乳腺癌组织中P33ING1蛋白的表达及临床意义.doc

乳腺癌组织中P33ING1蛋白的表达及临床意义 作者：韦建宝，卢运龙，陈山荣，黄永秩 【摘要】 目的 探讨抑癌基因P33ING1蛋白表达与乳腺癌发生、发展的关系。方法 用S-P免疫组织化学法检测90例乳腺癌标本中P33ING1蛋白的表达。结果 P33ING1蛋白在乳腺癌组织中表达的阳性率为38.89%（35/90），在癌旁组织为75.56%（68/90），两者比较差异有高度显著性(P<0.01)。P33ING1蛋白的低表达与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移数目有明显关系(P<0.05或0.01)，与年龄、病理类型和病理分级无明显关系。结论 P33ING1基因是一个抑癌基因，它的低表达与乳腺癌的发生、发展有密切关系。 【关键词】 乳腺肿瘤；蛋白质类；P33ING1；基因表达；免疫组织化学 Abstract: Objective To explore the relationship between P33ING1 protein expression and occurrence and progress of breast carcinoma. Methods The expression of P33ING1 protein expression in 90 samples of breast carcinoma was studied by S-P immuno-histochemical technique. Results The positive rate of P33ING1 protein expression in 90 samples of breast cancerous tissues was 38.89% (35/90), and 75.56% (68/90) in the adjacent breast tissues. There was statistically significant difference between them (P<0.01). The low expression of P33ING1 protein is significantly related with tumor size and the number of metastatic lymph nodes(P<0.05 or 0.01), but had no relation with age, pathological type and pathological grade. Conclusion P33ING1 gene is an anticancer gene, its low expression is significantly related with the occurrence and progress of breast carcinoma. Key words: breast neoplasms; proteins; P33ING1; gene expression; immunohistochemistry 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，它的发生、发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活有密切的关系。ING1(inhibitor of growth-1)是一个新近发现的抑癌基因，它的过表达可抑制细胞生长和繁殖，促进细胞凋亡；它的低表达与肿瘤的发生、发展有关。笔者通过检测P33ING1蛋白在90例乳腺癌组织中的表达，探讨其与乳腺癌各临床病理因素的关系及临床意义。1 资料与方法1.1 标本来源收集我院2004年1月2006年12月手术治疗、临床资料完整的90例乳腺癌组织石蜡标本。1.2 一般资料本组90例乳腺癌患者均为女性，年龄2367岁，平均45岁；所有患者均行改良根治术，术前均未行放化疗。1.3 实验方法1.3.1 常规病理学检查常规切片和HE染色后用光学显微镜观察，组织学分级参照国际乳腺癌组织学分级标准。1.3.2 免疫组化检测免疫组化染色用链霉素抗生物素过氧化物酶(S-P)法（高温高压抗原修复后按试剂盒说明步骤进行，DAB染色），P33多克隆抗体购自加拿大的Stressgen生物试剂公司；结果判断方法：免疫组化染色片，随机选择每张片内的5个高倍镜视野（400倍），每个视野计数100个细胞，总计500个，细胞核和（或）胞浆内有棕黄色颗粒者为P33ING1蛋白阳性细胞，无棕黄色染色颗粒者为阴性细胞，阳性细胞数10%定为阳性片，10%为阴性片。1.3.3 统计学处理 计数资料采用2检验。2 结果2.1 P33ING1蛋白在乳腺癌组织中的表达情况 P33ING1蛋白的阳性着色为黄色或棕黄色，大多数位于细胞核，少数胞浆也着色；P33ING1蛋白在乳腺癌组织中表达的阳性率为38.89%（35/90），在癌旁组织为75.56%（68/90），两者比较差异有高度显著性（2=24.72，P<0.01）。2.2 P33ING1蛋白表达与乳腺癌各临床病理因素的关系 P33ING1蛋白的表达与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移的数目有显著相关，瘤灶<2cm或25cm组的乳腺癌组织P33ING1蛋白阳性表达率明显高于瘤灶>5cm组者（P<0.05），腋窝淋巴结转移数目为3枚组的乳腺癌组织P33ING1蛋白阳性表达率明显高于淋巴结转移数目4枚组者(P均<0.01)，而在不同的年龄段、组织学类型和病理分级组P33ING1蛋白阳性表达率差异均无显著性（P>0.05），见表1。