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临床实验室的环境与安全防护,上海交通大学医学院附属瑞金医院 季育华,目的(意义),确保工作任务的完成 (以人为本, 和谐社会),相关重要文件,实验室 生物安全通用要求 中华人民共和国国家标准 GB 19489-2004 实验室生物安全手册 （WHO） 年出版 年月再版 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 2002年编写,第一节 临床实验室的环境与安全管理,Environment,范畴： 非生物环境（空气、土壤、水流） 生物环境（植物、动物、微生物） 要求： 无害 （无医源性污染） 肃静 （允许噪声） 整洁 （整齐清洁） 美观 （摆设绿化）,一、临床实验室对环境的要求,1、空间分配合理 2、运行设计有效 3、采样设施保证隐私、合理 4、设计与环境适合所从事的工作 5、特殊的检测、控制系统建立 6、进出人员、路径控制 7、区域整洁、个人防护规章制度 8、储存空间与条件,设计图示,废弃物的处理,要求：专门设置（达标、合理、通畅） 废弃物包括： 污水（先处理后排放） 污物（分类、处理、丢弃） 废气（通风、排风） 放射性废物（埋藏、稀释、衰变）,实验室的温湿度,温度： 夏季（1828） 冬季（16 20） 湿度： 夏季（30%） 冬季（70%） *精密仪器：温度（夏26，冬20） 湿度（夏冬50%）,布局,门窗（朝向） 电源（载量、插座、接线板） 仪器（防震、潮、腐蚀、避光） 墙面 地面 天花板 实验台 储物橱（架）,BSL-2实验室,BSL-3实验室,二、临床实验室主要的危害源,（一）生物源危害 （二）化学源危害 （三）物理源危害,（一）生物源危害,1、定义： 是指对人类和动物有危害或潜在危害的 传染源。 2、来源： 临床实验室中处理的病人标本（细菌 病毒、真菌、寄生虫）,（二）化学源危害,1、含义： 临床实验室内的部分化学品具有易燃、 可燃、刺激、腐蚀性或剧毒性等危害。 2、易燃、可燃及自燃等区别 3、来源：,易燃、可燃及自燃,1、按照液体的闪点分级： 级（28） 级（ 28 45 ） 级（ 46 120 ） 级（120 ） 2、属于、级 易燃液体（酒精） 属于 、级可燃液体（润滑油） 闪点：闪燃的最低温度，闪点越低危险性越大。,闪燃（自燃）： 易、可燃物质在常温下自发热或没有 外界热源的直接作用，由于散热受到 阻碍使得温度上升，达到一定温度便 自发出现燃烧现象。 对策： 限存量、放置通风（水池下）、加强安 意识全,（三）物理源危害,一、来源： 1、噪音 2、辐射 3、紫外线 4、电磁场 5、其他,三、临床实验室的安全与防护,（一）电气设备 （二）防火 （三）水灾和其他自然灾害,半自动化学发光免疫分析仪 ECLIA-M系列,(电气) (设备),全自动化学发光免疫分析仪ECLIA-A系列,用电安全,1、购买电器设备有准入制 2、安装、使用、维修（资质、操作手册、 培训、考核与监督） 3、电器插座（有地线的双联插座） 4、电器插座（间距） 5、保险丝插座板（编号、就近） 6、定期检查记录制度,防火,现场配备： 灭火设备 报警装置 疏散路径 通道标识 规章制度： 安全实施 责任人、培训,常用灭火器的类型与用途,1、二氧化碳灭火器 二氧化碳压缩于小钢瓶，启阀门喷射 最适扑救：易燃液体，600V以下带点 设备及宜用水、泡沫或干 粉灭火而损坏的 2、泡沫式灭火器 最适扑救：非水溶性易染液体（油等） 和固体（木材、橡胶、纤维） *水溶性可、易燃（醇、醚、有机酸）和带电设 备、仪器等不能用泡沫式灭火器扑救 3、1211灭火器（卤化物二氟一氯一溴甲烷） 最适扑救：油类、精密仪器设备、文物、图书等,其他灾害,第二节 临床实验室生物污染与生物安全,概述,生物安全防护（biosafety containment） （定义）：指在实验室环境下处理和 保存感染性物质的过程中采用 的一系列的防护措施，包括一 级防（primary containment） 和二级防护（secondary- containment）。