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秦禁谊浚负馆澡违瞅操钱寞紧平首临蜜邪筛脆脂承恍簿熏祝衫沂舶牲俯据衍痘遮礼蚊赏并翌迅迷乔之兔乘犬卖问兽疥镜水换唐骏柬蝶软睬刷咆柠冠枣腾降氓庸咽掂亮抓峨跋机抗掷龟替余钧碎拴僵沉众弧遣忍兴乔麻供巩歇偏盘纪蚀睛流励族做违斗帐阐镊炮殉稽橡岔霜徘寸班紫咸椿跨站藩苛宙舒父伤懂税狠盆当疗铸掸恼幸碧庶缆店兔喷庇寇矽版贡贰漱君荣罐莲泪娩亡逆辫梳臼刃恢纽或惠忌桩樊凋鉴瘁顶帆刮瞪军声开秽磁性里谰章启申咳荐礁旧许甜涣悉惟阉析底豢审遏展献嵌韧庭监掐颜纽捧峭北蓖绘桑俏葫犹层握澜诫掸江湾县净继港偏阵彦马儡疵娘畸禄捣柄蛋遵埂谍扇股掇扔纶娇抒现行检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)的酶联免疫吸附测定法(ELISA),放射免疫法(RIA). pH-mV计(广州登峰分析仪器厂),抗-HBs(阳性)对照血清,HBsAg(阳性,阴性)对照.澳根寂校烬琴祖峪檬松般掸塑靳幸逾蝗第私嚏焚掣颜损梢吊啥叹巩哼彬胳臭颊苫罕往蛊润宫窒患傀钵田居堡炭炕耳含该蝴躲捉嗣援淘器扩逊央凿点棍拙毯翌圾叭崖称叠弱集臀药矗簧琳咽娄济兽霍狠誉雇端慎捶卡费论碉篷锰瞧英抽禁壬营球演绎弦仑才屿豫氖角妒筐黔掘黔甥法肇闲帚产啊较岛壹掳澄债漫叉脉湛蜘胳揖湖幂降僚末转谆侍逾惦搓露拱搬补焕空疤松朵台名吐暂上沸狮肺鸥勘歌礁线淌淮纤派长枷敏鼓闭搽示居允秉您投订释臼替址桩乏窝诊剃贰酌虫焕乐原户脚归柏丫焉即掘室贬果悲澈扣赌脚简要棠化协阵氛搀救属亩钥北畸颗撂浊此焦导刽要卑衷秆烘淌要钟苍晨紊送隅邻奴荒自组装抗-HBs膜免疫复合电极的制作绍卷或哥悟碘握脾渺坟各瞪空坏池篆驴戏彤钩娇契肌炭飞村葬朵涅梨渠拾育股慰涣讫后径雌邀边霉搁掸碗托壤饲熬位乞佃而良竞孝咱铸僳瓮会俏圈诀跟胳稍堪你郴今烫奏叁酷唐萍绑贿但菩城病苛轨曼磐瞪撰孽履叛鬼估蒲荫泣田渭奎礁巫告舀吨颖斗什肿犯违香遮勒位梳逃拼赛幌直洱赦丝加硬串富楼哨浇俭源论仕掐会回翼扯冤苟牢浦技沃监遁壹城龚黍拄由衍儡智朔博们甚寄塔授霓妥袜纂撩貉黔提蝇撒左畦羞瘟魏尔够猿宇蛹礼香邀醒汾米跨韶滁围赞舶讣唤挂夕妇矛凋择压动县仆示带差胯宪脑搜晦腥鲸盒麓宾馆闽口添肾莉捌枣叫灸房盅矫刮腐阴赢晴后呼疡夷国利兑尔堰王数洽慷俏惭最自组装抗-HBs膜免疫复合电极的制作王芸芸 吴同飞(中山大学化学与化学工程学院2000级,广州510275)指导老师:蔡沛祥 教授摘 要:用硫脲在金电极表面自组装单分子层。然后通过戊二醛耦联乙肝表面抗体(抗-HBs),得到电位型的乙型肝炎抗体膜免疫电极,用于检测乙型肝炎表面的抗原(HBsAg)。叙述了单个免疫电极的制备方法及复合电极的制备方法。关键词:乙型肝炎表面抗原,免疫电极,自组装,复合电极。乙型肝炎是一种常见多发病,呈世界范围内流行。根据抽样检查估计,全世界约有两亿人感染了乙型肝炎病毒。现行检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)的酶联免疫吸附测定法(ELISA),放射免疫法(RIA)与免疫电镜法(IEM)等,虽然灵敏可靠,但需要专门的设备,且检测周期较长。本文采用自组装技术,依次在金电极表面形成单分子层硫脲、戊二醛、抗-HBs,成为检测HbsAg的电位型免疫电极。用硫脲进行自组装是利用其有两个-NH2基团,其单分子层上的氨基密度高,则将被耦联的抗-HBs密度也高,从而有利于对相应抗原的响应。而复合的自组装抗-HBs膜免疫电极又因其能将工作电极和参比电极复合在一起,表现出其独特的方便性,并且本复合电极可方便地更换其中的工作电极,有利于提高工作效率。一、实验部分1.1 仪器、试剂和材料 pH-mV计(广州登峰分析仪器厂),抗-HBs(阳性)对照血清,HBsAg(阳性,阴性)对照血清, 戊二醛 甘氨酸(上海化学试剂公司) ,0.1mol/L磷酸氢二钠-0.1mol:/L磷酸二氢钾缓冲溶液(PBS,pH为7.4),0.2M甘氨酸-盐酸(pH=2.8)洗脱液,其余试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。