皮肤淋巴瘤中cyclinE的表达及临床意义.doc

皮肤淋巴瘤中cyclinE的表达及临床意义【摘要】 目的：探讨cyclinE在皮肤淋巴瘤中的表达及其在肿瘤的发生和发展中的作用。方法: 收集武汉大学人民医院病理科2006年2009 年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40 例, 其中22 例MF、7 例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6 例其他类型的T 细胞淋巴瘤、5 例B 细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。采用免疫组织化学方法观察各组组织内cyclinE的表达。利用HPIAS2000图像分析系统测定cyclinE在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：皮肤淋巴瘤中cyclinE呈高表达;癌旁组织中cyclinE呈低表达。图像分析结果显示：皮肤淋巴瘤与皮肤炎症病变之间cyclinE的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论：cyclin E异常高表达促进细胞增殖,从而在皮肤淋巴瘤发病过程中起重要作用。 【关键词】 皮肤淋巴瘤; cyclinE; 免疫组织化学; 图像分析皮肤淋巴瘤是皮肤恶性肿瘤之一,对皮肤淋巴瘤的分子生物学研究表明许多基因及细胞因子在皮肤淋巴瘤的发生发展过程中发挥重要作用,有不可忽视的临床意义1，2。细胞周期是细胞物质积累和细胞分裂的循环过程, 其有序进行受到严密的调节和控制。细胞无限性增殖是恶性肿瘤的重要特征,这与细胞周期运行障碍导致细胞生长失控有密切关系。cyclin E是细胞周期中重要的调控因子,主要作用于G1期和S期,是DNA复制的重要启动因子。其异常表达与肿瘤的发生发展关系密切3，4。为探讨cyclinE 与皮肤淋巴瘤的发生发展的关系及临床意义,本研究采用免疫组化的方法对皮肤淋巴瘤中cyclinE表达情况进行了检测,以期为皮肤淋巴瘤的早期诊断提供参考指标。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 材料来源 收集武汉大学人民医院病理科2006年2009 年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40 例, 其中22 例蕈样肉芽肿(MF)、7 例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6 例其他类型的T 细胞淋巴瘤、5 例B 细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。1.1.2 材料分组 将所有标本进行常规HE染色,将实验分为2组: 皮肤淋巴瘤组和皮肤炎症病变组。1.2 方法1.2.1 常规脱水、透明、石蜡包埋、切片及HE染色。1.2.2 免疫组织化学SP法检测cyclinE相关抗原。1.2.3 具体步骤： 4m组织切片常规脱蜡至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗33 min; 抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗53 min; 滴加3%过氧化氢，37湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗33 min; 正常羊血清37湿盒孵育10min以减少非特异性背景; 甩去多余血清，分别滴加一抗(cyclinE浓度1:50)，4孵育过夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗35 min; 滴加生物素标记的二抗37湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗33 min; 滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物37湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗33 min; 滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约35 min)，自来水冲洗终止反应; 苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝; 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检; 用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为cyclinE的阳性对照组。1.2.4 免疫组织化学结果判断cyclinE以细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对cyclinE的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(400) ,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。1.3 统计学处理数据以均数标准差表示，用SPSS11. 5 软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q) 检验,检验水准为0.05。2 结果cyclinE的表达 皮肤炎症病变组: 皮肤炎症病变内可见少量的棕黄色颗粒, cyclinE表达弱或无表达;皮肤淋巴瘤组: 皮肤淋巴瘤内可见密集分布的棕黄色颗粒，cyclinE表达强。图像分析结果显示：皮肤炎症病变组cyclinE表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.02560.0014和0.02680.0020;皮肤淋巴瘤组cyclinE表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.84730.0087和0.79670.006。皮肤炎症病变组与皮肤淋巴瘤组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。见表1。表1 皮肤炎症病变组与皮肤淋巴瘤组cyclinE表达的平均光密度和阳性面积率注：皮肤淋巴瘤组与皮肤炎症病变组比较,* P<0.05。3 讨论在恶性淋巴瘤与假性淋巴瘤的淋巴结外病变中, 皮肤是最常受侵犯的器官, 虽然皮肤淋巴瘤(Cutancous Lylmphoma，CL)在某些方面比较特殊, 但仍属于淋巴瘤一类疾病5。皮肤淋巴瘤分为原发性和继发性，原发性皮肤淋巴瘤(Priary Cutancous Lymphoma，PCL)应明确只限于皮肤，自诊断后至少6个月以内，无任何可以检测出的皮肤以外受累的证据6，7。继发性皮肤淋巴瘤(secondary Cutancous Lymphoma， SCL)为淋巴瘤全身表现的一部分。皮肤可以是惟一受累部位,也可以是系统性病变之一。有些皮肤淋巴瘤,如蕈样肉芽肿,只发生于皮肤,有些皮肤淋巴瘤与淋巴结发生的同类型肿瘤具有相似的组织学表现,但在免疫表型、遗传基因型、临床生物学表现诸方面却显示相当的差别8。近年来，CL的发病率逐年增加，PCL在结外恶性淋巴瘤(Malignant，Lymphoma ，ML)中的发病率仅次于原发于胃肠道的淋巴瘤，居第2位。CL的发生、发展与其它肿瘤一样是一个多因素参与的复杂过程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活、多种细胞因子的激活、病源微生物的感染等9，10。肿瘤的发生、发展与细胞周期控制的分子机制联系紧密。对细胞周期调控的研究使人们认识到其核心是细胞周期蛋白激酶(cyclin dependenth，CDKs)的时相性激活，它们通过对相应底物磷酸化，趋使着细胞完成细胞周期。这些蛋白激酶的时相性激活，依赖于一类呈细胞周期特异性表达，累积与分解的蛋白质，称之为细胞周期素(cyclins)1113。cyelins的时相起伏(即细胞周期特异性的cyclins合成与降解)是细胞周期正常运行的基本前提。CychnE(细胞周期素E)是细胞G1周期素之一，在细胞增殖方面起着重要作用14。研究已表明CychnE参与肿瘤的发生发展过程，在乳腺癌、卵巢癌、结肠癌及胃癌中表达增高，并与预后有关15，16。本实验采用免疫组织化学方法对CyclinE在40例皮肤淋巴瘤以及皮肤炎症病变中的表达进行了检测，本实验结果显示：CyclinE在皮肤淋巴瘤组的表达明显高于皮肤炎症病变(P<0.05)，因此，我们认为cyclin E的异常表达可能导致细胞周期G1/S检测点功能异常,细胞增殖活跃,参与皮肤淋巴瘤的发生和发展。cyclin E的异常表达在皮肤淋巴瘤的发生发展过程中起着重要作用。cyclin E 在临床上作为一种诊断及判断预后指标或联合指标,可辅助临床工作者的诊治工作。所以进一步研究cyclin E 抗体能否阻止培养的皮肤淋巴瘤细胞的增殖及其作用机制,将为防治皮肤淋巴瘤提供新的思路。【参考文献】 1 Leroy S , Dubois S , Tenaud I , et al. 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