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乳腺癌雌、孕激素受体与PCNA表达【摘要】 目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)的表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间的相互关系及联合检测对乳腺癌术后内分泌治疗方案制定和预测、预后的意义。方法 采用免疫组织化学链霉素生物蛋白过氧化物酶(S-P)法检测80例乳腺癌组织中PCNA、ER和PR的表达。结果 (1)80例乳腺癌组织中，ER、PR、PCNA的阳性表达率分别为65.0,575和6375。(2)乳腺癌有淋巴结转移组PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)，且呈正相关(P<0.01)，即淋巴结转移程度越低,PCNA阳性表达率亦越低。(3)PCNA阳性表达率在乳腺癌ER与PR阴性组均明显高于乳腺癌ER与PR阳性组(P<0.01)，且均呈负相关(P<001)，即ER与PR阴性则PCNA阳性表达率高。结论 PCNA阳性表达率与ER、PR阳性或阴性结果有关，PCNA与ER、PR联合检测，可为乳腺癌术后内分泌治疗方案的制定和预测预后提供辅助依据。 【关键词】 乳腺癌 乳腺癌为妇女恶性肿瘤死因首位，其预后的判断及与预后相关的生物标志物的测定倍受关注。乳腺癌雌激素受体(Estrogen Receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor，PR)水平是公认的估测乳腺癌患者预后和选择治疗方案的指标,而增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是一种表达细胞增殖周期的36kd多肽，直接参与细胞增殖过程中DNA的复制，其表达程度能客观反映肿瘤细胞的增殖活性，过度表达增加了瘤细胞转移趋势的危险性，因此，认为PCNA也可作为判断乳腺癌预后的指标1。为分析乳腺癌激素受体状态及其与肿瘤细胞增殖活性之间的关系，肿瘤细胞增殖活性的强弱与乳腺癌生物学行为的关系，对80例乳腺癌同时检测PCNA、ER和PR的表达，探讨其相互关系及在评估预后上的意义。1 对象与方法11 对象 收集我院19922002年女性乳腺癌根治标本病理检查存档资料80例，年龄3272岁，平均年龄4846岁。全部资料经2位病理医师审核，患者术前未做过放、化疗。所有标本均经10福尔马林固定，石蜡包埋，4m连续切片。乳腺癌分类根据“中国常见恶性肿瘤诊治规范”分为非浸润性癌、早期浸润性癌、浸润性特殊癌、浸润性非特殊癌4类。12 试剂 鼠抗人ER、PR，抗PCNApc10和链霉素生物蛋白过氧化物酶(S-P)试剂盒及过氧化物酶底物作用液二氨基联苯氨(Diaminobenzidine，DAB)(北京中山生物技术有限公司)；用己知乳腺癌组织阳性切片(中山公司赠)为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替I抗做阴性对照。13 方法 采用（S-P）法染色，按试剂盒说明书操作：二甲苯脱蜡，梯度酒精至水化后高压锅热处理58min，过氧化物酶阻断血清封闭，加I抗60min，磷酸盐缓冲液洗3次，每次2min；抗15min，磷酸盐缓冲液洗3次，每次2min;抗同抗。DAB显色510min，苏木素复染510s，脱水，透明胶封片。14 结果判断 ER、PR阳性表达以细胞核内有棕色颗粒为阳性细胞，并根据着色程度和比例划分反应等级，30为阴性，3040为轻度阳性，4060为中度阳性，>60为重度阳性反应；PCNA以细胞核内出现清晰的棕色或棕黄色颗粒为阳性诊断标准，每例切片至少观察5个高倍视野。15 统计分析 采用SPSS100 软件对各组ER、PR及PCNA阳性表达率进行2检验、Fisher确切概率检验和Kendall等级相关分析。2 结果21 乳腺癌ER、PR、PCNA的阳性表达率 80例乳腺癌中，ER、PR、PCNA的阳性表达率分别为650(5280)，575(4680)和6375(5180)。22 PCNA与乳腺癌淋巴结转移及组织类型的关系 在80乳腺癌标本中，有淋巴结转移52例，PCNA阳性表达率为750(3952)，无淋巴结转移28例，PCNA阳性表达率为420(1228)；有淋巴结转移组PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(2=8137,P<001)，且呈正相关(rs=0293,P<001)，即淋巴结转移程度越低、PCNA阳性表达率亦越低。非浸润性癌、早期浸润性癌、浸润性特殊癌、浸润性非特殊癌组织类型与其PCNA阳性表达率375(3/8)，400(410)，600(610)，7308(3852)呈正相关(rs=0286,P<005)，即肿瘤恶性程度越高，PCNA阳性表达率亦越高，但组织类型各组间差异无统计学意义(2=6845,P>005)。23 ER、PR与PCNA在乳腺癌中阳性表达的关系(表1) ER阴性组PCNA阳性表达率显著高于ER阳性组（P<001）；PR阴性组PCNA阳性表达率显著高于PR阳性组(P<001)；无论ER组或PR组均与PCNA阳性表达率呈负相关(P<001)，即ER或PR阴性表达则PCNA阳性表达率上升。表1 ER、PR表达情况与PCNA阳性表达率关系（略）注：*P<001;rs Kendall等级相关系数3 讨论乳腺作为女性激素的靶器官，其生长、发育和增殖均受女性激素的调控。通常激素依赖性乳腺癌占全部乳腺癌的50602。本研究结果的ER、PR阳性表达率分别为650，575%，与此接近。另外，ER、PR阳性乳腺癌一般分化好、发展慢，进行内分泌治疗有效率可达78；ER、PR阴性乳腺癌则分化差、侵袭性强、恶性度高，进行内分泌治疗有效率仅为10。因此，ER、PR受体的检测对判断乳腺癌的预后和指导内分泌治疗有重要意义。PCNA作为DNA聚合酶的辅助蛋白，直接参与细胞增殖过程中的DNA复制，其在DNA合成期开始升高，S期达到高峰，G2期开始下降，由于PCNA这一分布特点，故其表达程度能较客观地反映肿瘤细胞的增殖活性。有文献报道3，肿瘤细胞增殖活性高者，PCNA高表达，易发生淋巴结转移，说明PCNA过度表达增加了瘤细胞转移的危险性。本研究结果显示，PCNA阳性表达率在乳腺癌淋巴结有转移组与无转移组分别为750和4286，差异有统计学意义(P<001)，且PCNA阳性表达率与淋巴结转移情况呈正相关(P<001)。PCNA阳性表达率在乳腺癌ER与PR阴性组均明显高于乳腺癌ER与PR阳性组(P<001)，且均呈负相关(P<001)，此结果与张喜卿4报道的结果一致。PCNA阳性表达率与乳腺癌组织类型间虽有一定的正相关趋势(P<005)，但各组间PCNA阳性表达率差异均无统计学意义(P>005);可能与本次研究样本量较少有关。总之，由上述结果可见，PCNA与ER、PR联合检测，可为乳腺癌术后内分泌治疗方案的制定和预测预后提供辅助依据。【参考文献】 1 Takashima T，Onoda N，Ishikawa T，et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index and p53 expression predict outcome for breast cancer patients with four or more lymph node metastasesJ.Int J Med，2001，8(2)：159-163.2 刘复生.肿瘤病理学M.北京：北京医科大学中国