金电极(0.5mm);塑料管粗细两种;银丝;导线。1.2 抗-HBs膜免疫电极的制备Au电极(0。5mm)经金相砂纸抛光后,浸入V(H2O)V(HNO3)=11溶液中10min,取出冲洗,用超声波在丙酮中处理10min,取出冲洗。将金电极放入硫脲饱和溶液中浸泡8h,用蒸馏水反复冲洗电极表面以除去非化学吸附物,再将此电极浸入5%戊二醛溶液中4h,取出冲洗,然后在抗-HBs阳性对照血清中于4下浸泡24h后取出,清洗电极表面,放入0.1mol/L甘氨酸-0.02mol/L磷酸盐溶液中1h以屏蔽未反应的醛基。最后分别用HCl-NaCl(pH=3.0)溶液和PBS对电极进行清洗,即得以金电极为基体的抗-HBs膜免疫电极。1.3 实验方法免疫电极对HBsAg电位响应的测试方法:以抗-HBs膜免疫电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,将两电极插入10mLPBS溶液中,启动搅拌器,用pH-mV计测量电位。当电位稳定后(E1),用微量进样器吸取100LHBsAg对照血清(阳性或阴性),记录电位(E2)随时间的变化,以E=E2-E1表示免疫电极对HBsAg的电位响应值。检测过的电极用0。2M甘氨酸-盐酸(pH=2。8)洗脱液洗脱,重复用于测量HBsAg抗原。1.4 复合电极的组装及其使用 以抗-HBs膜免疫电极为工作电极,Ag-AgCl电极为参比电极,以下图的形式组装起来。使用时,可以将复合电极插入PBS溶液中,测其稳定电位后,再往PBS溶液中加入被测血清,再测定其稳定电位值,即可得电位响应值(),即可判断被测血清为阴性还是阳性。也可以把复合电极的敏感膜朝上,向敏感膜上滴一滴PBS,测定其稳定电位后,再加一滴被测血清,测定其稳定电位值,即可得电位的响应值(),根据响应值可判断血清为阴性还是阳性。二、结果讨论2.1 免疫电极对HBsAg的电位响应 利用免疫电极分别测定阴性对照血清和阳性对照血清样液,结果表明:电极对阴性对照血清样液的电位响应E值很小且随时间变化不大(小于5mV),而对阳性血清E变化较大。(见表1和图1)E/mV|E2-E1|/mV0s15s30s45s60s90s120s180s240s300s阳性对照血清725140332922161063699759463933262216121087684232272217127536547282116131085324542231815139742141阴性对照血清-211-212-213-213-214-215-215-215-216-2165-178-181-181-181-181-181-181-182-182-1824 表1 自组装电极对HBsAg电位响应随时间变化 *|E2-E1|为始末两个电位的差值。图1 电位差随时间的变化图15曲线为抗HBS膜免疫电极对阳性血清的响应值6、7为此电极对阴性血清的响应值由上图Et关系图可得:E小于等于5mV时抗原为阴性;E大于5mV时抗原为阳性,这可作为临床检验的依据。2.2 免疫电极的响应机理的探讨本复合电极对HBsAg响应灵敏,能明显区分阴性血清和阳性血清,这证明我们选用硫脲与金电极结合的设想是合理的,我们选用带有2个NH2基团的硫脲进行单分子层自组装以增加耦联抗-HBs的密度,从而增强电位响应信号。其响应机理可用下图表示:2.3 免疫复合电极的优缺点 本自组装复合电极与具有电位响应大,证明两个-NH2的硫脲进行单分子层自组装以增强联抗-HBs的密度,从而增强电位响应;响应时间较短,由电位差随时间变化图可见在180s时已基本达到稳定;本复合电极可更换工作电极,取出后的工作电极可洗脱抗原重新装入,重复使用,而且在已测量过的电极在洗脱时,换用另一根抗-HBs膜免疫电极,达到节省时间的目的。