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文档简介

小鼠骨髓染色体制备与观察,王飞,实验目的,掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数,实验材料及流程,小鼠 2n=40 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片-染色-水洗-镜检,秋水仙素处理（已完成）,目的：抑制纺锤丝形成，增加中期分裂相细胞的比例 方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等待2-4h,处死,每四人领取一只小鼠 抓住小鼠尾巴将其转移到实验台上 颈椎脱臼法：一手按住鼠头，另一手抓住鼠尾靠近根部用力向后拉。将脊髓与脑髓拉断。 注意小鼠咬手，缓慢加力,解剖,剪去腿部附近皮毛，取出股骨胫骨，剃去周围肌肉组织。,每人一节腿骨,收集骨髓细胞,剪去骨两端，注射器吸生理盐水（0.85% NaCl溶液） ，针头插入骨腔反复冲洗几次，用1.5ml离心管收集骨髓细胞。 不要多次重复吸取含有细胞的生理盐水，总体积不要超过1.5ml,离心,离心条件：2000rpm 5min 注意用相同溶液配平 用注射器小心吸取上清，弃去。离心管内可以留少许液体,低渗处理,目的：使细胞内张力增大，细胞更容易破裂，染色体更分散。 低渗液配方：0.075M KCl溶液 离心收集细胞，去上清。 加入1.5ml 37低渗液，振荡(轻弹管壁)使细胞分散，在37 培养箱中保温低渗30min，做好标记。,固定,目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应，维持细胞结构不变。 固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1 离心收集细胞，去上清。 沿管壁缓慢加入1.5ml固定液，离心2min，去上清。 加入1.5ml固定液，振荡使细胞分散，室温固定30min,重悬,离心收集细胞，保留150ul固定液（可根据细胞量调整）. 振荡使细胞分散,滴片,目的：使细胞膜破裂，细胞核或核内染色体分散在载玻片上 方法：从40cm以上的高度将细胞悬液滴在预冷的载玻片上，滴两滴（载玻片1/3 和 2/3处）。滴加悬液时载玻片可适当倾斜（30度角），滴完后立即用嘴吹散细胞 空气干燥 注意：用废片和水练习动作 冰片表面用滤纸擦拭干净,染色-水洗-镜检,染料：石碳酸品红 染液覆盖所有细胞，载玻片下垫纸巾 染色5min 水洗：用较小的水流冲洗载玻片背面，流水将从载玻片边缘带走染液 滤纸擦干载玻片背面水分，空气干燥，无需盖玻片，镜检 10倍镜下锁定目标细胞，40倍镜下观察染色体,中期分裂相特点,染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 可见三种形状的中期染色体,结果展示,注意事项,安全：老鼠咬手、染液和固定液不要接触皮肤 离心前注意配平 标记自己的样品管 水洗过程中要时刻记住载玻片的样品面和背面 待玻片完全干燥后再镜检,课堂及实验报告要求,课上完成实验记录（实验步骤，现象），教师签字 课后补充完成全部实验报告（目的，原理，结果，讨论等其他细节） 实验结果的要求：中期染色体照片，尽量找分散度适中、染色体数目完整、背景干净的区域拍照。记录照
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