表1 P33ING1蛋白表达与乳腺癌各临床病理因素的关系 (略)注：与<2cm组比较，a：2=4.47，与25cm组比较，b：2=4.54，P均<0.05；与<3枚组比较，c：2=15.41，d：2=6.94，P均<0.013 讨论3.1 P33ING1的构型及作用ING1基因是近年克隆出来的一个新的候选抑癌基因。Garkavtsev等1采用cDNA消减杂交方法建立了一种富含所需序列的cDNA文库中构建较简便的GSEs(genetic suppression elements)文库的方法，并结合体内选择技术成功地克隆了一种命名为ING1的候选抑癌基因。Garkavtsev2和Zeremski3等用荧光原位杂交和放射杂交法进一步证实ING1基因定位于人染色体13q33-34，蛋白产物P33ING1蛋白为核蛋白。Gunduz M等4通过酶切分析发现ING1基因是由三个外显子和两个内含子组成，ING1 mRNA至少可形成三种不同的剪接方式，编码三种以上不同分子量的蛋白，其中P33ING1蛋白是ING1基因的主要表达产物。它的过表达可抑制细胞生长和繁殖，促进细胞凋亡；它的低表达可促进细胞生长和繁殖。 本组90例乳腺癌病人中，P33ING1蛋白在乳腺癌组织中表达的阳性率为38.89%（35/90），在癌旁组织为75.56%（68/90），两者比较差异有高度显著性（P<0.01）；同时P33ING1蛋白的低表达与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移数目有显著相关，瘤灶<2cm或25cm组的乳腺癌组织P33ING1蛋白阳性表达率明显高于瘤灶>5cm组者，腋窝淋巴结转移数目为3枚组的乳腺癌组织P33ING1蛋白阳性表达率明显高于淋巴结转移数目4枚组者，而在不同的年龄段、组织学类型和病理分级组P33ING1蛋白阳性表达率差异均无显著性。表明P33ING1蛋白的低表达与乳腺癌的发生发展有密切的关系。这与有关的文献报道基本一致5,6。由此可见，P33ING1基因在乳腺肿瘤中是一个抑癌基因，在细胞的癌变、肿瘤的转移过程中有重要的作用，它的表达水平可以作为乳腺肿瘤进展和转移的一个生物学指标。3.2 作用原理P33ING1基因在细胞周期中如何起作用呢？Garkavtsev等7对鼠胚胎纤维细胞等的研究发现，ING1基因所编码的P33ING1蛋白为P53结合蛋白，P53抑制细胞生长的作用需要P33ING1参与。转染实验表明P53的转录激活作用依赖于P33ING1，没有P33ING1的参与，P53的抑制作用明显减弱。Shinoura等8利用转基因技术研究P33ING1和P53共同转染胶质瘤细胞系，观察胶质瘤细胞凋亡情况，结果发现利用腺病毒介导的P53和P33ING1基因共同转染胶质瘤细胞系，其细胞的死亡率要明显高于任何一种单一基因的转染细胞。P33ING1被认为是一种与P53共同参与细胞信号通路，是P53的分子伴侣，它对细胞周期调节功能的发挥部分依赖于P53的激活，从而对细胞周期起负调控作用。P21WAF1是野生型P53的激活片段，当DNA损伤时，P53上升通过转化生长方式诱导P21WAF1产生，从而导致细胞G1期阻滞和凋亡9。据此推断，P33ING1调控细胞周期的作用机理与P53、P21WAF1有着相互依赖和相互促进的作用。目前，我们已着手这方面的研究，相关结果将后续报道。【参考文献】 1Garkavtsev I, Kazarov A, Gudkov K, et al. Suppresion of the novel growth inhibitor P33/ING1 promotes neoplastic transformation J. Nat Genet, 1996,14(3):415-420.2Garkavtsev I, Demetrick D, Riabowol K. Cellular localization and chromosome mapping of a novel candidate tumor suppressor gene (ING1) J. Cytogenet Cell Genet, 1997,76(3-4):176-178.3Zeremski M, Horrigan SK, Grigorian IA, et al. Localization of the candidate tumor suppressor gene ING1 to human chromosome 13q34 J. Somat Cell Mol Genet,1997,23(3):233-236.4Gunduz M, Ouchida M, Fukushima K, at el. Genomic structure of the human ING1 gene and tumor-specific mutation detected in head and neck squamous cell carcinomas J. Cancer Res, 2000,60(12):3143-3146.5章烨，王雅杰，姜斌，等.ING1b基因蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义J.临床肿瘤学杂志，2004，9(5)：452-455.6王大维，张金廷，李庆星，等.P33ING1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义J.实用口腔医学杂志，2006，22(6):811-813.7Garkavtsev I, Grigorian LA, Ossovskaya VS, et al. The candidate tumor suppression p33/ING1 cooperates with p53 in cell growth control J. Nature, 1998,391(6664):295-298.8Shinoura N, Muramatsu Y, Nishimura M, et al. Adenovirus-mediated transfer of p33/ING1