《水产品中四环素类残留的快速测定-胶体金免疫层析法》征求意见稿

ICs 67.050B 50水产品中四环素类残留的快速测定-胶体金免疫层析法Immunochromatography rapid test card for Tetracycline in aquatic products（征求意见稿）DB61陕西省地方标准发布前 言本标准由陕西省水产研究所提出。本标准由陕西省农业农村厅归口。本标准起草单位：陕西省水产研究所、农业农村部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心（西安）、无锡中德伯尔生物技术有限公司、国家水产品质量监督检验中心、西安市食品药品监督检验所。本标准主要起草人：杨元昊，李毅，杨娟宁，周丽，李峰钢。本标准由陕西省水产研究所解释。水产品中四环素类残留的快速测定-胶体金免疫层析法1 范围本标准规定了水产品中四环素类残留的快速测定-胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定方法、结果判定。本标准适用于鱼、虾组织中四环素类残留的快速检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法SC/T 3016-2004 水产品抽样方法3 原理本方法采用竞争抑制免疫层析的原理，样品中的四环素在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体与NC膜检测线上四环素抗原的结合。如果样品中四环素含量达到或超出检出限时，检测线T不显色，结果判为阳性。反之，当样品中四环素含量低于检出限时，检测线T显色，结果判为阴性。4 试剂和材料4.1 四环素快速检测试剂盒（见附录A）。4.2 水符合GB/T6682-2008中二级水的规定。5 仪器和设备5.1 电子天平：精度0.01g。 5.2 均质器。5.3 涡旋振荡器。5.4 离心机：转速不小于4000转/分。5.5 微量单道移液器：20-200L；100-1000L；1000-5000L。6 试样制备与保存6.1 试样制备抽样：按SC/T 3016的规定进行。食用样品取可食部分，去皮、骨和脂肪，均质到粉碎均匀（糊状），装入干净容器，标明记号。苗种直接均质至糊状，装入干净容器，标明记号。6.2 试样保存试样置于-20 保存。7 测定步骤7.1提取与净化准确称取1.0g粉碎好的待测样本于10mL离心管中，加入1mL提取剂A，震荡混匀2分钟，4000转离心5分钟，吸取0.5mL上层溶液至另一2mL离心管中，加入80L提取剂B震荡混匀，4000转离心2分钟，用移液器移取120L上层溶液待检。7.2测定7.2.1用移液器吸取待检样品溶液120L于酶标孔中，反复吹打至孔内红色物质完全溶解，等待反应5分钟。7.2.2将检测卡平放，吸取孔内所有溶液滴加到加样孔中，加样后开始计时。7.2.3反应3-5分钟判断结果，其它时间判读无效。7.3结果计算和表述7.3.1结果判定阴性：检测线T线出现红色条带，见图1，表示样品中四环素类物质残留低于方法检测限，判为阴性。阳性：检测线T线未出现条带，见图2，表示样品中四环素类物质残留高于方法检测限，判为阳性。无效反应：如果测试结果质控线C线未出现，见图3，表示结果无效。无效TC阳性TC阴性TC7.3.2 示意图无效阳性阴性图3图2图18 方法的检出限、回收率和精密度8.1 检出限本方法的检测限：四环素为80g/kg，土霉素为100g/kg，强力霉素为200g/kg，金霉素为500g/kg。8.2 加标回收率本方法在0.050.40g/kg的添加浓度时，回收率为70%110%。8.3 精密度本方法批内相对标准偏差10% ，批间相对标准偏差15%。附录A （资料性附录）四环素快速检测试剂盒A.1 四环素快速检测卡：20份（内含预包被金标抗体的酶标孔和检测卡）。A.2 提取液A：1瓶。A.3 提取剂B：1瓶。操作时请勿触摸试纸显示区，检测时避免阳光直射及风扇直吹。剂盒在4-30干燥、密封、避光