乳腺癌组织中paxillin和cerbB2的表达及临床意义.docVIP

乳腺癌组织中paxillin和c-erbB-2的表达及临床意义 作者：张彦武常庆龙冯爱强贾国丛吴亚群 【关键词】 乳腺肿瘤paxillin蛋白受体，c-erbB-2预后 Expression and clinical significance of paxillin and c-erbB-2 in human breast carcinoma 【ABSTRACT】Objective: To explore the expression of paxillin and c-erbB-2 in human breast carcinoma and to investigate the relationships of paxillin and c-erbB-2 with clinical and pathological characteristics. Methods: SP immunohistochemistry staining was applied to detect the expression of paxillin and c-erbB-2 in tumor tissues from 53 cases of human primary breast carcinoma, 10 cases of breast fibroadenoma and in 10 cases of normal breast tissues. Results: Breast carcinoma tissues showed lower levels of paxillin （P=0.003） and higher levels of c-erbB-2（P<0.001）than normal and fibroadenoma tissues. The expression of paxillin was relateded with pathological stages, histological grades and lymph node status, but not related with age, menopausal status, ER, PR status and tumor size. The expression of c-erbB-2 was relateded with ER status, histological grades and lymph node status, but not related with age, menopausal status, PR status，tumor size and pathological stages. There were no correlation between paxillin and c-erbB-2 levels. Conclusion: Paxillin and c-erbB-2 had relations with the malignant transformation, invasion and metastasis of breast carcinoma. 【KEY WORDS】 Breast NeoplasmspaxillinReceptor, c-erbB-2Prognosis paxillin是整合素下游信号传导的关键分子之一。近年来的研究发现，paxillin与细胞的黏附、迁移、增殖、细胞骨架的重组和细胞的恶性转化有关，提示它作为乳腺癌预后因子的可能性。本研究采用免疫组织化学（SP）法对53例乳腺癌、10例乳腺纤维腺瘤和10例距癌灶边缘5 cm病理组织学检查正常的乳腺组织中的paxillin和c-erbB-2蛋白分别做测定，探讨它们与乳腺癌临床病理因素的关系。 1资料与方法 1.1一般资料随机抽取华中科技大学同济医学院附属同济医院病理科2003年6月2005年8月经病理组织学检查确诊的存档石蜡标本，包括乳腺癌53例，乳腺纤维腺瘤10例，另取距癌灶边缘5 cm、病理组织学检查正常的乳腺组织标本10例，经10%甲醛固定和石蜡包埋后制成蜡块。所有乳腺癌患者均为女性，年龄3175岁，平均年龄49.6岁；病理类型：浸润性特殊癌4例，浸润性非特殊癌49例（包括浸润性导管癌43例，硬癌3例，髓样癌1例，浸润性小叶癌1例，腺癌1例）。所有乳腺癌病例按照AJCC第6版乳腺癌TNM分期标准进行分期。对浸润性导管癌按照Nottingham乳腺癌分级法进行组织学分级。 1.2主要试剂paxillin和c-erbB-2鼠抗人单克隆抗体均购自Neomarker公司；SP试剂盒购自北京中山生物技术公司。 1.3实验方法每例标本行4 m连续切片，常规脱蜡至水，加内源性过氧化物酶阻断剂，微波抗原修复，依次滴加正常山羊血清工作液、1：100稀释的paxillin或c-erbB-2鼠抗人单克隆抗体、生物素标记二抗工作液、辣根酶标记链酶卵白素工作液、DAB显色剂，各步骤之间用PBS液振洗5 min3次，孵育时间参照试剂说明。所有切片经苏木精复染、脱水、透明后封片。阴性对照片用PBS液代替一抗，阳性对照采用已知的乳腺癌c-erbB-2阳性片和结肠癌paxillin阳性片。 