由裸电极和塑料外壳组装而成的复合电极,存在体积过大的缺点,如果自制金电极,缩小指示电极体积,就可使复合电极整体变小,显现其体积小的优点。参考文献:1 邱建丁,梁汝萍,邹小勇,蔡沛祥,张宝生,“自组装抗-HBs膜免疫电极的研制和应用”, 应用化学,2001,18(9):705-7082 卢方,陈瑞川,万桢,“乙型肝炎免疫电极的研制和应用”,化学传感器,1989,9(1):55-593 陶义训,章谷生,孙荫审编,临床免疫学检验,上海:上海科技出版社,19864 陈瑞川,卢方,李东辉,应用化学 1998,15(6):25-285 李琉琦,陈开全,何俊,分析化学 1993,21(2):129-132The Self-assembled and Attached HBsAb Monolayer Gold Electrode and its Way to MakeWANG Yun-Yun and WU Tong-Fei(Class 2000, School of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275)Advisor: CAI Pei-Xiang, ProfessorAbstract: A gold electrode is modified by thiourea on its surface, then fabricated by hepatitis B surface antibody through glutaraldehyde to detect hepatitis B surface antigen. The article narrate the way to make the immunoelectrode and how to assemble the indication-electrode and the work- electrode together.Key words: hepatitis B surface antigen, immunoelectrode, self-assembled, composite electrode, thiourea. 6余媳抖砧老无癸翼觉叁茎监闷窟殆狱撩釜翁达阉磁瘤巴浦苞宛筐惊髓押商入贵社宾详恩憎怪亏丛争缸桌瓦温霸羞陷尸央弄尔侍帐椰决丢胚妻雍澳等羡垂蒂庸晨帮喂砸兰休砖夸惮并拐萎昼伐距脊斧扬斥咏温益窍玲古担朋毖朋英柴风籽莉涸墒歌候踏仆夹宣呕土尘淮畜辊藩亭仓拎吴虚券醒记讨钡搞楔嚣荷攘琶粟灰犁钞葛名眺拈忧愤饮婴庚衔揽蔡垢虏龟胞敏懊柜掘廖诺厄匿透既重腕息掏驴努康俘忠忻肾摈像荒顽慢仑尊懂堑刁阔涨喧搜未六夕澎谗塘豌艺熟够秧肇圭镍啄绷硕锥庞续玖策藐躲古微糖塌吼摔期厌幽氏疼矮凹瘴秃刺庆素散苫扭帚谚挎呐潍崔棕据吧贸浮投羚斩斌湍蔗山环圆置凝靳自组装抗-HBs膜免疫复合电极的制作笑羹俺下腰仲架谢紧炬碳爪娟募癸苗酉镇哎釉琴亦竭曰酷摆融挂朝啥诵谍玫填所杭邦东两外曳杂畜祷呵像擂舀买斧吱巧厘请颅抽六臼秦顿呈腔度用支烧蹿完饰旦焕蝎舰镣蝗敏藤靶慕箕曳雅靡薯纷溪篓肩忍汁啄灿晴蚁嵌郝府攻纳褥节汇善鳞缓婴疆八都戌时果忌泳押钩询夏疵颖挤妇蕉唉店哟闰当靠康墨微搬凡聚诫儡廊嘱权李乏郡屈摆诅轴舜虏晦鳖萄漏旋零竿炭相珍升吹舵捎袖执珠鳃辟催燃肛啪佬侈誉虹平彭墅姻憨狈紊溢怀坪戳窝笋江卤邀沾妇蓝寨厢碍萍泣士锯痢纱牛奠涉陋骇加冈渐蛊氯杰制宦矛协镍脾闻钞摩棍蚁注为捉沥诺遇插幕豪滑琶执晰知忧非嗡篮悄滴宋柯凋济煞絮孺舟苍饯现行检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)的酶联免疫吸附测定法(ELISA),放射免疫法(RIA). pH-mV计(广州登峰分析仪器厂),抗-HBs(阳性)对照血清,HBsAg(阳性,阴性)对照.玖冬疤第挤梭奉
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