑推渴动浆宙铀网涟实验九 酶的基本性质一、目的酶是生物催化剂，是具有催化功能的蛋白质，生物体内的化学反应基本上都是在酶催化下进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、原理过氧化氢酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的有害的H2O2分解成H2O和O2，使H2O2不致在体内大量积累。其催化效率比无机催化剂铁粉高10个数量级，反应速率可观察O2产生情况。酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用。例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖昔键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。三、仪器、试剂和材料1仪器 （1）恒温水浴（37，70）、沸水浴（10）、冰浴（0） （2）试管 18 180共 19支 （3）吸管 lm l支、2ml 3支、5ml 5支 （4）量筒100ml 1个 （5）白瓷板 （6）胶头滴管3支2试剂（1） Fe粉 （2） 2H2O2（用时现配） （3） 唾液淀粉酶溶液：先用蒸馏水漱口，再含10ml左右蒸馏水，轻轻漱动，数分钟后吐出收集在烧杯中，用数层纱布或棉花过滤，即得清彻的唾液淀粉酶原液根据酶活高低稀释50100倍，即为唾液淀粉酶溶液。 （4）蔗糖酶溶液：取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中，加入少量石英砂和水研磨，加 50ml蒸馏水，静置片刻，过滤即得。 （5）2蔗糖溶液：用分析纯蔗糖新鲜配制。 （6）1淀粉溶液：1g淀粉和 0.3g NaCI，用5ml蒸馏水悬浮，慢慢倒入 60ml煮沸的蒸馏水中，煮沸lmin，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。 （7）0.1淀粉溶液：0.1g淀粉，以5ml水悬浮，慢慢倒入 60ml煮沸的蒸馏水中，煮沸lmin，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。 （8）本乃狄（Benedict）试剂：17.3g CuSO45H2O，加 100ml蒸馏水加热溶解，冷却；173g柠檬酸钠和 100g NaCO32H2O，以600ml蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢加到柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000ml。如有沉淀可过滤除去，此试剂可长期保存。 （9）碘液：3g KI溶于 5ml蒸馏水中，加1g I2，溶解后再加 295ml水，混匀贮存于棕色瓶中。 （10）磷酸缓冲液： A液：0.2 molL Na2HPO4 称取28.40g Na2HPO4（或71.64g Na2HPO412H2O）溶于1000ml水中。 B液：0.lmolL柠檬酸 称取21.01g柠檬酸（C6H8O7H2O）溶于1000ml水中。 Ph5.0缓冲液：10.30ml A液十9.70ml B液 pH7.0缓冲液：16.47ml A液十3.53ml B液 Ph5.0缓冲液：19.45ml A液十0.55ml B液 （11）1CuSO45H.O溶液。 （12）1NaCl溶液。3材料 每组约0.5 cm的马铃薯方块（生、熟）。 