,概述,生物安全防护（biosafety containment） （目的）：是减低或消除潜在危险因子 对实验人员、实验室内外环境的 污染。 （要素）：1、实验室操作和技术 2、实验室安全设备 3、实验室设施设计 其中一级防护与二级防护有别,一级防护与二级防护的区别,一级防护： 包括规范操作技术与规程，配置适当 的安全设备，保护操作人员和室内直 接环境免遭感染性物质的污染。 二级防护： 包括合理的实验室设施设计和严格规 范的操作流程，用以保护实验室外环 境免受感染性物质污染。,一、临床实验室生物污染的原因及种类,原因：致病因子，包括细菌、病毒、真菌 寄生虫及其他。 种类：空气污染、水的污染、人体污染、 物体表面的污染。,空气污染,内： 平面布局、气流方向 合理 死角区域 缩小 外： 直接外排或扩散 高效过滤 密闭或压力差,水、人体、物体表面污染,实验过程中产生的大量污水 特殊处理后排放 工作人员实验室感染（接触、吸入） 专门防护规程 物体表面污染（溅出、溢出、穿用错误等） 正确实施,二、临床实验室的生物安全防护,概述： 1、目的:(p234 两个确保) 2、内容:(根据实验室级别) 3、评估:(实验对象对人或环境的危害性),（一）实验室的分类、分级及适用范围,分类：一般生物 脊椎动物 一级（BSL-1） 分级：二级（BSL-2） 三级（BSL-3） 四级（BSL-4） 适用范围：级别不同 要求不同 适用范围不同 (biological safety labolatory, BSL),分级原则: 据所处理的微生物及其 毒素的危害程度,（BSL-1) 无致病作用的微生物。 （BSL-2）具有中等潜在危害的微生物。 （BSL-3) 呼吸传播，使人传染严重甚至是致病 微生物及其毒素，传播途径明，目前 已有疫苗。 (BSL-4) 高度危险性，通过气溶胶传播或传播途 径不明，目前尚无疫苗或治疗方法的致 病微生物及其毒素。,不同级实验室的适用范围和设置,一级生物安全防护实验室,1、适用于： 用于教学的普通微生物实验室 2、要求： 无须使用生物安全柜,二级生物安全防护实验室（BSL-2）,1、适用于： (1) 含漱液、血清和血液等样品的诊断检测 (2) 溶液、固定或用其他方法处理灭活的病毒和/或无传染性病毒基因片段 (3）常规的细菌和毒素检测 (4）能产生气溶胶的样品处理 (5）临床样品的包装、分装 (6）离心管和离心机转头的封闭与开启,二级生物安全防护实验室（BSL-2）,2、特殊情况: （1）致病微生物气溶胶或溅出的操作 （2）处理高浓度或大容量感染性材料 3、要求： 在生物安全柜或物理抑制设备中进行，并使 用个体防护设备。,三级生物安全防护实验室 （BSL- 3）或相当于P3实验室,1、适用于： 主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至 是致死疾病的致病微生物及其毒素（如禽 流感），通常已（可）有预防传染的疫 苗。艾滋病病毒的研究（血清学实验除 外） 2、要求： 在三级生物安全防护实验室中进行。,BSL-2（P2） BSL-3（P3）,BSL 4,戏称为 魔鬼 实验室 分 五个区 有 10道门,洁净台/生物安全柜(BSCs),洁净工作台,1、环境空气工作台过滤样本直接 吹向操作者排入室内 2、保护产品，不保护操作人员及操作环境 3、通过样本的空气过滤对直径大于0.3微 米的颗粒，过滤效率99.9%无医院药房 或无菌设备的组装。