水中微生物的测定

实验 水中细菌总数的测定,实验目的,掌握水样的采取方法。 掌握水样细菌总数测定的方法；了解水源水的平板菌落计数的原则。 学习检测水中大肠菌群的原理和方法。 了解大肠菌群数量与水质状况的关系。 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。,实验原理,饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。 细菌总数是指1毫升水样在一定的培养基平板（普通琼脂培养基）中，3724小时培养后所生长的菌落数，此值仅是一种近似值。一般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过100个。,如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原菌，常常有困难。 而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000毫升自来水中大肠菌群不超过三个。,实验材料,普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸钠培养基。 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、试管。 自来水、池水、河水或湖水,实验步骤,水样的采取 自来水： 先将自来水龙头用火焰灼烧3min，再开放水龙头水流5min，以灭菌三角烧瓶接取水样。 池水、河水或湖水： 取距水面10-15cm的深层水样，将具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，盛满后将瓶塞盖好再从水中取出。,菌落计数方法 （1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数2 （2）选择平均菌落数在30300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。,计算菌数落总数方法举例,五、实验报告 1结果 （1）自来水,（2）池水、河水或湖水等,大肠菌群检查 滤膜法 过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。,培养 水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37恒温箱内培养2224h。,观察结果 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 紫红色，具有金属光泽的菌落。 深红色，不带或略带金属光泽的菌落 淡红色，中心色较深的菌落。 凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。,计算滤膜上生长的总大肠菌群数 水中总大肠菌群数/个L-1滤膜生长的菌落数1000过滤水样量 （滤膜上菌