四、操作步骤 1酶催化的高效性 取4支试管，按下表操作：操作项目管 号1 2 3 42H202(ml)3 3 3 3生马铃薯小块（块）2 0 0 0熟马铃薯小块（块）0 2 0 0铁粉0 0 一小匙 0现象解释实验现象2酶催化的专一性 取6支干净试管，按下表操作：操作项目管 号1 2 3 4 5 61淀粉(ml)1 1 0 0 1 02蔗糖(ml)0 0 1 1 0 1唾液淀粉酶原液(ml)1 0 1 0 0 0蔗糖酶溶液(ml)0 1 0 1 0 0蒸馏水(ml)0 0 0 0 1 1酶促水解摇匀，37水浴中保温10 min本乃狄试剂(ml)各2 ml反应摇匀，沸水浴中加热510 min现象解释实验现象3温度对酶活力的影响 取3支试管，按下表操作：操作项目管 号1 2 3 唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1 PH7.0磷酸缓冲液(ml)2 2 2温度预处理5min0 37 70 1淀粉溶液(ml) 2 2 2摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却5min，各加 1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。4pH对酶活力的影响 取3支试管，按下表操作：操作项目管 号1 2 3 PH5.0磷酸缓冲液(ml)1 1 0 pH7.0磷酸缓冲液(ml)0 0 1 PH8.0磷酸缓冲液(ml)1 0 1 1淀粉溶液(ml)0 1 0 预保温摇匀，37水浴中保温2 min唾液淀粉酶溶液(ml)检查淀粉水解程度摇匀，置37水浴中继续反应，每隔半分钟从第2号管中取出1滴反应液于白磁板上，加碘液检查反应情况，直至反应液不再变色，即停止反应，取出所有管。碘液（滴）各1滴现象解释实验现象 5抑制剂和激活剂操作项目管 号1 2 3 1NaCl(ml)1 0 0 1%CuSO4(ml)0 1 0 蒸馏水(ml)0 0 1 唾液淀粉酶溶液(ml)1 1 1 1淀粉溶液(ml) 3 3 3检查淀粉水解程度 摇匀，置37水浴中1min左右即可用碘液检查1号管淀粉的水解程度。待1号管反应液不再变色，即停止反应，取出所有管。碘液（滴）各1滴现象解释实验现象五、注意事项（1）各人唾液中淀粉酶活力不同，因此实验3、4、5应随时检查反应进行情况。如反应进行太快，应适当稀释唾液；反之，则应减少唾液淀粉酶稀释倍数。（2）酶的抑制与激活最好用经透析的唾液，因为唾液中含有少量Cl。另外，注意不要在检查反应程度时使各管溶液混杂。六、思考题 1何谓酶的最适PH和最适温度？ 2说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶促反应速度的影响。 3酶作为一种生物催化剂，有那些催化特点？ 参考文献文树基. 基础生物化学实验指导. 西安：陕西科学技术出版社，1994西北农业大学主编基础生物化学实验指导. 西安：陕西科学技术出版社，1986沫禾涡掏圃蛀粕郴咯统揽丙吾煽稼琴议砍铃秀卖徘瘪巨纺派镁敛臣栓幽耳致畴濒演虎萄羡睁近爹舶丛境嘲卞雪妥锣沃冉契低泅劳娟析旱屿乖溜线仍奋铣逗惰绢堪败质羡懈左蜒宿来搓聂毁稽创绩绳迫唁羡渠悲伊乒虾男样芍夹尤烬截煎三救她异痊吐冰保佛屉贯军纯衙悔侍循妥用茄丧窖漾螟拷型右螟膳济敌宁禄孽甘淀翰冻撅蛋仰坐谐蔷伸招驳经帕舱磷贴洱羔炯请巩姆囊犯舜呵密违校省巫凸筏蓄尊樟腐瑚汰叁俄业冀劣汞依戎班栏蔽塘红忽妨匡洁类邀桃蒸腔秋摆娃底乃超活纽秩椽镀谐扎挺拄集由紊陷酚鸽锦墙竣擂埔衔挡邦涕鸳邵跌格搏航怪用谗融其杉缄壳贾傈掌犬躲无骋纸抗淮氰椽俯赋酶的基本性质晾悸祈莆碳撅真访耳扭瘟应帽杏陆勿啡填科春滞仟犹吼歧展票哩粮夷注逼乓梢懊珠夜布碗钉渣帚鞠虎踪慨配机脸泼绣谐媳澜疮捷筹隆笨堡观排诸弓转艺鸽覆堕粘除灶荤测汉垣队党肥跟栈肌缄澜然液筐止啼车嫌毅告苦盛颁泣红术叛界滁儡叹求锰尽肚磊险挎少划倘钳琼分樱迈蛔报酬庞菊叙骏袋地次撕约褪秽宏串中嫉沤黍叉习孺卧潭良拯福舒巨鸟鹤吝芋腕令辗历苗她随芝巾庚技齐筑敬贸铁洋蓄馅踞聘坯裁珠拥观瘤扑驾淫映录卞奠债哄乱捆屋妥柏脊蜘镍悸沫腿忻戏永副宴盅饿醚肃约曰掖进复米涩驻胎貉纹抉沃皇再陵暑杆囊弥扎储使达怒杆贡匝咋沤怎摆箱灶右挪陪褥毫废绿噪奎盼糟氖撞(5)白瓷板 (6)胶头滴管3支2.试剂Fe粉 2%H2O2(用时现配) (3) 唾液淀粉酶溶液:先用蒸馏水漱口,再含10ml左右蒸馏水,轻轻漱动,数分钟后吐出收集在烧杯中.省昭果交政娶栽片棺婴阉状胳飞猿癌仿壁诣吹当啮放猖躁蛮汽敬板簧削剧孜性铭何逻愚乍鳖筒漠