,生物安全柜,1、环境空气进入工作台过滤样本 高效过滤排入室内或室外 2、经过样本的空气及排放出的空气均经过 滤，对直径大于0.3微米的颗粒，超高 效过滤器的过滤效率为99.999%。 3、采用负压装置，形成气幕防护屏障，保 护操作人员安全应用于有一定生物危险 的操作。,洁净工作台生物安全柜,1、环境空气（流动/排出方式） 2、使用目的（产品、操作人、环境） 3、空气滤过能力 4、气幕屏障 5、应用,生物安全柜工作原理,1. 物理屏障 2. 高效过滤 3. 空气屏障 4. 定向层流,生物安全柜 的分型,CLASS级生物安全柜 CLASS级生物安全柜： 1、 CLASSTAPY A型 2、 CLASSTAPY B1型 3、 CLASSTAPY B2型 4、 CLASSTAPY B3型 CLASS级生物安全柜,I级生物安全柜,保护操作者和操作环境。 样品没有得到保护。 通过样品区的空气，经高效过滤器的过滤之后，100%地排放到实验室环境中。,II 级生物安全柜 A型(B3),30% 外排进入环境 30% 外界空气补充 70% 经过滤后循环使用,II 级生物安全柜 B1型,70% 外排进入环境 70% 外界空气补充 30% 过滤后循环使用,II 级生物安全柜 B2型,100%外排进入环境 100%外界空气补充 无循环使用的气流,III级生物安全柜,样品、操作者、操作环境都得到保护（操作时戴全密封手套） 100%外排进入环境 100%外界空气补充 无循环使用的气流,(二)实验室生物安全的个人防护,一级生物安全防护实验室,无须使用生物安全柜和专用特殊设备等。 应穿工作服，手上有皮肤破损戴手套。 操作中可能有危险物溅出应有适当防护。,二级生物安全防护实验室,（1）可能产生病菌气溶胶、溅出的用生物安全柜 （2）当操作不能在安全柜内进行，必须外部操作 时，必须使用面部保护（护目镜、面罩、个体呼 吸保护用品或其他防溅出保护设备）。 （3）应穿工作服或罩衫，离开时，不得穿着外 出，应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢 弃。 （4）当手可能接触感染材料，应戴手套。如可能 发生溢出或溅出，应戴两副手套，一次性手套不 得清洗和再次使用。,三级生物安全防护实验室,（1）必须安装级或以上生物安全柜，感 染性材料的操作应在生物安全柜中进行。 （2）当操作不得不在柜外进行时，必须个 体防护与使用物理抑制设备综合防护措施 （3）在进行感染性组织培养、有可能产生 感染性气溶胶的操作时，必须使用个体防 护设备（如呼吸保护装置等）。 （4）入室工作前/后有专用更衣室，室内有必备品（消毒剂、冲洗液、药品等）。,四级生物安全防护实验室,1、在级生物安全柜中进行操作。 2、入室必须换上全套实验室服装。 3、实验室必备的配套装置与装备。,(三)实验室设计和建造的特殊要求,（1）选址 （2）选材 （3）布局设计 （4）内部设施,（1）选址,BSL-1：有门能与外界隔开 BSL-2：应远离公共场所 BSL-3：单独隔离区域或独立建筑 BSL-4：特殊工程,（2）选材,1、使用坚固器材 2、便于清洗，防滑，无缝隙，防水、耐 热、耐消毒剂及相应的化学用品等。 3、密封性能好。,（3）布局设计,1、合理 2、大型设备固定、有空间 3、生物安全柜安装无碍实验室的通、排风 4、有光线，避免反光、闪光等,（4）内部设施,BSL-1：洗手池（近出口），移液器。 BSL-2：洗手池（肘动），消毒设施，生 物安全柜。 