1.4判定标准paxillin的表达定位于细胞质和（或）细胞膜，c-erbB-2的表达定位于细胞膜，以相应部位出现棕黄色颗粒为阳性表达。具体判定采用半定量积分法：每片选取5个高倍视野（400），各计数100个细胞。按照细胞染色强度分为阴性（0分），弱阳性（1分），较强阳性（2分），强阳性（3分）；按照阳性细胞百分比分为<10%（0分），10%30%（1分），31%70%（2分），>70%（3分）。以两项计分的乘积作为判定标准。1.5统计学处理用SPSS12.0软件包进行分析。采用非参数检验，根据统计学分析性质不同分别采用Mann-whitney U检验，Kruskal-Wallis 检验和Spearman 等级相关 。 2结果 2.1乳腺组织中paxillin和c-erbB-2的表达paxillin主要定位于上皮细胞膜和细胞质,在间质细胞中也有少量表达。正常乳腺组织与乳腺纤维腺瘤中表达差异无统计学意义（U=48.00，P=0.873），乳腺癌组织中paxillin的表达较正常乳腺组织降低（U=129.50，P=0.008），较乳腺纤维腺瘤亦降低（U=135.50，P=0.012） ；c-erbB-2 主要定位于癌细胞的细胞膜。在正常乳腺组织与乳腺纤维腺瘤中表达差异无统计学意义（U=45.00，P=0.689）。乳腺癌组织中c-erbB-2的表达较正常乳腺组织增高（U=34.50，P 0.001），较乳腺纤维腺瘤组织亦增高 （U=44.00，P 0.001，表1）。 2.2paxillin和c-erbB-2表达与乳腺癌临床病理因素的关系paxillin的表达与患者的年龄、绝经状况、ER及PR状态和肿瘤大小无关，而与肿瘤的病理学分期呈负相关（rs= -0.387，P=0.004），在43例浸润性导管癌组织中与组织学分级呈负相关（rs=-0.364，P=0.017）；淋巴结转移较多的肿瘤paxillin表达亦较低（2 =6.447，P=0.040）；c-erbB-2表达与患者的年龄、绝经状况、肿瘤大小、PR状况和病理学分期无关, 在43例浸润性导管癌组织中与组织学分级呈正相关（rs=0.331, P =0.030）；ER阴性的乳腺癌多为c-erbB-2高表达（U =217.00，P =0.015）；淋巴结转移较多的肿瘤c-erbB-2表达也较高（2=8.780，P =0.012，表2）。paxillin和c-erbB-2的表达水平无相关性（rs=-0.140，P=0.316）。 3讨论 paxillin是位于细胞黏着斑部位的接头蛋白。本研究发现paxillin在乳腺癌细胞中表达显著减少，说明其与恶性转化有关。paxillin的相对分子质量为68103，处于黏着斑中心性地位,构成肌动蛋白与整合素之间的连接，同时能够与纽蛋白、踝蛋白、张力蛋白、FAK和癌基因蛋白如BCR/ABL、Src和Crk等相互作用。在整合素介导的细胞信号传导途径中，paxillin发生酪氨酸磷酸化，继之通过Ras/MAPK途径传导信号，可以调节细胞的增殖、存活、迁移和恶性转化。 有研究表明，paxillin在乳腺癌、肺癌和某些肝转移瘤中表达降低3-5。本研究显示在人类乳腺癌中paxillin表达减少，且其表达水平与肿瘤的组织学分级、病理学分期和淋巴结转移程度呈负相关，提示paxillin的表达减少是促进乳腺癌增殖和转移的因素之一。其可能的机制为： 1）研究发现在细胞的有丝分裂期，paxillin水平降低，而恶性程度高的肿瘤有丝分裂旺盛，所以其paxillin表达减少； 2）paxillin低表达使癌细胞与ECM的黏附能力下降，从而使癌细胞易于从瘤巢脱落，发生转移；3）多项研究显示paxillin可以控制细胞的扩展和运动能力，paxillin的低表达可能使癌细胞的迁移失去控制； 4）paxillin的正常表达是细胞正常增殖、分化、黏附、运动和细胞内信号传导所必须的，paxillin的表达下降干扰或阻碍了这些过程。其确切机制有待进一步研究。 c-erbB-2的相对分子质量为185103, 是表皮生长因子家族成员之一，具有内源性酪氨酸激酶活性，通过Ras/MAPK途径促进细胞的增殖。c-erbB-2在发生基因扩增和过度表达后具有致瘤活性，Slamon等发现2030%的原发性乳腺癌中存在c-erbB-2的过度表达。本研究发现乳腺癌中c-erbB-2水平显著增高，尤以ER阴性、淋巴结转移多、组织学分级高的乳腺癌为甚，提示c-erbB-2是促进肿瘤增殖和转移的指标，这与文献报道一致。还有研究显示c-erbB-2过度表达的乳腺癌对CMF方案化学治疗及三苯氧胺治疗不敏感。 整合素与生长因子受体的信号传导之间存在“cross talk”机制，即整合素可以促进生长因子受体的磷酸化和激活，而生长因子受体也可激活整合素的下游分子，所以理论上c-erbB-2也可激活paxillin。本研究显示paxillin和c-erbB-2的表达水平无相关性，说明paxillin和c-erbB-2的作用仍具有相对独立性，即c-erbB-2的致瘤作用并不依赖于paxillin的表达水平，直接激活Ras/MAPK途径可能发挥更大的作用。【参考文献】 1 Sattler M, Pisick E, Morrison PT, et al. 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