BSL-3：还需设置缓冲区，密封，独立的 管道化排气系统，“洁”至“污”的气 流流向，级生物安全柜（套）。 BSL-4: 专门设施,(四)临床实验室安全操作规程,1、每个实验室必须制定 2、不同等级，不同要求 BSL-1：采用标准的微生物操作规程 BSL-2：还需特殊安全操作规程 BSL-3：同上有进一步要求 BSL-4：略,标准的微生物操作规程,1、准入制 2、工作区禁止事项（饮、吸、化妆等） 3、手 4、禁止口吸 5、实验室的整洁与消毒（台、地面等） 6、培养、储存及废弃物的指定处置 7、锐器使用的安全性 8、意外事故紧急预案 9、标志醒目 10、控制昆虫、啮齿类动物的措施,特殊安全操作规程,1、实验室门、窗 2、实验室负责人的最终责任确认 3、入室人员的限制、培训、体检与预防 4、对污染锐器的使用规定 5、实验产生污染性废弃物处置规定 6、器材、设备污染处理，维修？维护？ 7、偶然事件的应急预案 8、监测系统的运作,三、微生物实验室生物安全防护,1、临床微生物实验室中引起实验室获得性 感染的微生物种类 细菌：布鲁菌、铜绿、结核、肠道致病菌等 病毒：经血、呼吸道传播的病毒，其他病毒 真菌：二相真菌、孢子菌等 其他：衣原体、钩端螺旋体等 寄生虫：弓形体、疟原虫、血吸虫等,三、微生物实验室生物安全防护,2、引起微生物实验室中工作人员发生实验 室获得性感染的途径 经空气传播：吸入（气溶胶、实验物） 经口传播：“手口”，食入 直接接种：针刺、划伤或咬伤 黏膜接触：（眼结膜） 节肢动物媒介：蚊、蜱、跳蚤等,三、微生物实验室生物安全防护,3、临床微生物实验室中引起微生物感染机 体的方式 接触损伤皮肤和黏膜： 吸入： 食入： 接触感染动物：（见教材p250）,三、微生物实验室生物安全防护,4、微生物实验室中病原微生物危险度评价 依据 对人或动物毒性的强弱： 特定病原体是否存在国内： 引发临床症状轻重、病程长短、预后情况： 潜伏、慢性、不典型难诊断，无法预防,三、微生物实验室生物安全防护,5、微生物实验室中病原微生物危险度分类 标准 级危险：个体/群体极大危害 级危险：个体极大危害/群体极小 级危险：个体中度危害/群体较小 级危险：个体/群体没有或极小,三、微生物实验室生物安全防护,6、微生物实验室操作的生物安全保障措施 工作人员的培训与教育 工作人员的安全教育 微生物实验室操作流程的指定与实施： （样本收集、运输，接种，混匀，研磨，移液， 开封，离心，注射，搬运，锐利器材使用等）,三、微生物实验室生物安全防护,7、微生物实验室消毒措施 功能区域划分不同，采用措施不同。 消毒区域（空气、地面、物体表面、手等） 消毒方式（照射、消毒剂、洗涤等） 意外事件,三、微生物实验室生物安全防护,8、微生物实验室废弃物及处理措施 属于感染性废弃物：被废弃的各种标本 被标本污染的物品和容器 实验毕的所有消耗品 处置方法：灭菌和焚烧 实施注意点：回收物应先消毒后清洗,三、微生物实验室生物安全防护,9、应急措施 常备药品，特殊备用药品等 10、微生物实验室的“常规预防措施” 11、微生物实验室的菌种分类与保存 菌种引发实验室感染的机会、严重性等分四类 菌种保存必须规范（责任制）,四、临床实验室的消毒与灭菌,消毒灭菌方法： 热力灭菌 物理 辐射消毒 超声消毒 滤过除菌 干燥或低温抑菌 化学 消毒 防腐,手卫生,目的： 控制医院性感染的最重要 最简便易行 的措施 之一。 （包括保护个人自己）,手卫生,依据： 常居菌的存在（大部分人体皮肤上能 分离到的，如凝固酶阴性葡萄球菌、棒状 杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌属及某些肠 道细菌族成员等），固有，不易被机械性 的摩擦清除。,手卫生,